阐释衰竭清肝方对D-GalN诱导急性肝衰竭大鼠肝损伤及肝再生影响及机制

论文导读：1N1.4g/kg单次腹腔注射建立大鼠ALF热毒血瘀证模型；空白组腹腔注射同等剂量的生理盐水。造模前3天至实验结束,每日灌胃1次,空白组和模型组给予蒸馏水10ml/kg/d灌胃,美能组给予成人等效临床剂量15.6mg/kg/d,清肝方组给予成人等效临床剂量29.7g/kg/d。动物自由饮食。以腹腔注射的时间为标准点,造模36h后取1组大鼠,经股动脉取血6
摘要：目的观察清肝方对D-Ga1N诱导急性肝衰竭热毒血瘀证大鼠肝损伤及肝再生的影响,在此基础上进一步探讨清肝方抗ALF的作用环节及机理。策略选取健康清洁级雌性SD大鼠125只,体重180±20g,随机分为四组,即空白1、2组各10只,模型1、2组,美能1、2组及清肝方1、2组各20、15只。其中,1组用于造模后36h取血及肝组织标本；2组用于观察造模后96h大鼠的存活率。建模前12h禁食,除空白组外,其余各组用D-Ga1N1.4g/kg单次腹腔注射建立大鼠ALF热毒血瘀证模型；空白组腹腔注射同等剂量的生理盐水。造模前3天至实验结束,每日灌胃1次,空白组和模型组给予蒸馏水10ml/kg/d灌胃,美能组给予成人等效临床剂量15.6mg/kg/d,清肝方组给予成人等效临床剂量29.7g/kg/d。动物自由饮食。以腹腔注射的时间为标准点,造模36h后取1组大鼠,经股动脉取血6ml,其中4ml置于干燥管中,另2ml置于枸橼酸钠抗凝管中,常规分离血清,-20℃冻存待测。断颈处死动物后,沿腹正中线剖开皮肤,分离出肝组织,取肝左叶相同部位存放于10%中性液固定,并取肝右叶置于冰块上,以PBS缓冲液清洗干净后,切取1.0cm×1.0cm×0.2cm大小的肝组织1块,置于冻存管中,迅速用液氮速冻后转运至-70℃冰箱备测。主要观察96h内各组大鼠的行为学变化及存活率；全自动生化浅析法检测血清ALT、AST、TBi1、ALB及CHE；全自动血凝浅析法检测血浆PT;SABC免疫组化法检测肝组织PCNA;RT-PCR荧光法检侧肝组织TLR4、NF-κB、HMGB1及caspase-3mRNA表达水平。结果1、96h存活率：①模型组存活率为33.3%,美能组为46.7%,清肝方组为66.7%,三组的差别无统计学作用(P0.05)。②模型组、美能组及清肝方组估计平均存活时间分别为64.6、71.9、83.3h；10g-rank检验提示清肝方组累积存活率高于模型组(P0.05),而美能组与模型组、清肝方组差别均无统计学作用(P0.05)。2、肝功能及凝血功能：模型组与空白组、清肝方组相比,在血清ALT、AST、 TBiL水平及血浆PT水平方面显著升高,而在血清ALB、CHE水平方面显著降低,差别均有统计学作用(P0.05)。美能组仅在ALT、AST及TBiL水平方面与模型组的差别有统计学作用论文导读：e-3mRNA表达水平较低,而在模型组中显著表达,差别均有统计学作用(P0.05)。运用美能或清肝方后,TLR4、NF-κB、HMGB1、caspase-3的表达量均显著下降,且清肝方组下降幅度大于美能组,差别均有统计学作用(P0.05)5、肝组织PCNA表达情况：造模后PCNA在肝组织中的表达增加,而给予清肝方或美能灌胃可进一步提升其表达水平,尤其是清肝方
(P0.05)。3、肝组织病理评分：模型组病理损害积分显著高于空白组,而清肝方组及美能组的积分都低于模型组,且清肝方对肝脏病理损害的改善更为显著,差别均有统计学作用(P0.05)。4.RT-RCR检测指标表达情况：空白组肝组织TLR4、NF-κB、HMGB1、caspase-3mRNA表达水平较低,而在模型组中显著表达,差别均有统计学作用(P0.05)。运用美能或清肝方后,TLR4、NF-κB、HMGB1、caspase-3的表达量均显著下降,且清肝方组下降幅度大于美能组,差别均有统计学作用(P0.05)5、肝组织PCNA表达情况：造模后PCNA在肝组织中的表达增加,而给予清肝方或美能灌胃可进一步提升其表达水平,尤其是清肝方的作用显著,差别均有统计学作用(P0.05)结论1、清肝方可显著减轻D-Ga1N诱导急性肝衰竭热毒血瘀证大鼠肝细胞的损伤,推动肝细胞的再生,改善肝功能及肝脏病理,延长存活时间,降低死亡率。2、清肝方抗D-Ga1N诱导急性肝衰竭大鼠模型的可能机制：①通过下调肝组织TLR4表达,阻断由相关病原分子、LPS等激活的TLR4/NF-κB信号通路,减少前炎症性细胞因子的表达,还可影响树突状细胞的成熟,抑制过亢的免疫反应。②降低NF-κ B在肝组织中的表达,可减少TNF-α、IL-1、IL-6等信号的过度激活,中断炎症的级联反应。③降低肝组织HMGB1表达水平,可阻断HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路。④下调caspase-3的表达水平,可抑制肝细胞的凋亡,还可减少因中性粒细胞侵润而继发的肝细胞坏死。⑤上调肝组织PCNA的表达,调节残留肝细胞的再生,推动肝干细胞的分化,进一步改善ALF大鼠的预后。关键词：清肝方论文急性肝衰竭论文热毒血瘀证论文TLR4论文NF-KB论文HMGB1论文caspase-3论文PCNA论文
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英文摘要4-7
目录7-9
英文缩略词对照表9-11
前言11-12
实验

一、清肝方对急性肝衰竭大鼠模型的影响12-22

1 实验材料12-13
2 实验策略13-14
3 结果14-19
4 讨论19-22
实验

二、清论文导读：著及科研成果75-76上一页123

肝方对急性肝衰竭大鼠TLR4 mRNA表达的影响22-28
1 实验材料22-23
2 实验策略23-25
3 结果25-26
4 讨论26-28
实验

三、清肝方对急性肝衰竭大鼠NF-κB mRNA表达的影响28-32

1 实验材料28
2 实验策略28-29
3 结果29-30
4 讨论30-32
实验

四、清肝方对急性肝衰竭大鼠HMGB1 mRNA表达的影响32-36

1 实验材料32
2 实验策略32-33
3 结果33-34
4 讨论34-36
实验

五、清肝方对急性肝衰竭大鼠caspase-3 mRNA表达的影响36-40

1 实验材料36
2 实验策略36-37
3 结果37-38
4 讨论38-40
实验

六、清肝方对急性肝衰竭模型大鼠肝再生的影响40-45

1 实验材料40
2 实验策略40-41
3 结果41-42
4 讨论42-45
讨论45-56
1 急性肝衰竭热毒血瘀证模型评价45-47
2 阳性药物选择47-48
3 急性肝衰竭机理探讨48-50
4 清肝方对ALF模型作用的可能机制50-51
5 组方浅析及现代药理学探讨51-56
结论56-57
致谢57-58
参考文献58-71
附录1：肝脏总RNA抽样电泳图71-72
附录2：荧光定量RT-PCR扩增曲线72-73
附录3：荧光定量RT-PCR熔解曲线73-74
附录4：肝组织PCNA表达图74-75
附录5：在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果75-76