论动力学去甲泽拉木醛免疫抑制作用及药代动力学设计
最后更新时间：2024-02-28
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论文导读：讨表明T-96是通过抑制T细胞的转化,主要是抑制淋巴细胞白介素2(IL-2)的生成和释放,降低IL-2的受体活性而起作用的,所以T-96可能是具有高免疫抑制性,低骨髓抑制的药物。本论文继续利用体内外免疫实验和大动物模型探讨T-96的免疫抑制作用,探讨其在比格犬内的药物代谢动力学,将T-96开发成为中药1类新药,运用于器官移植和自身免疫
摘要：雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook. f., TWHF)系卫矛科雷公藤属多年生藤本植物,其化学成分主要是二萜、三萜、倍半萜、生物碱等。雷公藤的免疫抑制作用早已被认识,并被用于治疗类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等自身免疫疾病且效果显著。以雷公藤的根皮提取的雷公藤多苷已上市并用于临床。雷公藤三萜为五环三萜,是目前探讨的热点,探讨发现雷公藤三萜具有抗炎、抗病毒、抗菌、抗肿瘤和免疫调节等活性。我们课题组以雷公藤中分离到一种分子量为480,分子式C29H3606的酚性去三萜化合物,定名为去甲泽拉木醛(Demethylzeylasteral, T-96)。前期探讨表明T-96是通过抑制T细胞的转化,主要是抑制淋巴细胞白介素2(IL-2)的生成和释放,降低IL-2的受体活性而起作用的,所以T-96可能是具有高免疫抑制性,低骨髓抑制的药物。本论文继续利用体内外免疫实验和大动物模型探讨T-96的免疫抑制作用,探讨其在比格犬内的药物代谢动力学,将T-96开发成为中药1类新药,运用于器官移植和自身免疫性疾病。第一部分T-96体内外的免疫抑制作用实验目的：对T-96在体外、体内对免疫系统的影响作用进行探讨。检测T-96对淋巴细胞毒性、增殖反应的作用,对淋巴细胞产生细胞因子的作用,对细胞介导免疫反应和特异性体液免疫功能的影响。策略：在体外实验系统中,通过MTT法和3H法,检测T-96对淋巴细胞毒性、增殖反应的作用,利用ELISA法检测T-96对淋巴细胞产生细胞因子的作用；在体内实验系统中,利用二硝基氟苯诱导的迟发性超敏反应(delayed-type hypersensitivity, DTH),检测T-96对细胞介导免疫反应的影响作用,通过抗羊红细胞特异性抗体的产生,总抗体IgG产生,检测T-96对特异性体液免疫功能的影响。结果：T-96在1μ/ml以下的浓度对淋巴细胞没有显著的细胞毒性作用,而在此浓度以下时,仍有抑制ConA诱导的T淋巴细胞增殖反应的活性作用,且其作用随着浓度降低而减弱,最低有效浓度为0.0001μg/ml。T-96与CsA的免疫抑制作用相似,选择性地抑制T淋巴细胞功能。T-96在没有淋巴细胞毒性的浓度1μg/ml时,对APC和T淋巴细胞分泌的细胞因子有显著的调节活性作用。在ConA刺激诱导产生T细胞的细胞因子实验中,T-96在没有淋巴论文导读：肾移植模型中的免疫抑制作用。策略：实验犬随机分成六个组,每组6条犬。肾移植犬,两两配对,互为受供体。肾移植对照组,在犬肾移植术后第一天起,每天给予生理盐水灌胃(n=6)；CsA用药组,术后第一天起,每天给予比格犬CsA5mg/kg喂药一次(n=6)；低剂量T-96用药组,术后上一页12345下一页
