谈排卵肾阳虚证排卵障碍性不孕差别基因表达谱

论文导读：.体质调查表的制定和运用111.2.运用红外热成像系统对阳虚体质的评价11-121.3.肾阳虚证候量表的制定与运用122.病例选择(对象)12-152.1.病例来源12-132.2.诊断标准13-142.2.1.西医诊断标准132.2.2.中医体质判定标准132.2.3.中医辨证标准13-142.3.纳入标准14-152.

4.排除标准153.一般资料浅析15-203.1.病例分布情况

摘要：目的：以肾阳虚证排卵障碍性不孕患者为探讨对象制作肾阳虚证的基因表达谱,筛选差别基因(P0.05),探讨肾阳虚证的分子通路及微观分子机制,为“肾主生殖”的本质提供科学依据。策略：1、病例选择：2011年6月至2011年12月在成都中医药大学第二附属医院中医妇科门诊选取阳虚体质肾阳虚证排卵障碍性不孕患者为探讨对象,确诊为典型肾阳虚证患者为病例组；选取典型平和质健康者为对照组。2、基因芯片样品制作和送样：抽取每组探讨对象外周血液,编号,分离白细胞,将分离出的每一管白细胞转入1.5mlEP管,并迅速放置于液氮中保存。及时将样本以液氮中取出包装后埋入干冰,采取壁厚且质量完好的泡沫箱严格密封后通过快递公司空运送于上海伯豪生物技术有限公司(填写样品登记单)。3、基因芯片实验(芯片公司)：样品质检,全部合格后进入实验阶段,提取总RNA,纯化以完成探针的制备,运用基因芯片技术进行芯片杂交及扫描,得到病人-正常对照组表达谱数据,SAS软件统计完成差别基因表达筛选P0.05)。4、对差别基因进行GO功能富集度浅析和KEGG通路浅析。结果：1、共纳入受试者10例,剔除4例,进入浅析6例：经临床评定确诊排卵障碍性不孕、阳虚体质典型肾阳虚证候病例组3例,健康典型平和质者对照组3例。2、肾阳虚证排卵障碍性不孕病例组和对照组有着差别基因表达特点图谱。获得650条差别基因表达(P0.05)。其中上调266条,下调384条,下调基因占59.1%。获得基因名称及其基本信息的有480条。3、通过GO功能富集度浅析,发现差别基因主要涉及核糖体结构组成中的核糖体蛋白泛素化、囊泡目标、建立蛋白定位,染色体分离,组织重塑、细胞前缘、运动的积极调控等多个生物学历程。4、通过KEGG通路浅析,差别基因参与代谢通路、TGF-β信号通路、蛋白质泛素化、遗传信息处理通路如DNA剪接及卵母细胞减数分裂、金属离子通路、免疫通路(造血干细胞系)、内吞作用以及粘着路口等人类病证各相关的通路。以代谢通路和TGF-β信号通路最多。5、发现与生殖相关的基因：PRSS21、TP53TG3、LAST1、CCR4、SEC24A。结论：1、运用基因芯片进行基因转录组学浅析是一种有良好进展前景的中医证候学探讨策略。2、排卵障碍性不孕疾病与肾阳虚证病证结合,丰富了肾阳虚证候的基因库,深化了肾阳虚证微观分子生物学机制,为“肾藏精、主生殖”论述提供了客观的依据。3、肾阳虚证排卵障碍性不孕与机体的核糖体蛋白泛素化以及代谢功能的低下等有密切的联系。关键词：肾阳虚证论文排卵障碍论文不孕论文差别基因论文表达谱论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。中文摘要2-4
Abstract4-9
引言9-11
正文11-36

1. 辨体辨证规范化11-12

1. 体质调查表的制定和运用11

1.2. 运用红外热成像系统对阳虚体质的评价11-12

1.

3. 肾阳虚证候量表的制定与运用12

2. 病例选择(对象)12-15

2.

1. 病例来源12-13

诊断标准13-14

2.

1. 西医诊断标准13

中医体质判定标准13

2.3. 中医辨证标准13-14

2.3. 纳入标准14-15

2.

4. 排除标准15

3. 一般资料浅析15-20 3.

1. 病例分布情况15

3.

2. 两组患者基本资料15-20

4. 基因转录组学探讨20-36

4.

1. 基因芯片技术20-28

4.

1. 样品的制备及白细胞的分离20-22

4.

1.2. RNA的提取22-23

4.

1.3. 总RNA的纯化23-24

4.

1.4. RNA样品质量检测结果24-25

4.

1.5. 荧光标记25-26

4.

1.6. 芯片杂交26-27

4.

1.7. 芯片洗涤和扫描27

4.1.8. 实验完成后将芯片图像信号转化为数字信号,并对芯片的原始数据的扣本底归一化处理(normal ization)27-28
4.

2. 基因芯片数据浅析28-31

4.2.

1. 差别基因筛选28-29

4.2.2. 差别基因数据信息挖掘通道29-31
4.

3. 实验结果31-36

4.3.

1. 肾阳虚证排卵障碍性不孕患者与平和正常人组间差别基因聚类浅析31

4.3.

2. 肾阳虚证排卵障碍性不孕组与平和质健康组差别表达基因浅析结果31-34

4.3.3. 差别表达基因G0功能浅析34-35
4.

3.4. 差别表达基因KEGG Pathway Analysis通路浅析35-36

讨论36-50

1. 阳虚体质(辨体)与肾阳虚证候(辨证)临床结合36

2. 肾阳虚证与排卵障碍性不孕中西医病证结合36-38

3. 肾阳虚证排卵障碍性不孕差别基因表达谱浅析3论文导读：免疫通路42-443.2.4.肾阳虚证排卵障碍性不孕通路外有关骨骼发育差别基因44-473.3.其他与肾阳虚证排卵障碍性不孕相关的较强差别基因表达473.4.与生殖相关的差别基因表达47-50结论50-51不足与展望51-52致谢52-53参考文献53-56综述56-64参考文献62-64附录一：体质调查表64-69附录二：肾阳虚辨证因子评分细则69-73附录三：在校校
8-50
3.

1. GO功能浅析38-40

3.

2. KEGG通路浅析40-47

3.2.

1. 肾阳虚证排卵障碍性不孕与代谢通路40-41

3.2.2. 肾阳虚证排卵障碍性不孕与信号通路41-42
3.

2.3. 肾阳虚证排卵障碍性不孕与免疫通路42-44

3.

2.4. 肾阳虚证排卵障碍性不孕通路外有关骨骼发育差别基因44-47

3.3. 其他与肾阳虚证排卵障碍性不孕相关的较强差别基因表达47

3.

4. 与生殖相关的差别基因表达47-50

结论50-51 不足与展望51-52
致谢52-53
参考文献53-56
综述56-64
参考文献62-64
附录一：体质调查表64-69
附录二：肾阳虚辨证因子评分细则69-73
附录三：在校校期间公开发表的学术论文、专著及科研成果73-74