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探讨周围神经槲皮素、水蛭素、桂皮醛及其复方对高糖致大鼠DRGn细胞凋亡影响任务书

最后更新时间:2024-03-20 作者:用户投稿原创标记本站原创 点赞:9721 浏览:26326
论文导读:升高(P0.01或P0.05);与阳性对照药α-硫辛酸(ALA)组对比均减低(P0.01或P0.05);不同剂量Q、H及C抑制高糖条件下DRGn细胞活性下降的意义具有量效依赖性。2.中药单体Q、H及C可减少高糖条件下DRGn细胞凋亡及凋亡相关指标的升高:HG组细胞的细胞凋亡率及活化的Caspase-3蛋白、Caspase-3mRNA表达与CON组对比均升高(P0.01)。在高糖条件
摘要:[探讨目的]以细胞及分子水平,研究中药单体槲皮素、水蛭素、桂皮醛极为复方对高糖条件培养大鼠脊髓背根神经节细胞氧化应激及细胞凋亡的影响。[探讨办法]1.以孕15天的SD胎鼠取材制备脊髓背根神经节神经元(dorsal root gangpon neuron, DRGn),采取胰蛋白酶消化法、Neurobasal无血清神经元专用培养基+B27添加剂+神经生长因子(nerve growth factor, NGF)培养基原代培养,经密度梯度离心法、差速贴壁法及有丝分裂抑制剂进行细胞纯化,抗MAP-2抗体进行细胞鉴定。2.通过MTT法摸索槲皮素(Q)、水蛭素(H)及桂皮醛(C)减少高糖条件下DRGn细胞凋亡的最适浓度及干预时间点。依据各单体高(Q3、H3、C3)、中(Q2、C2、H2)、低(Q1、H1、C1)剂量,分别按照两两组合、三三组合的模式进行组合,摸索最优组合:槲皮素+水蛭素(QH)组合、槲皮素+桂皮醛(QC)组合、桂皮醛+水蛭素(CH)组合及槲皮素+水蛭素+桂皮醛(QCH)组合。3.采取流式细胞技术检测各组DRGn细胞的活性氧水平、Western Blot和qRT-PCR法检测(?)Nrf-2、HO-1、NF-κB (P65)、IκB-α、pIκB-α IL-6、TNF-α及Caspase-3蛋白及mRNA表达,TUNEL法检测细胞凋亡。[探讨结果]一、中药单体Q、H及C可抑制高糖(45mmol/L)对体外DRGn细胞的损伤:1.中药单体Q、H及C可抑制高糖条件下DRGn细胞活性的下降:高糖(HG)组DRGn细胞活性与正常对照(CON)组对比下降(P0.01)。在高糖条件下,不同剂量Q、H及C组细胞活性与CON组对比均下降(P0.01)但与HG组对比均升高(P0.01或P0.05);与阳性对照药α-硫辛酸(ALA)组对比均减低(P0.01或P0.05);不同剂量Q、H及C抑制高糖条件下DRGn细胞活性下降的意义具有量效依赖性。2.中药单体Q、H及C可减少高糖条件下DRGn细胞凋亡及凋亡相关指标的升高:HG组细胞的细胞凋亡率及活化的Caspase-3蛋白、Caspase-3mRNA表达与CON组对比均升高(P0.01)。在高糖条件下,不同剂量Q、H及C组细胞的细胞凋亡率及活化的Caspase-3蛋白、Caspase-3mRNA表达与CON组对比均升高(P0.01论文导读:P0.01);与ALA组对比均降低(P0.01或P0.05)。HO-1表达与CON组对比均降低(P0.01),与HG组对比均升高(P0.01或P0.05);与ALA组对比均减低(P0.01或P0.05),不同剂量Q、H上调Nrf-2及HO-1表达的意义具有量效依赖性。C未见对该通路有激活意义。二、槲皮素、水蛭素及桂皮醛单体组合可增强单体抑制高糖损伤DRGn细胞的意义1.中药单体组合可
