浅析气溶胶H5N1亚型禽流感病毒实验全过程实验室微环境集群监测和评价

论文导读：型禽流感病毒的滴度递减稀释，比较细胞培养吸附法、RT-PCR法、膜吸附洗脱-PCR法、RT-LAMP法几种策略的灵敏度，建立了一种针对H5N1亚型禽流感病毒气溶胶的高敏感度检测策略，即固相病毒吸附-增殖PCR法。为了确保实验室的安全，探讨实验操作禽流感病毒产生气溶胶的可能性。我们分组模拟了实验室内正常操作流感病毒的历程，分别为动
摘要：在实验室探讨流感病毒的历程中很多操作都会产生气溶胶，除了产生一些沉降于物体表面的粒径较大的气溶胶颗粒以外，更多的操作会产生粒径在1~5μm的气溶胶，比如离心，混匀等操作。这种微小粒径的气溶胶可长时间悬浮于空气中，并保持其感染性，一旦吸入进呼吸道最终将沉降在肺泡，未发病前，很难被诊断和治疗。实验人员在未知状态下吸入气溶胶引发病毒的感染，是实验室内感染的主要理由。由于病毒气溶胶收集困难，在空气中相对浓度低，检测的策略灵敏度不高，导致无法对实验室内微环境进行检测和评价。由此本课题组采取了一种新的气溶胶收集系统，该系统是由一个制约终端和六台便携式生物气溶胶收集器通过无线网络连接，可以同时、多点的收集微生物气溶胶。通过已知ELD50的H5N1亚型禽流感病毒的滴度递减稀释，比较细胞培养吸附法、RT-PCR法、膜吸附洗脱-PCR法、RT-LAMP法几种策略的灵敏度，建立了一种针对H5N1亚型禽流感病毒气溶胶的高敏感度检测策略，即固相病毒吸附-增殖PCR法。为了确保实验室的安全，探讨实验操作禽流感病毒产生气溶胶的可能性。我们分组模拟了实验室内正常操作流感病毒的历程，分别为动物解剖组、研磨组、离心组、移液组、磁力搅拌组、鸡胚接种组和实验动物感染组，以及对照组。此外，还模拟了与正常操作相关的常见事故，包括打碎装有病毒液的玻璃容器，注射器喷射病毒液和离心管破裂。在各组操作历程中利用设计的集群式空气微生物采集系统分别进行空气样本采集。对采集到的样本进行病毒吸附-增殖的检测，即利用流感病毒凝集红细胞的特点，浓缩后接种鸡胚进行病毒增殖，再用RT-PCR的策略对增殖后得病毒液进行检测。选取2种能产生H5N1亚型禽流感病毒气溶胶的实验室操作，评价紫外照射消毒、过氧乙酸喷雾消毒、过氧化氢喷雾消毒和二氧化氯喷雾消毒的效果，并撰写操作标准和应急预案，为实验室安全评价和规范化处理提供依据。探讨结果表明，细胞培养吸附法和膜吸附洗脱-PCR法灵敏度最低，无法检测到10倍稀释后的病毒液；RT-PCR法仅可以检测到10倍稀释的病毒液；RT-LAMP法灵敏度略高，可以检测到100倍稀释的病毒液，以上策略均不能用于H5N1亚型禽流感病毒气溶胶的检测。新建立的固相病毒吸附-增殖法结合RT-PCR，可以检测到1013倍稀释的病毒液，具有高灵敏度和特异性。利用这种策略，对实验室各种正常操作及相关的失误操作进行病毒气溶胶检测，判断实验室可能产生气溶胶的操作程序。结果显示，离心组及对照组为阴性，其他组均为阳性。选择磁力搅拌病毒液和打碎装有病毒液的玻璃容器2种模拟操作，对2种操作历程产生的病毒气溶胶进行消毒显示，紫外线照射消毒无法消杀H5N1亚型禽流感病毒气溶胶，而过氧化氢喷雾、过氧乙酸喷雾和二氧化氯喷雾都有很好的消毒效果，由于二氧化氯对人体无伤害，由此在H5N1亚型禽流感病毒气溶胶的应急处理中，首选二氧化氯喷雾式消毒。实验的结果证明了实验室很多种H5N1亚型禽流感的操作都会产生病毒气溶胶，只是由于病毒气溶胶在空气中的浓度低，不易收集和检测，本实验利用新建立的高敏感度的策略，对各模拟实验操作产生的气溶胶进行检测，推荐了最佳的气溶胶消毒策略，以确保实验室的环境健康。实验人员应该了解实验操作历程暴露的风险，积极做好安全防护工作，才能更好的防止实验室内病毒气溶胶感染以及实验室泄露风险。关键词：H5N1论文气溶胶论文实验室相关感染论文职业安全和环境安全论文
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Abstract7-13
引言13-15
第1篇 综述15-43
第1章 禽流感的探讨进展15-28

1.1 病原学15-17

1.2 宿主范围17-22

1.3 哺乳动物感染禽流感22-27

1.4 禽流感病毒气溶胶的传播27-28

第2章 气溶胶的探讨进展28-43

2.1 气溶胶的产生28-29

2.2 气溶胶的分类29-31

2.3 气溶胶感染的特点31-33

2.4 影响病毒气溶胶感染力的因素33-35

2.5 气溶胶收集35-39

2.6 空气中的病毒的实验室探讨39-40

2.7 气溶胶的检测40-43

第2篇 探讨内容43-80
第1章 H5论文导读：讨论68-692.4小结69-71第3章不同消毒策略对H5N1亚型禽流感病毒气溶胶消毒效果的比较71-803.1材料与策略72-753.2结果75-763.3讨论76-793.4小结79-80第3篇结论80-81参考文献81-100附录100-105导师及作者介绍105-107作者介绍及在学期间所取得的科研成果107-108致谢108上一页12
N1 亚型禽流感病毒气溶胶检测策略的建立43-60

1.1 材料与策略43-49

1.2 结果49-57

1.3 讨论57-59

1.4 小结59-60

第2章 实验操作 H5N1 亚型禽流感病毒所产生气溶胶的收集与检测60-71

2.1 材料与策略60-62

2.2 结果62-68

2.3 讨论68-69

2.4 小结69-71

第3章 不同消毒策略对H5N1亚型禽流感病毒气溶胶消毒效果的比较71-80

3.1 材料与策略72-75

3.2 结果75-76

3.3 讨论76-79

3.4 小结79-80

第3篇 结论80-81
参考文献81-100
附录100-105
导师及作者介绍105-107
作者介绍及在学期间所取得的科研成果107-108
致谢108