阐述真菌外周血CD8+T细胞亚群对ICU重症患者侵袭性肺部真菌感染预测价值

论文导读：7-dayCD8+，CD8+CD28+，CD8+CD38+hundredpercentcomparedwiththecontrolgroup，thedifferencewerestatisticallysignificant（P<0.05）.CD8+，CD8+CD28+，CD8+CD38+rightIPFIallhadpredictivevalue（P<0.05），inwhichtheCD8+CD28+highpredictivevalue，sensitivityandspecificitywere0.7
[摘要]目的 探讨外周血CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD38+对ICU重症患者侵袭性肺部真菌感染的预测价值。 方法 选择IPFI、非IPFI肺部感染及无肺部感染的ICU患者分为IPFI组、肺炎组和非肺炎组，采用流式细胞仪技术检测外周血CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD38+水平。 结果 低蛋白血症、糖尿病、慢性肺阻塞性肺疾病、呼吸衰竭、2种以上抗生素、糖皮质激素、免疫抑制剂、机械通气等均为重症患者IPFI危险因素（P < 0.05），其中慢性肺阻塞性肺疾病、呼吸衰竭、糖皮质激素、免疫抑制剂等为重症患者IPFI独立危险因素（P < 0.05）。肺炎组和IPFI组第1、3、7天的CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD38+百分率与对照组比较，差异均有统计学意义（P < 0.05）。CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD38+对IPFI均具有预测价值（P <0. 05），其中CD8+CD28+的预测价值较高，敏感度和特异度分别为0.72和0.83。结论 外周血CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD38+T细胞水平改变能够反应IPFI进展过程，CD8+CD28+T细胞对IPFI具有较可靠的预测价值。
[关键词] 侵袭性肺部真菌感染；CD8+T细胞；CD8+CD28+T细胞；CD8+CD38+T细胞
[] B [文章编号] 1673-9701（2013）32-0032-03
Predictive value of peripheral blood CD8+T cell subsets in ICU patients with severe invasive pulmonary fungal infections
CHEN Jiandong
ICU， Shaoxing City People's Hospital in Zhejiang Province， Shaoxing 312000 ， China
[Abstract] Objective To investigate the predictive value of peripheral blood CD8+， CD8+ CD28+， CD8+ CD38+ in ICU patients with severe invasive pulmonary fungal infections. Methods IPFI， non IPFI lung infection and infection in ICU patients without lung were divided into IPFI group， pneumonia group and non-pneumonia group， flow cytometry was used to detect peripheral blood CD8+， CD8+ CD28++， CD8+ CD38+ levels. Results Hypoalbuminemia， diabetes， chronic pulmonary obstructive pulmonary disease， respiratory failure， two or more antibiotics， corticosteroids， immunosuppressive agents， mechanical ventilation were risk factors in patients with severe IPFI （P < 0.05）， in which chronic pulmonary obstructive pulmonary disease， respiratory failure， corticosteroids， immunosuppressive agents such as patients with severe IPFI independent risk factors（P < 0.05）. Pneumonia group and IPFI group on 1，3，7-day CD8+， CD8+ CD28+， CD8+ CD38+ hundred percent compared with the control group， the difference were statistically significant（P <0.05）. CD8+， CD8+ CD28+， CD8+ CD38+ right IPFI all had predictive value （P < 0.05）， in which the CD8+ CD28+ high predictive value， sensitivity and specificity were 0.72 and 0.83， respectively. Conclusion Peripheral blood CD8+， CD8+ CD28+， CD8+ CD38+ level changes could reflect the occurrence and development IPFI， CD8+ CD28+ right IPFI with a more reliable predictive value.
[Key words] Invasive pulmonary fungal infection； CD8+ T cells； CD8+ CD28+T cells； CD8+ CD38+ T cells
肺部感染是重症医学科（intensive care unit，ICU）患者最常见的一种医院感染，其中侵袭性肺部真菌感染（invasive pulmonary fungal infections，IPFI）是由真菌侵袭气管支气管和肺部引起的真菌感染性疾病，导致肺部炎症、肉芽肿，甚至坏源于：论文参考文献www.7ctime.com
死，还可通过血行播散，加重ICU患者病情，是影响ICU患者预后的重要原因之一。T淋巴细胞是机体抗真菌的主要免疫效应细胞，CD8+T细胞亚群在免疫缺陷性疾病中的表型具有参考价值。本研究分析IPFI发生相关因素，探讨CD8+T细胞亚群在ICU重症患者IPFI的发展过程中的作用机制及其对IPFI的预测价值，为IPFI临床早期诊断提供参考。论文导读：
1资料与方法

