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简析致病性运用生物反应器生产高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原技术工艺

最后更新时间:2024-01-23 作者:用户投稿原创标记本站原创 点赞:10048 浏览:29470
论文导读:P-PRRS),俗称高致病性猪蓝耳病,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)变异株引起的猪的高度接触性传染病,目前仍没有十分有效的药物和治疗策略。而该病在治疗历程中的高复发率也成为该病防制的重要难题。采取高质量的疫苗进行积极有效的预防接种,仍是该病预防制约最为重要
摘要:高致病性猪繁殖与呼吸综合征(highly pathogenic porcine reproductive andrespiratory syndrome,HP-PRRS),俗称高致病性猪蓝耳病,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)变异株引起的猪的高度接触性传染病,目前仍没有十分有效的药物和治疗策略。而该病在治疗历程中的高复发率也成为该病防制的重要难题。采取高质量的疫苗进行积极有效的预防接种,仍是该病预防制约最为重要的手段之一。由此,疫苗质量的优劣直接决定着免疫接种的成败。而抗原制备是疫苗制造的首要环节,无疑已是决定疫苗质量的关键因素。目前国内绝大多数动物疫苗的生产,包括高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗仍采取传统的转瓶生产工艺。这种建立在上世纪五、六十年代的落后工艺生产出来的疫苗体现出产品批次间差别大、质量稳定性差、不良反应大、抗原滴度低、免疫效果差等缺陷,大大降低了我国动物疫苗产品的质量,已显著不能满足动物防疫的客观需要。本探讨采取细胞生物反应器技术生产PRRS病毒抗原,并对培养历程中的各项技术条件进行优化,以而总结出一套较为合理的生产工艺,为PRRSV的大规模培养提供可靠的参考数据。本课题的探讨内容主要包括以下三个方面:第一部分:Marc145-LD1细胞培养特性和HP-PRRSV增殖水平探讨。将正常生长的Marc145-LD1细胞分别在克氏瓶和3L转瓶中进行单层培养,观察细胞生长状态。按照一定细胞接种量,分别取24h和72h对细胞计数,计算细胞倍增时间。按常规病毒接种量,确定病毒感染复数(MOI)。探讨HP-PRRSV在转瓶中增殖时,病毒滴度随培养时间的变化规律,确定最佳病毒收获时间。第二部分:Marc145-LD1细胞在反应器中培养特性和HP-PRRSV增殖水平探讨。运用激流式生物反应器培养Marc145-LD1细胞增殖HP-PRRSV,整个历程采取流加工艺,补充细胞生长和病毒增殖需要的能量物质-葡萄糖(glucose)。探讨Marc145-LD1细胞在反应器中生长时,葡萄糖消耗量随培养时间的变化规律,确定最佳病毒接种时间。接种病毒后,探讨细胞产毒水平与培养时间的联系,确定最佳病毒收获时间。第三部分:PRRSV检测策略探讨。为确保PRRSV的有着,以分子水平上运用RT-PCR技术对病毒GP5基因全序列进行扩增,并对电泳图谱进行浅析,以确定培养的病毒为PRRSV。关键词:高致病性猪繁殖与呼吸综合征论文生物反应器论文细胞培养论文病毒论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。中文摘要4-6
Abstract6-10
英文缩略词表10-12
第一篇 文献综述12-28
1 猪繁殖与呼吸综合征概述12-21

1.1 病原学13-16

1.2 流行病学16-17

1.3 临床症状与病理变化17-18

1.4 诊断或检测技术18-19

1.5 防制技术与疫苗探讨19-21

2 大规模动物细胞培养技术概述21-26

2.1 细胞生物反应器的种类、运用和进展21-22

2.2 动物细胞大规模培养技术22-26

3 探讨目的与作用26-28
第二篇 试验探讨28-51
试验一 Marc145-LD1 细胞单层细胞培养特性和 HP-PRRSV 增殖水平探讨28-36
1 材料28-30
2 策略30-34
3 讨论34-35
4 小结35-36
试验二 Marc145-LD1 细胞在反应器中的培养特性和 HP-PRRSV增殖水平探讨36-47
1 材料36-38
2 策略38-40
3 结果40-44
4 讨论44-45
5 小结45-47
试验

三、HP-PRRSV 检测47-51

1 材料47
2 策略47-49
3 结果49
4 讨论49-50
5 小结50-51
结论51-52
参考文献52-59
导师介绍59-61
作者介绍61-62
在学期间所取得的科研成果62-63
致谢63