),但与HG组对比均降低(P0.01或P0.05);与ALA组对比均升高(P0.01或P0.05);不同剂量Q、H及C减少高糖条件下DRGn凋亡及凋亡相关指标的意义具有量效依赖性。3.中药单体Q、H及C可抑制高糖条件下DRGn细胞活性氧水平的升高:HG组细胞活性氧水平与CON组对比升高(P0.01)。在高糖条件下,不同剂量Q、H及C组活性氧水平与CON组对比均升高(P0.01);但与HG组对比均降低(P0.01);与ALA组对比均升高(P0.01);不同剂量Q、H及C清除活性氧的意义具有量效依赖性。4.中药单体Q、C及H高剂量组(H3)可抑制高糖条件下DRGn细胞炎性通路NF-κB/IL-6、TNF-a的激活:HG组细(?)(?)NF-κB (P65)、IκB-α、pIκB-α IL-6及TNF-a表达与CON组对比均升高(P0.01)。在高糖条件下,不同剂量Q、H及C组的NF-κB (P65)、IκB-α、 pIκB-α IL-6及TNF-a表达与CON组对比均升高(P0.01或P0.05);但不同剂量的Q、C组及H3组与HG组对比降低(P0.01或P0.05);Q3、C3组与ALA组对比降低(P0.01或P0.05);不同剂量Q及C抑制NF-κB(P65)、IκB-α、pIκB-α IL-6及TNF-a表达的意义具有量效依赖性。5.中药单体Q及H可激活自身抗氧化应激通路Nrf-2/HO-1:HG组细胞Nrf-2、HO-1蛋白及mRNA表达与CON组对比均降低(P0.01)在高糖条件下,不同剂量Q、H组Nrf-2表达较CON、HG组升高(P0.01);与ALA组对比均降低(P0.01或P0.05)。HO-1表达与CON组对比均降低(P0.01),与HG组对比均升高(P0.01或P0.05);与ALA组对比均减低(P0.01或P0.05),不同剂量Q、H上调Nrf-2及HO-1表达的意义具有量效依赖性。C未见对该通路有激活意义。二、槲皮素、水蛭素及桂皮醛单体组合可增强单体抑制高糖损伤DRGn细胞的意义1.中药单体组合可增强中药单体抑制高糖条件下DRGn细胞活性下降的意义:在高糖条件下,单体及单体组合组的细胞活性与CON组对比均降低(P0.01或P0.05),与HG组对比均升高(P0.01);与ALA组对比,Q3、H3、C3、QH、QC及CH组细胞活性降低(P0.01论文导读:
或P0.05),QCH组与ALA组无差别;与QCH组对比,Q3、H3、C3、QH、QC及CH组均降低(P0.01);单体及两两组合间对比无差别。2.中药单体组合可增强中药单体减少高糖条件下DRGn细胞凋亡及凋亡相关指标升高的意义:在高糖条件下,单体及单体组合组的细胞凋亡率及活化的Caspase-3蛋白、Caspase-3mRNA表达与CON组对比均升高(P0.01或P0.05),与HG组对比均降低(P0.01);与ALA组对比,Q3、H3、C3、QH、QC及CH组均升高(P0.01或P0.05),QCH组与ALA组无差别;与QCH组对比,Q3、H3、C3、QH、QC及CH组均升高(P0.01或P0.05);单体组间对比,Q3组较H3、C3组降低(P0.01或P0.05),H3组较C3组降低(P0.01或P0.05);两两组合间对比,细胞凋亡率方面无差别,活化的Caspase-3蛋白及Caspase-3mRNA表达方面QH、CH组较QC组降低(P0.01),QH组较CH组降低(P0.01);单体与两两组合间对比,Q3组较QH组升高(P0.01或P0.05),与QC、CH组无差别,H3、C3组均较QH、QC、CH组升高(P0.01或P0.05)。3.