阐述曲霉无患子总皂苷制备工艺

论文导读：
摘要：无患子又名肥皂树，其果皮中含有丰富的无患子皂苷，主要以齐墩果酸型三萜类皂苷为主，统称为无患子总皂苷，是一种天然的非离子表面活性剂，具有杀菌、止痒、抗肿瘤、降压降脂等生物活性。本探讨通过自制无患子总皂苷质控品，采取水提-米曲霉发酵法提取分离纯化天然无患子总皂苷，实验结果如下：1通过乙醇提取，石油醚除杂，正丁醇萃取，AB-8大孔树脂，MCI凝胶柱分离纯化得无患子总皂苷，泡沫实验证明其溶液能产生蜂窝状泡沫，持久15min内不消失；Libermann-Buehard反应颜色由黄-红-紫-蓝，有溶血性。 HPLC/MS浅析鉴定主要为齐墩果酸型三萜皂苷，分别为Sapindoside B（882），SapindosideA（750），Mukurozi-saponin E1（924），Sapindoside L(924)，Mukurozi-saponin G(966)，Sapindoside M(966)。以齐墩果酸为标准品，通过香草醛-冰醋酸显色，皂苷元在550nm有最大吸收，进一步判定无患子总皂苷以齐墩果酸型皂苷为主，且用35%盐酸高温高压水解无患子总皂苷2h，皂苷元得率最高，通过换算可知无患子总皂苷的纯度可达95.2%以上，可作为无患子总皂苷质控品。2无患子总皂苷质控品不水解直接通过香草醛-冰醋酸显色后，在478nm处有最大吸收，以其为标准品绘制标准曲线。无患子总皂苷在100μg~1000μg的范围内，皂苷含量y（μg）与吸光度x符合以下联系：y=0.0006x+0.0838，r=0.9996，结果呈现良好的线性联系，可作为下一步工艺探讨无患子总皂苷质量评价的标准曲线，此策略重现先好，精密度高，平均加标回收率为99.83%，为无患子总皂苷的质量制约提供了依据。3通过自然发酵，酵母发酵，米曲霉发酵，三者在无患子水提液灭菌与不灭菌的情况下进行比较试验，发现接种米曲霉对皂苷的纯化效果最好，且水提液灭菌与不灭菌结果相差不大，所以选择水提液不灭菌的情况下接种米曲霉进行发酵。4水提-米曲霉发酵法提取分离纯化无患子总皂苷最佳工艺条件：无患子果皮粉碎至20目，温度40℃，分三次提取，料液比和提取时间依次为1：7，5h；1：3，2h和1：2，1h，总皂苷得率33.34%，总皂苷纯度为48.71%。水提液接种米曲霉发酵，温度30℃、接种龄12h、接种量3%、摇床转速150r/min、发酵7d，皂苷得率稍有下降（33.34%→28.89%），皂苷纯度可以48.71%提升到82.47%；当发酵液pH值为7.6左右时，纯度最高，可用发酵液pH简便快速地监控发酵终点。关键词：无患子论文总皂苷论文提取论文纯化论文米曲霉论文发酵论文
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Abstract4-9
第一章 绪论9-17

1.1 无患子概况9-10

1.1 无患子介绍9

1.2 无患子皂苷结构及性质9-10

1.3 无患子皂苷用途10

1.2 无患子皂苷的浅析测定10

1.3 无患子皂苷的提取策略10-12

1.3.1 水提法10-11

1.3.2 有机溶剂提取法11

1.3.3 超临界流体萃取法11

1.3.4 超声波法11

1.3.5 微波辅助萃取法11-12

1.4 无患子皂苷的分离纯化12-14

1.4.1 水提醇沉法12

1.4.2 絮凝剂法12

1.4.3 正丁醇萃取法12

1.4.4 重结晶法12

1.4.5 超滤膜分离法12-13

1.4.6 泡沫分离法13

1.4.7 大孔树脂法13-14

1.4.8 微生物发酵法14

1.5 无患子皂苷提取分离纯化有着的不足14-15

1.6 探讨的目的及作用15

1.7 探讨内容15-17

第二章 实验材料与策略17-27

2.1 实验材料17

2.2 主要仪器设备17

2.3 实验策略17-27

2.3.1 无患子总皂苷质控品的制备17-20

2.3.

