浅谈胰岛小鼠胰岛干细胞分离培养、鉴定及其生物学功能怎样

论文导读：
摘要：使用胰腺干/祖细胞治疗糖尿病受到科研人员的高度关注，目前虽然已经发现了几种具有胰腺干/祖细胞特性的细胞，但是还没有一种真正作用上的胰腺干/祖细胞被大家所公认，由此确定胰腺干/祖细胞所特有的标记成为发现胰腺干/祖细胞的主要探讨方向。小鼠的Nestin基因是由5945bp组成的，表达一种中间丝蛋白，与Dein和Vimentin等同源，最早被发现在神经干细胞中表达，并被认为是神经干细胞的分子标记，将以大脑分离出来的nestin~+细胞在体外培养，其可从分化为神经元、胶质细胞等，说明了其具有干细胞特性。在胚胎发育早期，神经细胞和胰腺细胞共同表达许多基因，其中包括Isl-1，Brain-4，Pax4，Beta2/NeuroD和IDX-1等。由此nestin可能也是胰腺干/祖细胞的标记分子。本实验使用胆总管胶原酶灌注法分离出ICR小鼠的胰岛细胞团，并探讨胰岛细胞团内nestin~+细胞的特性，结果如下：（1）在本实验室条件下，胆总管胶原酶灌注法分离ICR小鼠胰岛的最佳静止消化条件是，胶原酶浓度0.8mg/ml、37℃、水浴静止消化20min；（2）使用RT-PCR技术和免疫荧光染色技术证实了ICR小鼠胰岛内有着nestin~+细胞，并且这类nestin~+细胞不表达胰岛素；（3）将胰岛内的nestin~+细胞体外分离、扩大培养，在低糖、低血清的培养条件下可从诱导其形成胰岛样细胞团，经双硫腙（DTZ）染色后呈褐红色，用RT-PCR技术检测出胰岛素基因的表达。从上结果表明，在ICR小鼠胰岛内有着着nestin~+细胞，并且通过体外实验证明了这类细胞具有分化为胰岛素分泌细胞的能力，体现出一定的胰腺干/祖细胞的特性。但是这类nestin~+细胞在体内是否同样具有这一特性，还需要进一步的探讨。关键词：胰岛论文胰腺干/祖细胞论文nestin~+细胞论文胰岛样细胞团论文ICR小鼠论文
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中文摘要6-8
Abstract8-13
前言13-16
第一篇 综述部分16-33
第1章 胰腺发育极为基因调控16-25

1.1 胰腺的组织学结构16-17

1.2 胰腺发育历程中重要的基因17-19

1.3 内分泌腺命运的决定19-20

1.4 内分泌腺祖细胞向特定细胞的分化20-22

1.5 胰岛不同亚型细胞的维持22-24

1.6 结论24-25

第2章 胰腺干细胞25-33

2.1 胚胎干细胞（ES）25-26

2.2 胰腺干细胞的可能性26-27

2.3 胰腺内 nestin+细胞27-28

2.4 其他假定的胰岛内干细胞28-29

2.5 胰腺内的椭圆形细胞29-30

2.6 胰腺导管细胞作为功能干细胞30-31

2.7 结论31-33

第二篇 实验探讨33-52
第1章 ICR 小鼠胰岛分离条件的优化33-42

1.1 实验材料33-35

1.2 实验办法35-37

1.3 实验结果37-39

1.4 讨论39-41

1.5 小结41-42

第2章 ICR 小鼠胰岛内 nestin~+胰腺干/祖细胞的分离及体外诱导分化42-52

2.1 实验材料43-44

2.2 实验办法44-46

2.3 实验结果46-49

2.4 讨论49-51

2.5 小结51-52

结论52-53
参考文献53-65
附录65-66
导师介绍66-68
作者介绍68-69
在读硕士期间发表论文69-70
致谢70