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简论骨髓慢病毒介导SOX9基因转染骨髓间充质细胞实验

最后更新时间:2024-03-24 作者:用户投稿原创标记本站原创 点赞:7335 浏览:22140
论文导读:
摘要:目的:构建携带小鼠S0X9基因的慢病毒载体,体外转染小鼠骨髓间充质细胞,观察小鼠SOX9基因在小鼠间充质细胞中的表达。办法:以含有小鼠SOX9基因的质粒提取总RNA,使用RT-PCR办法扩增目的基因。连接目的基因与经Age-I酶切线性化的慢病毒载体,转化体会态的大肠杆菌对质粒进行扩增,筛出阳性转化子,经293T细胞包装,收集病毒后,通过基因测序和限制性核酸内切酶酶切的办法对质粒进行鉴定。Lenti-SOX9-EGFP体外转染小鼠骨髓间充质细胞,使用倒置荧光显微镜观察转染是否成功,并通过流式细胞仪测定转染效率。同时使用RT-PCR和Westernblot检测小鼠SOX9基因的表达。结果:成功构建了携带SOX9基因慢病毒载体,Lenti-SOX9-EGFP能高效转染小鼠骨髓间充质细胞。RT-PCR和Western blot检测显示经SOX9基因转染的小鼠骨髓间充质细胞表达目的基因产物。结论:使用慢病毒介导SOX9基因成功地转染小鼠骨髓间充质细胞,而且SOX9基因在小鼠骨髓间充质细胞中得到表达,这为SOX9修复软骨损伤的进一步探讨奠定了基础。关键词:SOX9论文慢病毒论文骨髓间充质细胞论文
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Abstract6-8
前言8-9
材料与办法9-12
结果12-13
附图13-17
讨论17-18
结论18-19
参考文献19-21
综述21-30
参考文献26-30
个人简历30-31
致谢31