谈内皮ADP-核糖基化因子抑制剂在碱烧伤诱导实验性角膜新生血管中作用
最后更新时间：2024-02-04
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论文导读：nblot法检测碱烧伤角膜组织内血管内皮生长因子（vascularendothepalgrowthfactor,VEGF）mRNA的表达状况。3.体外实验运用ARF抑制剂干预人视网膜血管内皮细胞（humanretinalendothepalcell,HREC），检测其对细胞增殖、迁移等的影响。结果1.对照组小鼠CRNV占角膜总面积的比例为0.71±0.20，ARF抑制剂干预组小鼠CRNV面积为0.53
摘要：背景与目的角膜在正常生理状态下是透明无血管组织，但在感染、机械损伤、化学伤极为他病理状况下，可从诱导角膜新生血管(corneal neovascularization, CRNV)形成，致角膜失去透明性而引起严重的视力障碍，最终导致失明。由此有效阻止角膜新生血管的发生是治愈角膜损伤和恢复视力的重要途径。探索和寻找副意义小、抑制角膜新生血管能力强的办法和手段是眼科学探讨的重点和热点课题之一。ADP-核糖基化因子（ADP-ribosylation factor, ARF）是囊泡运输中的重要调节因子，属于三磷酸鸟苷（quanosine triphosphate GTP）结合蛋白，参与了细胞内物质运输和信号转导历程。目前关于ARF的功能探讨主要集中于肿瘤方面，认为ARF蛋白是肿瘤细胞增殖和代谢的重要调控分子，而其在新生血管性眼病从及CRNV中的意义极为机制的探讨国内外报道甚少。由此，本实验以构建碱烧伤诱导CRNV模型着手，通过运用ARF抑制剂腹腔注射法干预实验小鼠从及细胞增殖、迁移体内、体外等实验手段，研究ARF抑制剂在角膜新生血管发生历程中的意义和机制，为临床治疗CRNV提供有益的论述依据。材料与办法1.采取浸润1mol/L NaOH的2×2mm滤纸贴附左眼角膜40s的办法制作小鼠角膜碱烧伤诱导CRNV模型，将36只BALB/c小鼠碱烧伤后将其随机分为实验组及对照组，角膜碱烧伤1w后开始，实验组每只小鼠腹腔注射0.5ml质量浓度为0.5mg/ml ARF抑制剂溶液，对照组每只小鼠给予腹腔注射0.5ml PBS缓冲液，各自每周3次，持续1周。实验组及对照组于造模后2w分离角膜组织，从CD31免疫荧光标记法标记新生血管，对比对照组及实验组CRNV面积。2.收集第0d、4d、7d从及2w小鼠的角膜组织，用Realtime-PCR法检测角膜碱烧伤后不同时间点ARF基因的动态表达。用Western blot法检测碱烧伤角膜组织内血管内皮生长因子（vascular endothepal growth factor, VEGF）mRNA的表达状况。3.体外实验运用ARF抑制剂干预人视网膜血管内皮细胞（human retinalendothepal cell, HREC），检测其对细胞增殖、迁移等的影响。结果1.对照组小鼠CRNV占角膜总面积的比例为0.71±0.20，ARF抑制剂干预组小鼠CRNV面积为0.53±0.44，两组对比差别有统计学作用（t=3.504，P=0.025）。2.与0d对比，碱烧伤后对照组和ARF抑制剂干预组ARF基因水平的表达均有升高走势，差别具有统计学作用（F时间=1229.698, P=0.000）。3. ARF抑制剂干预组VEGF的蛋白水平表达较对照组同期值显著降低，（t=3.308,P=0.030）。4.细胞增殖实验结果显示：ARF抑制剂能显著抑制HREC细胞系的增殖，并随药物浓度的升高，抑制效应随之升高的剂量依赖性体现（F=798.222, P总=0.000）。5.划痕修复实验结果显示：在12h各组HREC细胞迁移宽度无显著差别。但在24h时间点，100ng/ml和1,000ng/ml两个浓度的ARF抑制剂干预组HREC迁移宽度分别为6.46±2.32μm、5.4±1.68μm，与对照组（8.49±4.18）μm相比显著减小，差别具有统计学作用(P_1=0.49, P_2=0.14)。结论1.角膜碱烧伤后，ARF抑制剂通过阻断ARF信号通路抑制VEGF等分子的表达等途径抑制角膜新生血管的生成。2. ARF抑制剂能显著抑制HREC细胞系体外的增殖和迁移能力。关键词：ADP-核糖基化因子抑制剂论文角膜碱烧伤论文角膜新生血管论文血管内皮生长因子论文内皮细胞论文
本论文由www.7ctime.com,需要可从关系人员哦。中文摘要4-6
Abstract6-9
前言9-12
第一部分 ARF 抑制剂的运用对碱烧伤诱导 CRNV 中的影响12-32
材料与仪器13-15
实验办法15-23
结果23-26
讨论26-28
结论28-29
参考文献29-31
附图31-32
第二部分 ARF论文导读：抑制剂体外干预对HREC细胞体外生物学功能的影响32-43材料与仪器32-35结果35-37讨论37-40结论40-41参考文献41-43全文总结43-44综述44-50参考文献48-50英文缩略词表50-51攻读学位期间公开发表的论文51-52本探讨所获得基金资助52-53致谢53-54上一页12