细胞毒性的浓度1μg/ml时,对T细胞分泌的细胞因子IL-2有一定的抑制活性作用。在DNFB诱导的DTH实验中,0.1mg/kg的T-96有显著的抑制细胞介导免疫的DTH反应。T-96的急毒实验的半数致死量LDs0为30mg/kg。腹腔给药T-96(0.1mg/kg-10mg/kg)时,对脾B细胞抗羊红细胞特异性抗体生成在有推动作用。结论：以上结果表明,T-96的免疫抑制作用与雷公藤甲素的细胞毒作用机制所致免疫抑制效应有着显著的不同,T-96的这种抑制作用可能通过作用于免疫反应的环节而获得,而不是直接的细胞毒性作用引起。T-96抑制免疫反应的作用比雷公藤甲素的作用更强,在达到一定浓度时,其抑制作用强度甚至与CsA相当。第二部分建立同种异体比格犬肾移植模型目的：建立一种可靠方便的同种异体比格犬肾移植模型,为进一步开展T-96的药效学探讨提供大动物模型。策略：实验犬随机分成伪手术组和移植组两个组,每组6条犬。伪手术组摘除右肾,保留左肾。移植组为6只成年、健康肾移植犬,两两配对,互为受供体。观察两组比格犬术后血肌酐、尿素氮和一般情况变化。结果：比格犬肾移植模型稳定,移植犬以术后第3天血肌酐和尿素氮显著升高,血肌酐以术前的71.17±7.52μ mol/L上升到术后第6天的1026.4±110.06u mol/L,尿素氮以术前的4.38±0.75mmol/L上升到术后第6天的42.08±5.58mmol/L。伪手术组血肌酐和尿素氮则一直稳定维持稳定。移植组一般情况方面,有5只受体犬术后存活,状态良好,行动自如。有1只犬术后第一天精神略萎靡,可能为麻醉时间过长引起,术后第二天也可自行站立行走。病理切片发现典型的急性移植反应。结论：建立了一种稳定、方便的同种异体比格犬肾移植模型,为开展T-96的药效学探讨提供大动物模型,也可广泛用于移植免疫学和免疫药物的筛选探讨。第三部分T-96在比格犬肾移植模型的免疫抑制作用目的：利用第四部分建立的同种异体比格犬肾移植模型,进一步探讨T-96的药效学,评价T-96在比格犬肾移植模型中的免疫抑制作用。策略：实验犬随机分成六个组,每组6条犬。肾移植犬,两两配对,互为受供体。肾移植对照组,在犬肾移植术后第一天起,每天给予生理盐水灌胃(n=6)；CsA用药组,术后第一天起,每天给予比格犬CsA5mg/kg喂药一次(n=6)；低剂量T-96用药组,术后论文导读：
第一天起,每天给予比格犬T-965mg/kg喂药一次(n=6)；中剂量T-96用药组,术后第一天起,每天给予比格犬T-9610mg/kg喂药一次(n=6)；高剂量T-96用药组,术后第一天起,每天给予比格犬T-9620mg/kg喂药一次(n=6)；T-96和CsA联合用药组,术后第一天起,每天给予比格犬T-9610mg/kg+CsA5mg/kg喂药一次(n=6)。结果：T-9610mg/kg可延长移植犬存活期至10.83±1.47d和对照组6.33±1.21d相比有统计学作用(P0.05)。T-9620mg/kg可延长移植犬存活期至11.17±1.47d和对照组6.33±1.21d相比有统计学作用(P0.05)。T-9610mg/kg和CsA5mg/kg可延长犬存活时间至13.33±1.75d,与单用CsA5mg/kg组10.67±1.63d相比,有统计学作用(P0.05)。结论：T-96有抑制比格犬肾移植急性排斥作用,且抑制作用随着剂量的增大而增强,T-96与CsA联用更能延长比格犬肾移植存活时间。第四部分建立比格犬血浆T-96的LC-MS/MS测定策略目的：建立比格犬血浆样品中T-96的LC-MS/MS (液相色谱-质谱-质谱联用技术)测定策略,评价该策略的准确度、精密度、灵敏度、专属性及定量线性等是否符合生物样品的浅析要求,是否可用于比格犬体内T-96的药代动力学探讨。策略：通过制备T-96的血浆标准曲线,探讨T-96的LC-MS/MS测定浅析策略的专属性、考察精密度和回收率,考察浅析策略的绝对回收率,考察浅析样品基质效应和稳定性和考察浅析策略的稀释效应等方面,评价T-96的该测定策略。结果：本实验建立的比格犬血浆样品中T-96的LC-MS/MS测定策略,血浆内源性物质均不干扰样品峰,血浆中T-96的相对回收率大于85%,日间和日内相对标准差小于5%,最低定量限为2.02ng/ml,线性范围为2.02-505ng/mL结论：比格犬血浆样品中T-96的LC-MS/MS测定策略的准确度、精密度、灵敏度、专属性及定量线性等均符合生物样品的浅析要求,可用于比格犬体内T-96的药代动力学探讨。第五部分T-96在比格犬体内的药物代谢动力学探讨目的：利用第二部分建立的比格犬血浆样品中T-96的LC-MS/MS测定策略,探讨和评价比格犬体内T-96的药代动力学特点。策略：采取论文导读：6药时曲线的末端相消除半衰期(t1/2)、平均驻留时间(MRT)、给药后即时血药浓度(Co)、清除率(ClT)、表观分布容积(VD)、AUC0-12.AUC0-∞分别为9.85±0.76h、6.94±1.65h、47701.35±2559.10ng/ml、0.10±0.03L/h/Kg、0.74±0.39L/Kg、54615.76±19147.38ng·h/ml54786.26±19161.47ng-h/ml。结论：以6条成年健康比格犬静注给药T-96原料