1.1 无患子粗皂苷的提取17-18

2.3.

1.2 无患子总皂苷的分离18

2.3.

1.3 无患子总皂苷的纯化18-20

2.3.

1.4 无患子皂苷的定性测定20

2.3.2 无患子总皂苷纯度鉴定20-21

2.3.1 齐墩果酸标准曲线制备20-21

2.3.2 无患子总皂苷水解条件的确定21

2.3.3 无患子总皂苷与齐墩果酸量比换算系数21

2.3.3 无患子总皂苷香草醛-冰醋酸快速检测策略运用21

2.3.4 无患子总皂苷水提工艺探讨21-22

2.3.4.1 无患子总皂苷得率与纯度的测定22

2.3.4.2 单因素实验22

2.3.4.3 正交实验22

2.3.5 无患子总皂苷纯化工艺探讨22-25

2.3.5.1 无患子水提液论文导读：得率的影响33-343.4.1.4提取次数对皂苷得率的影响34-353.4.2水提工艺的正交实验353.4.3无患子水提液组分浅析35-363.5无患子总皂苷微生物纯化工艺探讨36-443.5.1菌种的选择36-373.5.2发酵纯化工艺的优化37-413.5.2.1发酵温度37-383.5.2.2接种龄的影响383.5.2.3接种量的影响38-393.5.2.4摇床转速的影响39-403.5.2.5
组份探讨23

2.3.5.2 无患子水提液发酵菌种选择23

2.3.5.3 米曲霉发酵纯化条件优化23-24

2.3.5.4 发酵前后无患子皂苷提取液去污能力的变化24

2.3.5.5 水提醇沉法24

2.3.5.6 絮凝法24

2.3.5.7 正丁醇萃取法24

2.3.5.8 大孔树脂吸附法24-25

2.3.5.9 放大实验发酵验证25

2.3.6 数据浅析与统计策略25-27

第三章 结果与讨论27-44

3.1 无患子总皂苷质控品的制备27-30

3.

1.1 大孔树脂分离所得无患子粗皂苷液成分鉴定27-29

3.

1.2 无患子总皂苷进一步纯化29-30

3.2 无患子总皂苷质控品纯度的测定30-31
3.

2.1 齐墩果酸标准曲线30-31

3.

2.2 无患子总皂苷水解后的吸收特点31

3.

2.3 无患子总皂苷水解条件的确定31

3.3 无患子总皂苷香草醛-冰醋酸快速检测策略运用31-32

3.4 无患子总皂苷水提工艺探讨32-36

3.4.

1. 水提工艺的单因素实验32-35

3.4.

1.1 温度对无患子总皂苷的影响32-33

3.4.

1.2 时间对无患子皂苷得率的影响33

3.4.

1.3 料液比对无患子皂苷得率的影响33-34

3.4.

1.4 提取次数对皂苷得率的影响34-35

3.4.2 水提工艺的正交实验35

3.4.3 无患子水提液组分浅析35-36

3.5 无患子总皂苷微生物纯化工艺探讨36-44

3.5.1 菌种的选择36-37

3.5.2 发酵纯化工艺的优化37-41

3.5.

2.1 发酵温度37-38

3.5.

2.2 接种龄的影响38

3.5.

2.3 接种量的影响38-39

3.5.

2.4 摇床转速的影响39-40

3.5.

2.5 时间的影响40-41

3.5.3 发酵前后去污力的变化41

3.5.4 发酵法与传统纯化策略的初步比较41-42

3.5.5 发酵纯化工艺的放大实验42-44

结论与展望44-45
致谢45-46
参考文献46-49
附录49-59
硕士期间发表的论文和取得的学术成果清单59