试议突变REGγ介导p53下游基因表达调控及突变型p53新功能

论文导读：p53可以形成一个稳定的聚合物因而具有促癌的潜在作用。突变型p53能够拮抗TGFβ介导的转录水平调控,这种拮抗作用是由于突变型p53蛋白与以依赖于与Smad3的MH2结构域结合形成复合体,并作用于TGFP的靶基因,以而反向调控TGFβ介导的基因转录,进而体现出拮抗TGFβ引起的生长抑制。同时,由于突变型p53也能通过上调上皮间质转移(EMT
摘要：自以蛋白酶体激活因子REGy被报道能够降解细胞中完整的蛋白质SRC-3及p2l后,人们对REGy生物学功能的探究越来越深刻广泛,而有关REGy在肿瘤发生进展中的探讨最受到人们的关注。在利用生物信息学策略推测出众多癌症信号通路中的关键基因与REGy相关,本论文利用免疫组织化学和荧光实时定量PCR技术,分别在组织水平和分子水平验证了REGy与癌症信号通路中大部分基因具有相关性,这些结果与生物信息学策略预测的结果具有一致性。利用免疫组织化学技术对多种不同类型的肿瘤组织样本进行检测发现,REGy广泛过表达于多种肿瘤中,包括卵巢癌、胃癌、肾癌及其他不常见的癌症中,并且也再一次证实了REGy甲状腺肿瘤、肠癌、乳腺癌、肺癌中过表达,这与之前的探讨成果是一致的,由此可以将REGy作为临床检测肿瘤时的一项重要检测指标。同时,通过免疫组织化学的策略发现在多种肿瘤组织中,p53与REGy不仅体现出共定位表达,而且在表达水平上呈现相关性。这一结果在组织水平上也验证了我们的推测,即p53作为一种重要的转录调节因子能够调控REGy的表达。其具体分子机制仍在探讨之中。在探讨p53蛋白的调控功能的同时,本论文发现p53蛋白与生长转化因子TGFβ信号通路有着着交流。TGFβ是一种典型的生长抑制因子,但抑制生长仅仅是其众多作用之一。TGFβ及其家族其他成员制约着细胞行为中许多基本方面,包括细胞上皮间质转移(EMT),细胞粘附分化,及微环境的修饰。由于TGFP受体或AD功能缺失而导致肿瘤细胞能够抵御TGFβ介导的细胞迁移或细胞凋亡,仅占众多案例中的很小一部分。人类癌症细胞中经常会发现p53基因的错义突变,包括最主要的DNA结合区域的点突变。多种p53突变无法正常与DNA特异性结合而导致其功能的缺失,但同时这些突变p53可以形成一个稳定的聚合物因而具有促癌的潜在作用。突变型p53能够拮抗TGFβ介导的转录水平调控,这种拮抗作用是由于突变型p53蛋白与以依赖于与Smad3的MH2结构域结合形成复合体,并作用于TGFP的靶基因,以而反向调控TGFβ介导的基因转录,进而体现出拮抗TGFβ引起的生长抑制。同时,由于突变型p53也能通过上调上皮间质转移(EMT)历程中重要分子Slug的表达,进而下调参与稳定细胞-细胞连接的相关分子,同时上调一些“转移机器”中的分子表达如基质金属蛋白酶MMP,促使细胞变得更论文导读：关键词：REGγ论文癌症论文TGFβ论文突变型p53论文EMT论文本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。论文摘要6-8ABSTRACT8-12第一章蛋白酶体降解系统12-161.1蛋白酶体121.2蛋白酶体激活因子12-141.3REG_γ的探讨进展141.4REG_γ与
具有侵袭力,因而获得一些新功能。通过荧光实时定量PCR、Co-IP等分子水平的策略发现突变型p53是通过MAPK信号通路而获得这些重要功能；而免疫组织化学染色的策略则在组织水平上验证了突变型p53蛋白与细胞迁移中重要蛋白标记Slug/MMP1、以及MAPK信号通路中关键分子pErK/ad在表达方位和表达水平上都具有密切的相关性。这些结果为突变型p53的新功能的探究提供了有利的证据。关键词：REGγ论文癌症论文TGFβ论文突变型p53论文EMT论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。论文摘要6-8
ABSTRACT8-12
第一章 蛋白酶体降解系统12-16

1.1 蛋白酶体12

1.2 蛋白酶体激活因子12-14

1.3 REG_γ的探讨进展14

1.4 REG_γ与疾病探讨14-16

第二章 TGFβ信号通路及p53蛋白16-22

2.1 TGFβ信号通路16-18

2.2 p53蛋白探讨进展18-19

2.3 突变型p53探讨近况19-22

第三章 实验材料与策略22-39

3.1 实验材料22

3.

1.1 细胞培养22

3.

1.2 肿瘤组织及蜡块22

3.2 实验仪器与试剂22-23
3.

2.1 实验试剂22-23

3.

2.2 实验仪器及设备23

3.3 实验策略23-39

3.1 肿瘤组织核酸及蛋白提取23-26

3.2 RNA反转录为cDNA26-27

3.3 PCR扩增p53 DNA Binding Domain(DBD)27-28

3.4 荧光实时定量PCR(QPCR,Real-time PCR)28-30

3.5 石蜡切片技术30-32

3.6 HE染色32-33

3.3.7 免疫组织化学技术(Immunohistochemistry,IHC)33-34

3.8 细胞增殖浅析(MTT比色法测定细胞活力)34-35

3.9 蛋白质免疫印迹浅析(Western Blot,WB)35-37

3.10 免疫荧光染色实验(Immunofluorescence,IF)37-39

第四章 结果与浅析39-54

4.1 REGγ调控p53下游基因生物学浅析39-41

4.2 突变型p53新功能的探讨41-54论文导读：4.2.1突变型p53调控REGγ表达41-454.2.2突变型p53拮抗TGFβ信号通路45-504.2.3突变型p53与细胞迁移50-54结论54-56附录56-58参考文献58-64探讨生期间发表文章64-65后记65-66上一页123

4.

2.1 突变型p53调控REGγ表达41-45

4.

2.2 突变型p53拮抗TGFβ信号通路45-50

4.

2.3 突变型p53与细胞迁移50-54

结论54-56
附录56-58
参考文献58-64
探讨生期间发表文章64-65
后记65-66