用LC-MS/MS测定策略,探讨比格犬单剂量口服给药T-96原料药20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg后体内药代动力学；探讨比格犬前肢静脉注射T-96注射液5mg/kg后体内药代动力学。利用非房室模型法估算T-96药时曲线的末端相消除半衰期(t1/2)、平均驻留时间(MRT)、峰浓度(Cmax)、峰时间(tmax)、AUC0-24、AUC0～∞,并估算口服T-96原料药40mg/kg相对于静注T-96注射液5mg/kg的绝对利用度。结果：经非房室模型法估算6条比格犬单剂量口服给药T-96原料药20mg/kg (40、80mg/kg)后T-96药时曲线的末端相消除半衰期(t1/2)、峰浓度(Cmax)、峰时间(tmax)、 AUC0-24、 AUC0-∞分别为10.75±1.14h(11.70±1.21h,11.20±1.43h),418.42±73.61ng/ml (842.49±99.43ng/ml,1383.61±143.05ng/ml),8.7±1.0h (11.70±1.1h,10.7±1.0h),7691.96±2361.70ng·h/ml (16225.59±3081.34ng-h/ml,26027.86±5150.72ng·h/ml),7788.33±2365.32ng-h/ml (16553.42±3289.75ng-h/ml,26517.20±5461.39ng-h/ml)。经非房室模型法估算6条比格犬单剂量静注给药T-96原料药注射液5mg/kg后T-96药时曲线的末端相消除半衰期(t1/2)、平均驻留时间(MRT)、给药后即时血药浓度(Co)、清除率(ClT)、表观分布容积(VD)、 AUC0-12. AUC0-∞分别为9.85±0.76h、6.94±1.65h、47701.35±2559.10ng/ml、0.10±0.03L/h/Kg、0.74±0.39L/Kg、54615.76±19147.38ng·h/ml54786.26±19161.47ng-h/ml。结论：以6条成年健康比格犬静注给药T-96原料药注射液5mg/kg为参比,剂量校正后,用梯形面积法(AUC)估算口服给药T-96原料药40mg/kg相对于静注给药T-96原料药注射液5mg/kg的的绝对生物利用度为
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。中文摘要5-9
Abstract9-14
前言14-17
第一部分 T-96体内外的免疫抑制作用实验17-36
前言17-18
实验材料18-19
实验策略19-22
实验结果22-33
讨论33-35
第一部分革新点和作用35-36
第二部分 建立同种异体比格犬肾移植模型36-50
前言36-37
材料和策略37-42
结果42-48
讨论48-50
第三部分 T-96在比格犬肾移植模型的免疫抑制作用50-65
前言50
材料和策略50-56
结果56-62
讨论62-64
第三部分革新点和作用64-65
第四部分 建立比格犬血浆T-96的LC-MS/MS测定策略65-79
前言65
实验材料65-66
策略和结果66-78
讨论78-79
第五部分 T-96在比格犬体内的药物代谢动力学探讨79-98
前言79
实验材料79-80
策略和结果80-95
讨论95-97
第五部分革新点和作用97-98
总结和展望98-100
参考文献100-106
综述106-115