中药单体组合可增强中药单体抑制高糖条件下DRGn细胞活性氧水平升高的意义:在高糖条件下,Q3、H3、C3、QH、QC及CH组的活性氧水平与CON组对比升高(P0.01),QCH组与CON组无差别;各干预组与HG组对比均降低(P0.01);与ALA组对比,Q3、H3、C3、QH、QC及CH组升高(P0.01),QCH组与ALA组无差别;与QCH组对比,Q3、H3、C3、QH、QC及CH组均升高(P0.01)。单体组间对比,Q3较H3、C3降低(P0.01或P0.05),H3较C3降低(P0.05);两两组合间对比无差别;单体与两两组合间对比,Q3组与QH、QC及CH组无差别,H3组较QH组升高(P0.05),与QC及CH组无差别,C3组较QH、QC组升高(P0.01或P0.05),与CH组无差别。4.中药单体组合可增强中药单体抑制高糖条件下DRGn细胞NF-κB通路激活的意义:(1) NF-κB (P65)、IκB-α、pIκB-α蛋白及NF-κB mRNA表达:在高糖条件下,单体及单体组合组的NF-κB(P65)、IκB-α论文导读:1或P0.05),IκB-α蛋白表达较H3组降低(P0.01),与Q3组无差别;Q3组的NF-κB表达及IκB-α、pIκB-α蛋白表达较H3组降低(P0.01)。两两组合间对比:QC组与QH组对比,NF-κB表达及IκB-α、pIκB-α蛋白表达均降低(P0.01);QC组与CH组对比,NF-κB表达及pIκB-α蛋白表达降低(P0.01或P0.05),IκB-α蛋白表达无差别;CH组与QH组对比,Iκ
、pIκB-α蛋白及NF-κBmRNA表达与CON组对比均升高(P0.01或P0.05);与HG组对比均降低(P0.01或P0.05);与ALA组对比,Q3、C3、QC、CH及QCH组均降低(P0.01或P0.05),H3组的NF-κB、pIκB-α蛋白表达及NF-κBmRNA表达与ALA组无差别,IκB-α蛋白表达升高(P0.05),QH组NF-κB蛋白及mRNA较ALA组表达降低(P0.01),IκB-α及pIκB-α蛋白表达无差别;与QCH组对比,Q3、H3、QH及CH组升高(P0.01或P0.05),C3及QC(?)iNF-κB表达与QCH组无差别,IκB-α及pIκB-α蛋白表达升高(P0.01或P0.05)。单体组间对比:C3组NF-κB表达及pIκB-α蛋白表达较Q3、H3组降低(P0.01或P0.05),IκB-α蛋白表达较H3组降低(P0.01),与Q3组无差别;Q3组的NF-κB表达及IκB-α、pIκB-α蛋白表达较H3组降低(P0.01)。两两组合间对比:QC组与QH组对比,NF-κB表达及IκB-α、pIκB-α蛋白表达均降低(P0.01);QC组与CH组对比,NF-κB表达及pIκB-α蛋白表达降低(P0.01或P0.05),IκB-α蛋白表达无差别;CH组与QH组对比,IκB-α、pIκB-α蛋白表达降低(P0.01或P0.05),NF-κB表达无差别。单体与两两组合间对比:Q3组与QH组NF-κB表达及IκB-α、pIκB-α蛋白表达无差别;与QC组对比,NF-κB表达无差别,IκB-α及pIκB-α蛋白升高(P0.05);与CH组对比,NF-κB表达及pIκB-α蛋白表达无差别,IκB-α蛋白表达升高(P0.05);②H3组与QH、QC、CH组NF-κB表达及IκB-α、pIκB-α蛋白均升高(P0.01);③C3组与QH组对比,NF-κB表达及IκB-α蛋白表达降低(P0.01),pIκB-α蛋白表达无差别;与QC组对比,NF-κB表达及IκB-α蛋白表达无差别,pIκB-α蛋白表达升高(P0.01);与CH组对比无差别。