1.1一般资料

选择2009年1月～2013年4月在我院ICU合并IPFI的患者63例为IPFI组，男32例，女31例，年龄28～85岁，平均 （58.93±11.26）岁，急性生理和慢性健康评分（APACHE）Ⅱ[3]10～23分；选择同期合并非IPFI肺部感染的患者60例为肺炎组，其中男33例，女27例，平均年龄（56.93±12.35）岁，APACHEⅡ11～22分；两组患者均经痰液及其他体液组织标本涂片和培养、组织病理学检查、影像学检查确诊；另选择同期无肺部感染的患者60例为非肺炎组，其中男35例，女25例，平均年龄（61.29±11.84）岁，APACHEⅡ<10分。均排除免疫系统疾病史，入院<72 h。

1.2实验室检验

IPFI组和肺炎组于纳入研究第1、3、7天，非肺炎组于纳入研究第1天抽空腹外周静脉血。采用荧光免疫组织化学法，以荧光单克隆抗体标记CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD38+，流式细胞仪技术检测CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD38+及百分比。荧光单克隆抗体及试剂盒均购自上海江莱生物科技有限公司。

1.3研究方法

收集与并发肺部感染有关的临床资料，包括合并低蛋白血症、合并糖尿病、合并慢性阻塞性肺疾病、合并呼吸衰竭、抗生素使用、糖皮质激素使用、免疫抑制剂使用、机械通气等。

1.4诊断标准

IPFI诊断标准依据2006年版《IPFI诊断标准与治疗原则》[4]，非IPFI为真菌涂片和培养3次以上均为阴性。

1.5统计学处理

数据采用SPSS18.0进行统计学处理，计数资料用相对数表示，采用χ2进行检验，计量资料用（x±s）表示，采用t检验、ANOVA、SNK-q检验，采用受试者工作特征（ROC）曲线检验指标早期预测IPFI的价值，用Logistic回归分析进行危险因素分析。P < 0.05为差异有统计学意义。
2结果

2.1 IPFI危险因素分析

低蛋白血症、糖尿病、慢性阻塞性肺疾病、呼吸衰竭、2种以上抗生素、糖皮质激素、免疫抑制剂、机械通气等均为重症患者IPFI危险因素（P < 0.05），其中慢性阻塞性肺疾病、呼吸衰竭、糖皮质激素、免疫抑制剂等为重症患者IPFI独立危险因素（P < 0.05），见表1、表2。
表1 重症患者IPFI危险因素分析
表2 重症患者IPFI独立危险因素分析

2.2三组CD8+T细胞亚群分析

肺炎组和IPFI组第1、3、7天的CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD38+T细胞百分百与对照组比较，差异均有统计学意义（P < 0.05），其中CD8+T细胞和CD8+CD38+T细胞百分百均表现为第1、3天显著升高，第7天回落，CD8+CD28+T细胞百分比则为第1、3天显著降低，第7天回升，见表3。
表3 三组CD8+T细胞亚群计数比较（x±s，%）
注：F1为肺炎组和IPFI组第1天与对照组比较，F2为肺炎组和IPFI组第2天与对照组比较， F3为肺炎组和IPFI组第3天与对照组比较； q1为肺炎组和IPFI组第1天比较， q2为肺炎组和IPFI组第2天， q3为肺炎组和IPFI组第3天与对照组比较，*P < 0.05