参考文献111-115
英文缩略词表115-116
附录116-119
在校期间参与的课题及会议116-117
在校期间发表的文章117-118
在校期间所获得的奖励118-119
致谢119-121
摘要：雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook. f., TWHF)系卫矛科雷公藤属多年生藤本植物,其化学成分主要是二萜、三萜、倍半萜、生物碱等。雷公藤的免疫抑制作用早已被认识,并被用于治疗类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等自身免疫疾病且效果显著。以雷公藤的根皮提取的雷公藤多苷已上市并用于临床。雷公藤三萜为五环三萜,是目前探讨的热点,探讨发现雷公藤三萜具有抗炎、抗病毒、抗菌、抗肿瘤和免疫调节等活性。我们课题组以雷公藤中分离到一种分子量为480,分子式C29H3606的酚性去三萜化合物,定名为去甲泽拉木醛(Demethylzeylasteral, T-96)。前期探讨表明T-96是通过抑制T细胞的转化,主要是抑制淋巴细胞白介素2(IL-2)的生成和释放,降低IL-2的受体活性而起作用的,所以T-96可能是具有高免疫抑制性,低骨髓抑制的药物。本论文继续利用体内外免疫实验和大动物模型探讨T-96的免疫抑制作用,探讨其在比格犬内的药物代谢动力学,将T-96开发成为中药1类新药,运用于器官移植和自身免疫性疾病。第一部分T-96体内外的免疫抑制作用实验目的：对T-96在体外、体内对免疫系统的影响作用进行探讨。检测T-96对淋巴细胞毒性、增殖反应的作用,对淋巴细胞产生细胞因子的作用,对细胞介导免疫反应和特异性体液免疫功能的影响。策略：在体外实验系统中,通过MTT法和3H法,检测T-96对淋巴细胞毒性、增殖反应的作用,利用ELISA法检测T-96对淋巴细胞产生细胞因子的作用；在体内实验系统中,利用二硝基氟苯诱导的迟发性超敏反应(delayed-type hypersensitivity, DTH),检测T-96对细胞介导免疫反应的影响作用,通过抗羊红细胞特异性抗体的产生,总抗体IgG产生,检测T-96对特异性体液免疫功能的影响。结果：T-96在1μ/ml以下的浓度对淋巴细胞没有显著的细胞毒性作用,而在此浓度以下时,仍有抑制ConA诱导的T淋巴细胞增殖反应的活性作用,且其作用随着浓度降低而减弱,最低有效浓度为0.0001μg/ml。T-96与CsA的免疫抑制作用相似,选择性地抑制T淋巴细胞功能。T-96在没有淋巴细胞毒性的浓度1μg/ml时,对APC和T淋巴细胞分泌的细胞因子有显著的调节活性作用。在ConA刺激诱导产生T细胞的细胞因子实验中,T-96在没有淋巴论文导读：肾移植模型中的免疫抑制作用。策略：实验犬随机分成六个组,每组6条犬。肾移植犬,两两配对,互为受供体。肾移植对照组,在犬肾移植术后第一天起,每天给予生理盐水灌胃(n=6)；CsA用药组,术后第一天起,每天给予比格犬CsA5mg/kg喂药一次(n=6)；低剂量T-96用药组,术后上一页12345下一页
细胞毒性的浓度1μg/ml时,对T细胞分泌的细胞因子IL-2有一定的抑制活性作用。在DNFB诱导的DTH实验中,0.1mg/kg的T-96有显著的抑制细胞介导免疫的DTH反应。T-96的急毒实验的半数致死量LDs0为30mg/kg。腹腔给药T-96(0.1mg/kg-10mg/kg)时,对脾B细胞抗羊红细胞特异性抗体生成在有推动作用。结论：以上结果表明,T-96的免疫抑制作用与雷公藤甲素的细胞毒作用机制所致免疫抑制效应有着显著的不同,T-96的这种抑制作用可能通过作用于免疫反应的环节而获得,而不是直接的细胞毒性作用引起。T-96抑制免疫反应的作用比雷公藤甲素的作用更强,在达到一定浓度时,其抑制作用强度甚至与CsA相当。第二部分建立同种异体比格犬肾移植模型目的：建立一种可靠方便的同种异体比格犬肾移植模型,为进一步开展T-96的药效学探讨提供大动物模型。策略：实验犬随机分成伪手术组和移植组两个组,每组6条犬。伪手术组摘除右肾,保留左肾。