探索脂蛋白重组载脂蛋白B100对奶牛脂肪代谢调控作用

论文导读：
摘要：本探讨利用现代临床检验技术及分子生物学实验技术，对围产期高产和低产奶牛的部分血液生化指标进行了比较浅析，初步探讨了高产健康奶牛与酮病及亚临床酮病对奶牛产量的影响，探讨了在不同情况下与围产期酮病、脂肪肝发生密切相关的载脂蛋白B100在血液中的含量。克隆了牛载脂蛋白B100基因，构建了载脂蛋白B100表达载体，进行了大肠杆菌的原核表达；并且证明了表达的重组载脂蛋白B100具有较好的生物学活性。运用荧光定量RT-PCR策略，运用所表达的重组载脂蛋白B100，进行了动物实验，探讨了载脂蛋白B100对脂肪代谢关键受体VLDLR和LDLR mRNA表达水平调控作用，为以细胞因子水平寻找围产期奶牛能量代谢负平衡的发生机制，以及运用现代生物学手段防治该类疾病的新策略进行了实验探讨。载脂蛋白B100基因的克隆与序列浅析表明，我们获得的747bp目的基因与GenBank中牛载脂蛋白B100基因的编码序列相比较，同源性为100%，证明所克隆的基因序列是完全正确的。大肠杆菌原核表达实验表明，载脂蛋白B100基因被正确整合到了受体菌GS115的基因组上，牛重组载脂蛋白B100成功实现分泌表达。建立了VLDLR和LDLR mRNA荧光定量RT-PCR策略，荧光定量RT-PCR策略灵敏度高、准确性好、稳定性强，初步运用于VLDLR和LDLR mRNA表达水平的定量浅析。动物实验表明载脂蛋白B100对脂肪细胞和肝细胞VLDLR和LDLR mRNA的表达具有显著的上调作用。ApoB100通过对VLDLR和LDL RmRNA表达的上调来推动肝脏脂肪代谢产物VLDL和LDL以肝脏向外周组织转运，以而降低肝脏脂肪沉积。关键词：奶牛论文载脂蛋白B100论文极低密度脂蛋白受体论文低密度脂蛋白受体论文原核表达论文
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中文摘要6-8
Abstract8-16
第一篇 文献综述16-40
第一章 奶牛围产期能量代谢的特点16-30
1 围产期奶牛的生理学特点17-19
2 围产期奶牛能量负平衡的发病机制19-21
3 围产期奶牛能量负平衡产生的后果21-28
4 结语28-30
第二章 载脂蛋白 B100 的探讨进展30-40
1 脂蛋白的种类30-33
2 脂蛋白的生理功能33-34
3 载脂蛋白 B34-36
4 载脂蛋白 B100 的探讨36-38
5 结语38-40
第二篇 探讨内容40-88
第一章 高低产奶牛血浆载脂蛋白 B100 含量的转变40-43
1 材料与策略40-41
2 结果41
3 讨论41-42
4 小结42-43
第二章 奶牛载脂蛋白 B100 基因的克隆与序列浅析43-51
1 材料与策略43-46
2 结果46-49
3 讨论49-50
4 小结50-51
第三章 奶牛载脂蛋白 B100 的原核表达及鉴定51-59
1 材料与策略51-54
2 结果54-57
3 讨论57-58
4 小结58-59
第四章 奶牛脂肪 VLDLR 和LDLR mRNA 荧光定量PCR 检测策略的建立59-70
1 材料与策略59-64
2 结果64-69
3 讨论69
4 小结69-70
第五章 重组奶牛 ApoB100 对犊牛体外培养脂肪细胞和肝细胞VLDLRmRNA、LDLRmRNA 表达水平的影响70-82
1 材料和策略71-74
2 结果74-80
3 讨论80-81
4 小结81-82
第六章 重组 ApoB100 对围产期奶牛血脂含量和脂肪组织 VLDLRmRNA、LDLR mRNA 表达水平及活性的影响82-88
1 材料与策略83-84
2 结果84-85
3 讨论85-87
4 小结87-88
结论88-89
参考文献89-102
附录102-116
攻读博士期间发表的学术论文及其它成果116-117
致谢117