(2)IL-6和TNF-α蛋白及mRNA的表达:在高糖条件下,单体及单体组合组的IL-6、TNF-α蛋白及mRNA表达与CON组对比均升高(P0.01或P0.05);与HG组对比均降低(P0.01或P0.05);论文导读:0.05),IL-6mRNA及TNF-α表达无差别;与QCH组对比:Q3、C3、QH及CH组IL-6表达及TNF-α蛋白表达均升高(P0.01或P0.05),TNF-αmRNA表达无差别,H3组IL-6和TNF-α蛋白及mRNA表达均升高(P0.01或P0.05),QC组IL-6mRNA及TNF-α蛋白表达升高(P0.01或P0.05),IL-6蛋白及TNF-αmRNA表达无差别。单体组间对比,Q3、C3较H3组降低(P0.01或P0
与ALA组对比,Q3、C3、QH、QC、CH及QCH组降低(P0.01或P0.05),H3组IL-6蛋白表达升高(P0.05), IL-6mRNA及TNF-α表达无差别;与QCH组对比:Q3、C3、QH及CH组IL-6表达及TNF-α蛋白表达均升高(P0.01或P0.05), TNF-α mRNA表达无差别,H3组IL-6和TNF-α蛋白及mRNA表达均升高(P0.01或P0.05),QC组IL-6mRNA及TNF-α蛋白表达升高(P0.01或P0.05),IL-6蛋白及TNF-α mRNA表达无差别。单体组间对比,Q3、C3较H3组降低(P0.01或P0.05),C3与Q3组对比,IL-6蛋白表达减低(P0.01),IL-6mRNA及TNF-α表达无差别;两两组合间对比无差别;单体与与两两组合间对比,Q3组IL-6蛋白表达较QH、QC、CH组升高(P0.01),IL-6mRNA及TNF-a表达无差别;C3组与QH、QC及CH组无差别,H3组较QH、QC、CH组升高(P0.01)。5.中药单体组合可增强中药单体对Nrf-2/HO-1通路激活的意义:在高糖条件下,Q3、H3、QH、QC、CH及QCH的Nrf-2蛋白及mRNA与CON组对比均升高(P0.01),HO-1蛋白及mRNA与CON组对比均降低(P0.01或P0.05),C3组Nrf-2及HO-1表达均降低(P0.01或P0.05);Q3、H3、QH、QC、CH及QCH的Nrf-2及HO-1表达与HG组对比均升高,C3组无差别;与ALA组对比,Q3、H3、C3、QH、QC及CH组均降低(P0.01或P0.05),QCH组Nrf-2表达较ALA组无差别,HO-1表达升高(P0.05);与QCH组相比,Q3、H3、C3、QH、QC及CH组均降低(P0.01或P0.05)。单体组间对比,Q3、H3组较C3组升高(P0.01),Q3较H3组升高(P0.01);两两组合间对比,QH组的Nrf-2及H0-1表达与CH组对比升高(P0.01),QH组与QC组对比Nrf-2mRNA(?)及HO-1表达升高(P0.01或P0.05),Nrf-2蛋白表达无差别,QC组与CH组对比,Nrf-2蛋白表达升高(P0.01),Nrf-2mRNA及HO-1表达无差别。单体与两两组合间对比,Q3组与QH组对比,Nrf-2表达降低(P0.01)论文导读:推广运用从及中药单体防治DPN提供实验依据。经检索国内外文献未见相关报道。关键词:糖尿病周围神经病变论文氧化应激论文细胞凋亡论文背根神经节论文中药单体论文本论文由www.7ctime.com,需要论上一页1234567下一页