2.3 CD8+T细胞亚群对IPFI的预测评估

CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD38+T细胞对IPFI均具有预测价值（P < 0.05），其中CD8+CD28+T细胞的预测价值较高，曲线下面积最大，界值的敏感度和特异度均最高，分别为0.72和0.83，见表4。
3讨论
真菌寄生、过敏、侵袭是真菌感染性疾病发生的原因，而患者局部或全身抵抗力下降是重要的宿主因素[5]。本研究对IPFI危险因素的单因素分析结果显示，低蛋白血症、糖尿病、慢性阻塞性肺疾病、呼吸衰竭、2种以上抗生素、糖皮质激素、免疫抑制剂、机械通气等均为重症患者IPFI危险因素（P < 0.05），包括营养状况、肺部基础疾病、抗生素耐药、呼吸道侵入性操作以及与免疫抑制相关的因素均可能导致患者支气管肺部或全身抵抗力下降，呼吸道屏障被破坏，产生有利于内源性或外源性真菌滋生的内环境[6，7]。而多因素Logistic回归分析结果显示，慢性肺阻塞性肺疾病、呼吸衰竭、糖皮质激素、免疫抑制剂为重症患者IPFI独立危险因素（P < 0.05），故本研究认为，决定ICU重症患者发生IPFI的主要原因为肺部基础疾病和免疫抑制。慢性阻塞性肺疾病患者呼吸道长期处于高敏状态，极易受到细菌、真菌等病原体的侵袭，诱发急性加重，由于通气功能减弱、二氧化碳潴留，呼吸道内环境中存在一定程度的缺氧状态，T细胞释放过氧化物减少，合并呼吸衰竭则加剧了缺氧状态，机体免疫功能下降，使真菌得以大量繁殖滋生，引发严重感染[8，9]。前两组患者的免疫系统功能都同时存在明显下降，糖皮质激素和免疫抑制剂的应用导致外源性机体免疫功能抑制，降低抵抗力，但两者都是重症患者常用的治疗方式，以减轻体内的剧烈的炎症反应造成的损害，却增加了真菌感染的风险。
以上结果可见，免疫功能下降和免疫抑制在IPFI发生和发展过程中起重要作用。CD8+T细胞及其亚群是重要的免疫效应细胞，在肿瘤、病毒等靶细胞有直接杀伤作用，介导Th1免疫反应，其与CD4+T细胞处于动态平衡，两者比值反映了机体的免疫功能状态，人类免疫缺陷病毒（HIV）感染的患者CD4+/ CD8+显著下降，CD8+比例升高[10，11]。本研究结果显示，第1、3天发生肺部感染的两组患者，CD8+T细胞百分比均呈上升状态，而IPFI组升高更为显著，呈现与HIV感染类似的免疫低下状态，表明IPFI患者机体免疫功能和抵抗力低下，而免疫抑制治疗可能导致T细胞的转化障碍，真菌感染则直接导致宿主免疫细胞功能抑制[12，13]。CD28+主要表达于多数T淋巴细胞膜上，与B7-1和B7-2结合提供T淋巴细胞活化的第二信号，启动和保持T淋巴细胞的应答，是重要的杀伤效应细胞。多种肿瘤患者组织中论文导读：+CD38+T细胞百分比均呈上升状态，较肺炎组显著，表明在此阶段IPFI患者真菌载量增加，病情处于进展期，而机体免疫功能和免疫应答效应均处于进行性下降的状态，持续加重病情。第7天的检查结果，IPFI组和肺炎组各指标均呈恢复状态，CD8+T细胞和CD8+CD38+T细胞百分比回落，患者经治疗后免疫功能恢复，真菌载量降低，CD8+CD28+T细胞回升，免
CD8+CD28+T细胞减少，可能与肿瘤细胞的免疫逃逸作用有关[14]。本研究结果显示，第1、3天发生肺部感染的两组患者CD8+CD28+T细胞百分比均呈下降状态，IPFI组下降幅度较肺炎组大，表明IPFI患者的CD8+CD28+T细胞可能存在显著缺陷。有研究显示，CD28在T淋巴细胞表达降低是严重感染患者死亡的独立危险因素之一[15]。CD38+是T淋巴细胞标志性的膜分子，反映免疫细胞活化程度，表达水平与感染的病原体载量有关，第1、3天发生IPFI组患者CD8+CD38+T细胞百分比均呈上升状态，较肺炎组显著，表明在此阶段IPFI患者真菌载量增加，病情处于进展期，而机体免疫功能和免疫应答效应均处于进行性下降的状态，持续加重病情。第7天的检查结果，IPFI组和肺炎组各指标均呈恢复状态，CD8+T细胞和CD8+CD38+T细胞百分比回落，患者经治疗后免疫功能恢复，真菌载量降低，CD8+CD28+T细胞回升，免疫细胞对真菌的杀伤作用得到一定程度恢复，临床上患者病情趋于好转。IPFI与非IPFI感染肺炎患者比较，其免疫功能缺陷状态更为显著。 源于：毕业设计论文范文www.7ctime.com
基于对CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD38+T细胞在IPFI患者病情进展过程中的表型分布，可推测三者可能具有IPFI早期诊断的意义。通过ROC曲线检验，结果显示，三者对IPFI均有预测价值，但CD8+T细胞的敏感度和特异度均不高，仅为0.60和0.62，存在较大程度的假阳性和假阴性可能，CD8+CD38+T细胞反应的病原体载量状态，特异度受到其他病原体的影响可能存在差异，而CD8+CD28+T细胞百分比为13.85%时则对IPFI具有较高的敏感度和特异度，可以作为IPFI早期诊断的参考指标之一。
综上所述，IPFI发生和发展与患者免疫功能低下有关，CD8+T细胞亚群呈现异常分布，能够增加IPFI病情的进展变化[16，17]，监控患者外周血CD8+T细胞亚群将有助于早期发现患者的免疫功能异常状态，从而预防和判断IPFI发生，对临床具有一定的参考价值。
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（收稿日期：2013-08-18）