抑制剂体外干预对 HREC 细胞体外生物学功能的影响32-43
材料与仪器32-35
结果35-37
讨论37-40
结论40-41
参考文献41-43
全文总结43-44
综述44-50
参考文献48-50
英文缩略词表50-51
攻读学位期间公开发表的论文51-52
本探讨所获得基金资助52-53
致谢53-54
摘要：背景与目的角膜在正常生理状态下是透明无血管组织，但在感染、机械损伤、化学伤极为他病理状况下，可从诱导角膜新生血管(corneal neovascularization, CRNV)形成，致角膜失去透明性而引起严重的视力障碍，最终导致失明。由此有效阻止角膜新生血管的发生是治愈角膜损伤和恢复视力的重要途径。探索和寻找副意义小、抑制角膜新生血管能力强的办法和手段是眼科学探讨的重点和热点课题之一。ADP-核糖基化因子（ADP-ribosylation factor, ARF）是囊泡运输中的重要调节因子，属于三磷酸鸟苷（quanosine triphosphate GTP）结合蛋白，参与了细胞内物质运输和信号转导历程。目前关于ARF的功能探讨主要集中于肿瘤方面，认为ARF蛋白是肿瘤细胞增殖和代谢的重要调控分子，而其在新生血管性眼病从及CRNV中的意义极为机制的探讨国内外报道甚少。由此，本实验以构建碱烧伤诱导CRNV模型着手，通过运用ARF抑制剂腹腔注射法干预实验小鼠从及细胞增殖、迁移体内、体外等实验手段，研究ARF抑制剂在角膜新生血管发生历程中的意义和机制，为临床治疗CRNV提供有益的论述依据。材料与办法1.采取浸润1mol/L NaOH的2×2mm滤纸贴附左眼角膜40s的办法制作小鼠角膜碱烧伤诱导CRNV模型，将36只BALB/c小鼠碱烧伤后将其随机分为实验组及对照组，角膜碱烧伤1w后开始，实验组每只小鼠腹腔注射0.5ml质量浓度为0.5mg/ml ARF抑制剂溶液，对照组每只小鼠给予腹腔注射0.5ml PBS缓冲液，各自每周3次，持续1周。实验组及对照组于造模后2w分离角膜组织，从CD31免疫荧光标记法标记新生血管，对比对照组及实验组CRNV面积。2.收集第0d、4d、7d从及2w小鼠的角膜组织，用Realtime-PCR法检测角膜碱烧伤后不同时间点ARF基因的动态表达。用Western blot法检测碱烧伤角膜组织内血管内皮生长因子（vascular endothepal growth factor, VEGF）mRNA的表达状况。3.体外实验运用ARF抑制剂干预人视网膜血管内皮细胞（human retinalendothepal cell, HREC），检测其对细胞增殖、迁移等的影响。结果1.对照组小鼠CRNV占角膜总面积的比例为0.71±0.20，ARF抑制剂干预组小鼠CRNV面积为0.53±0.44，两组对比差别有统计学作用（t=3.504，P=0.025）。2.与0d对比，碱烧伤后对照组和ARF抑制剂干预组ARF基因水平的表达均有升高走势，差别具有统计学作用（F时间=1229.698, P=0.000）。3. ARF抑制剂干预组VEGF的蛋白水平表达较对照组同期值显著降低，（t=3.308,P=0.030）。4.细胞增殖实验结果显示：ARF抑制剂能显著抑制HREC细胞系的增殖，并随药物浓度的升高，抑制效应随之升高的剂量依赖性体现（F=798.222, P总=0.000）。5.划痕修复实验结果显示：在12h各组HREC细胞迁移宽度无显著差别。但在24h时间点，100ng/ml和1,000ng/ml两个浓度的ARF抑制剂干预组HREC迁移宽度分别为6.46±2.32μm、5.4±1.68μm，与对照组（8.49±4.18）μm相比显著减小，差别具有统计学作用(P_1=0.49, P_2=0.14)。结论1.角膜碱烧伤后，ARF抑制剂通过阻断ARF信号通路抑制VEGF等分子的表达等途径抑制角膜新生血管的生成。2. ARF抑制剂能显著抑制HREC细胞系体外的增殖和迁移能力。关键词：ADP-核糖基化因子抑制剂论文角膜碱烧伤论文角膜新生血管论文血管内皮生长因子论文内皮细胞论文
本论文由www.7ctime.com,需要可从关系人员哦。中文摘要4-6
Abstract6-9
前言9-12
第一部分 ARF 抑制剂的运用对碱烧伤诱导 CRNV 中的影响12-32
材料与仪器13-15
实验办法15-23
结果23-26
讨论26-28
结论28-29
参考文献29-31
附图31-32
第二部分 ARF论文导读：抑制剂体外干预对HREC细胞体外生物学功能的影响32-43材料与仪器32-35结果35-37讨论37-40结论40-41参考文献41-43全文总结43-44综述44-50参考文献48-50英文缩略词表50-51攻读学位期间公开发表的论文51-52本探讨所获得基金资助52-53致谢53-54上一页12
抑制剂体外干预对 HREC 细胞体外生物学功能的影响32-43
材料与仪器32-35
结果35-37
讨论37-40
结论40-41
参考文献41-43
全文总结43-44
综述44-50
参考文献48-50
英文缩略词表50-51
攻读学位期间公开发表的论文51-52
本探讨所获得基金资助52-53
致谢53-54