,HO-1表达无差别,与QC组对比,Nrf-2蛋白表达降低(P0.01),Nrf-2mRNA表达及HO-1表达无差别,与CH组对比无差别;H3、C3组与QH、QC、CH组对比均降低(P0.01或P0.05)。[结论]1.高糖可明显抑制(?)DRGn细胞活性,明显增多DRGn细胞凋亡率,增多I)RGn活性氧水平,降低Nrf-2/HO-1mRNA及蛋白的表达,上调NF-κB(P65)、IL-6、TNF-a及Caspase-3的mRNA及蛋白表达。2.槲皮素、水蛭素和桂皮醛三个单体均能够提升高糖条件下DRGn细胞的细胞活性,下调Caspase-3水平,减少DRGn细胞凋亡率,槲皮素意义优于水蛭素组和桂皮醛组,而水蛭素组意义优于桂皮醛组。3.槲皮素、水蛭素和桂皮醛均能降低高糖条件下DRGn细胞的ROS水平,槲皮素意义优于水蛭素,水蛭素意义优于桂皮醛;槲皮素和水蛭素可上调Nrf-2/HO-1通路,槲皮素意义优于水蛭素;槲皮素、桂皮醛可抑制NF-κB通路,桂皮醛意义优于槲皮素。4、槲皮素、水蛭素和桂皮醛组合能够明显提升高糖条件下DRGn细胞的细胞活性,下调Caspase-3水平,减少DRGn细胞凋亡率,其中槲皮素、水蛭素和桂皮醛三个单体组合意义优于单体单独干预组及两两组合组,与ALA组无统计学差别。5.槲皮素、水蛭素和桂皮醛三个单体组合在清除活性氧,上调Nrf-2/HO-1,抑制NF-κB通路激活的意义优于单体单独干预组及两两组合组;其抑制(?)NF-κB通路激活的意义优于ALA组,上调Nrf-2/HO-1意义与ALA组无显著差别。6.槲皮素、桂皮醛、水蛭素单体极为组合可清除活性氧,上调Nrf-2/HO-1通路,抑制NF-κB通路激活,下调TNF-a和IL-6的表达,下调Caspase-3水平,减少DRGn细胞的凋亡,以而起到抑制高糖条件对于DRGn细胞损伤的意义。[创新点]本课题运用细胞模型,以细胞分子水平研究槲皮素、桂皮醛、水蛭素中药单体及组合在DPN发病历程中干预氧化应激及炎性通路致细胞凋亡的治疗效应;为中药复方的推广运用从及中药单体防治DPN提供实验依据。经检索国内外文献未见相关报道。关键词:糖尿病周围神经病变论文氧化应激论文细胞凋亡论文背根神经节论文中药单体论文
本论文由www.7ctime.com,需要论论文导读:84第三节桂皮醛对高糖条件下大鼠DRGn细胞凋亡的影响84-100讨论100-108结论108-109第三部分槲皮素、水蛭素、桂皮醛单体组合对高糖条件下大鼠DRGn细胞凋亡的影响109-139材料109-110办法110-112结果112-134讨论134-138结论138-139参考文献139-148附图148-156综述1156-166参考文献161-166综述2166-176参考文献172-176个人简历
文服务可从关系人员哦。英文缩略词表4-6
中文摘要6-12
Abstract12-16
前言16-18
第一部分 高糖条件损伤大鼠DRGn细胞模型的建立18-31
材料18-21
办法21-24
结果24-27
讨论27-30
结论30-31
第二部分 槲皮素、水蛭素、桂皮醛单体对高糖条件下大鼠DRGn细胞凋亡的影响31-109
材料31-36
办法36-46
结果46-100
第一节 槲皮素对高糖条件下大鼠DRGn细胞凋亡的影响46-68
第二节 水蛭素对高糖条件下大鼠DRGn细胞凋亡的影响68-84
第三节 桂皮醛对高糖条件下大鼠DRGn细胞凋亡的影响84-100
讨论100-108
结论108-109
第三部分 槲皮素、水蛭素、桂皮醛单体组合对高糖条件下大鼠DRGn细胞凋亡的影响109-139
材料109-110
办法110-112
结果112-134
讨论134-138
结论138-139
参考文献139-148
附图148-156
综述1156-166
参考文献161-166
综述2166-176
参考文献172-176
个人简历176-177
致谢177-178