移植组为6只成年、健康肾移植犬,两两配对,互为受供体。观察两组比格犬术后血肌酐、尿素氮和一般情况变化。结果：比格犬肾移植模型稳定,移植犬以术后第3天血肌酐和尿素氮显著升高,血肌酐以术前的71.17±7.52μ mol/L上升到术后第6天的1026.4±110.06u mol/L,尿素氮以术前的4.38±0.75mmol/L上升到术后第6天的42.08±5.58mmol/L。伪手术组血肌酐和尿素氮则一直稳定维持稳定。移植组一般情况方面,有5只受体犬术后存活,状态良好,行动自如。有1只犬术后第一天精神略萎靡,可能为麻醉时间过长引起,术后第二天也可自行站立行走。病理切片发现典型的急性移植反应。结论：建立了一种稳定、方便的同种异体比格犬肾移植模型,为开展T-96的药效学探讨提供大动物模型,也可广泛用于移植免疫学和免疫药物的筛选探讨。第三部分T-96在比格犬肾移植模型的免疫抑制作用目的：利用第四部分建立的同种异体比格犬肾移植模型,进一步探讨T-96的药效学,评价T-96在比格犬肾移植模型中的免疫抑制作用。策略：实验犬随机分成六个组,每组6条犬。肾移植犬,两两配对,互为受供体。肾移植对照组,在犬肾移植术后第一天起,每天给予生理盐水灌胃(n=6)；CsA用药组,术后第一天起,每天给予比格犬CsA5mg/kg喂药一次(n=6)；低剂量T-96用药组,术后论文导读：
第一天起,每天给予比格犬T-965mg/kg喂药一次(n=6)；中剂量T-96用药组,术后第一天起,每天给予比格犬T-9610mg/kg喂药一次(n=6)；高剂量T-96用药组,术后第一天起,每天给予比格犬T-9620mg/kg喂药一次(n=6)；T-96和CsA联合用药组,术后第一天起,每天给予比格犬T-9610mg/kg+CsA5mg/kg喂药一次(n=6)。结果：T-9610mg/kg可延长移植犬存活期至10.83±1.47d和对照组6.33±1.21d相比有统计学作用(P0.05)。T-9620mg/kg可延长移植犬存活期至11.17±1.47d和对照组6.33±1.21d相比有统计学作用(P0.05)。T-9610mg/kg和CsA5mg/kg可延长犬存活时间至13.33±1.75d,与单用CsA5mg/kg组10.67±1.63d相比,有统计学作用(P0.05)。结论：T-96有抑制比格犬肾移植急性排斥作用,且抑制作用随着剂量的增大而增强,T-96与CsA联用更能延长比格犬肾移植存活时间。第四部分建立比格犬血浆T-96的LC-MS/MS测定策略目的：建立比格犬血浆样品中T-96的LC-MS/MS (液相色谱-质谱-质谱联用技术)测定策略,评价该策略的准确度、精密度、灵敏度、专属性及定量线性等是否符合生物样品的浅析要求,是否可用于比格犬体内T-96的药代动力学探讨。策略：通过制备T-96的血浆标准曲线,探讨T-96的LC-MS/MS测定浅析策略的专属性、考察精密度和回收率,考察浅析策略的绝对回收率,考察浅析样品基质效应和稳定性和考察浅析策略的稀释效应等方面,评价T-96的该测定策略。结果：本实验建立的比格犬血浆样品中T-96的LC-MS/MS测定策略,血浆内源性物质均不干扰样品峰,血浆中T-96的相对回收率大于85%,日间和日内相对标准差小于5%,最低定量限为2.02ng/ml,线性范围为2.02-505ng/mL结论：比格犬血浆样品中T-96的LC-MS/MS测定策略的准确度、精密度、灵敏度、专属性及定量线性等均符合生物样品的浅析要求,可用于比格犬体内T-96的药代动力学探讨。第五部分T-96在比格犬体内的药物代谢动力学探讨目的：利用第二部分建立的比格犬血浆样品中T-96的LC-MS/MS测定策略,探讨和评价比格犬体内T-96的药代动力学特点。策略：采取论文导读：6药时曲线的末端相消除半衰期(t1/2)、平均驻留时间(MRT)、给药后即时血药浓度(Co)、清除率(ClT)、表观分布容积(VD)、AUC0-12.AUC0-∞分别为9.85±0.76h、6.94±1.65h、47701.35±2559.10ng/ml、0.10±0.03L/h/Kg、0.74±0.39L/Kg、54615.76±19147.38ng·h/ml54786.26±19161.47ng-h/ml。结论：以6条成年健康比格犬静注给药T-96原料
用LC-MS/MS测定策略,探讨比格犬单剂量口服给药T-96原料药20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg后体内药代动力学；探讨比格犬前肢静脉注射T-96注射液5mg/kg后体内药代动力学。利用非房室模型法估算T-96药时曲线的末端相消除半衰期(t1/2)、平均驻留时间(MRT)、峰浓度(Cmax)、峰时间(tmax)、AUC0-24、AUC0～∞,并估算口服T-96原料药40mg/kg相对于静注T-96注射液5mg/kg的绝对利用度。结果：经非房室模型法估算6条比格犬单剂量口服给药T-96原料药20mg/kg (40、80mg/kg)后T-96药时曲线的末端相消除半衰期(t1/2)、峰浓度(Cmax)、峰时间(tmax)、 AUC0-24、 AUC0-∞分别为10.75±1.14h(11.70±1.21h,11.20±1.43h),418.42±73.61ng/ml (842.49±99.43ng/ml,1383.61±143.05ng/ml),8.7±1.0h (11.70±1.1h,10.7±1.0h),7691.96±2361.70ng·h/ml (16225.59±3081.34ng-h/ml,26027.86±5150.72ng·h/ml),7788.33±2365.32ng-h/ml (16553.42±3289.75ng-h/ml,26517.20±5461.39ng-h/ml)。经非房室模型法估算6条比格犬单剂量静注给药T-96原料药注射液5mg/kg后T-96药时曲线的末端相消除半衰期(t1/2)、平均驻留时间(MRT)、给药后即时血药浓度(Co)、清除率(ClT)、表观分布容积(VD)、 AUC0-12. AUC0-∞分别为9.85±0.76h、6.94±1.65h、47701.35±2559.10ng/ml、0.10±0.03L/h/Kg、0.74±0.39L/Kg、54615.76±19147.38ng·h/ml54786.26±19161.47ng-h/ml。结论：以6条成年健康比格犬静注给药T-96原料药注射液5mg/kg为参比,剂量校正后,用梯形面积法(AUC)估算口服给药T-96原料药40mg/kg相对于静注给药T-96原料药注射液5mg/kg的的绝对生物利用度为
4.2%±1.9%(2.3%～6.1%)。论文导读：
关键词：雷公藤论文免疫抑制论文肾移植论文三萜单体论文动物模型论文药代动力学论文本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。中文摘要5-9
Abstract9-14
前言14-17
第一部分 T-96体内外的免疫抑制作用实验17-36
前言17-18
实验材料18-19
实验策略19-22
实验结果22-33
讨论33-35
第一部分革新点和作用35-36
第二部分 建立同种异体比格犬肾移植模型36-50
前言36-37
材料和策略37-42
结果42-48
讨论48-50
第三部分 T-96在比格犬肾移植模型的免疫抑制作用50-65
前言50
材料和策略50-56
结果56-62
讨论62-64
第三部分革新点和作用64-65
第四部分 建立比格犬血浆T-96的LC-MS/MS测定策略65-79
前言65
实验材料65-66
策略和结果66-78
讨论78-79
第五部分 T-96在比格犬体内的药物代谢动力学探讨79-98
前言79
实验材料79-80
策略和结果80-95
讨论95-97
第五部分革新点和作用97-98
总结和展望98-100
参考文献100-106
综述106-115
参考文献111-115
英文缩略词表115-116
附录116-119
在校期间参与的课题及会议116-117
在校期间发表的文章117-118
在校期间所获得的奖励118-119
致谢119-121