阐释脱氧ENG基因近端启动子区及5’-UTR区化与非小细胞肺癌联系

论文导读：
摘要：【背景与目的】肺癌是人类常见的恶性肿瘤之一，其死亡率居各类肿瘤死亡理由之首。肺癌按组织病理学可分为非小细胞肺癌（NSCLC）和小细胞肺癌(SCLC)两大类，前者占肺癌患者总数85%从上。肺癌的发生进展历程中，TGF-β信号通路发挥了极其重要的意义。TGF-β在肿瘤早期有抑制肿瘤细胞生长发育的抑癌意义，但在恶性肿瘤晚期反而推动肿瘤转移播散起着促癌意义。ENG基因编码的endogpn蛋白是TGF-β受体复合物重要组成部分，通过ALK1和ALK5增强ad1、ad2而抑制ad3通路。DNA的化是导致基因表达或者沉默的最典型表观机制，并且与肺癌的发生进展密切相关。本探讨主要目的是，了解ENG基因在非小细胞肺癌中mRNA、蛋白表达水平，并进一步探索其表达差别与ENG基因近端启动子区及5’-UTR区化状态之间的联系，旨在为非小细胞肺癌早期诊断、转移复发、疗效评估、存活预后提供一定论述依据。【办法】使用荧光实时定量PCR（Real-Time PCR）检测人支气管上皮细胞株(HBE)和4株非小细胞肺癌细胞株（A549、H1299、95C和95D）从及22对NSCLC癌与癌旁组织标本中ENG基因mRNA表达水平；并应用western blot办法检测ENG在上面陈述的样本中蛋白表达水平；采取BSP和TA克隆测序办法对5株细胞（HBE、A549、H1299、95C和95D）从及3对IV期NSCLC癌与癌旁组织标本ENG基因近端启动子区和5’-UTR区CpG位点化状态进行分析；选取A549、95D细胞株，使用5-Aza-2’-deoxycytidine去化药物处理细胞，再次应用荧光实时定量PCR办法检测药物处理组与未处理对照组细胞株中ENG的表达差别，并进一步使用BSP和TA克隆测序办法分析药物处理组细胞株5’-UTR区CpG位点化状态。【结果】1.荧光实时定量PCR实验结果显示，ENG基因mRNA在高转移性肺癌细胞H1299、95D细胞株中高表达，而在人正常支气管上皮细胞株HBE和低转移性肺癌细胞A549、95C细胞株中表达缺失，且H1299和95D中的相对表达量之间有着明显性差别(P0.001)；在22对NSCLC癌与癌旁组织标本中，ENG基因mRNA在19/22例癌组织中明显高表达(P0.0001),并与肺癌淋巴结转移有关（P=0.02）;Wes论文导读：系人员哦。中文摘要4-6Abstract6-10引言10-29一、肺癌近况简介10二、表观遗传学10-11三、DNA化与肿瘤发生的探讨发展11-18四、ENG基因与肿瘤探讨发展18-22参考文献22-29一、前言29-31二、材料与办法31-45

2.1材料31-342办法34-45三、结果45-573.1细胞中ENG基因m

tern blot实验结果表明，ENG基因编码蛋白endogpn在上面陈述的样本中的表达水平与mRNA表达水平一致。实验结果提示ENG基因高表达可能与非小细胞肺癌的恶性转移程度相关。2. ENG基因近端启动子区和5’-UTR区共2414bp， CpG位点68个，5’-UTR区含有1个CpG岛。BSP结果显示ENG启动子区散在的10/37个CpG位点化频率有着明显差别(P0.05)，5’-UTR区CpG岛除了+130位点从外的27个CpG位点化频率均有着明显差别(P0.05)。结合细胞株中ENG表达量状况分析发现CpG岛化与ENG表达量呈反比。3.去化药物5-Aza-2’-deoxycytidine处理A549、95D细胞后，BSP和TA克隆测序实验观察ENG基因5’-UTR区CpG岛位点化状况，发现该区域在A549和95D细胞株中化频率均下调；荧光实时定量PCR和western blot实验结果均显示ENG基因在95D细胞株中表达量下调（P0.0001），而在A549细胞株中无显著变化。【结论】1. ENG基因mRNA及蛋白水平在转移性恶性肺癌细胞株及NSCLC癌组织中表达上调，检测ENG的表达水平有助于NSCLC的早期诊断，并对NSCLC的复发转移及预后可能有一定的预测价值。2. ENG基因表达量与ENG基因5’-UTR区CpG位点化呈反比,说明DNA化是调节ENG表达的重要机制。3. ENG基因去化药物处理有效，恶性转移性肺癌细胞株中ENG基因表达下调，为临床化学药物治疗NSCLC提供了新的靶点。关键词：非小细胞肺癌论文ENG基因论文化论文5-杂氮-2’-脱氧胞苷论文
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Abstract6-10
引言10-29

一、肺癌近况简介10

二、表观遗传学10-11

三、DNA 化与肿瘤发生的探讨发展11-18

四、ENG 基因与肿瘤探讨发展18-22

参考文献22-29

一、前言29-31

二、材料与办法31-45

2.1 材料31-34

2.2 办法34-45

三、结果45-57

3.1 细胞中 ENG 基因 mRNA 的表达论文导读：状况45-463.2细胞中endogpn蛋白的表达状况46-473.3ENG基因在组织样本中的表达状况47-493.4ENG基因近端启动子区及5’-UTR区的DNA化状况49-543.5ENG基因去化药物处理54-57四、讨论57-60参考文献60-63英文对照简写表63-64攻读学位期间公开发表的论文64-65致谢65-66上一页123
状况45-46

3.2 细胞中 endogpn 蛋白的表达状况46-47

3.3 ENG 基因在组织样本中的表达状况47-49

3.4 ENG 基因近端启动子区及 5’-UTR 区的 DNA 化状况49-54

3.5 ENG 基因去化药物处理54-57

四、讨论57-60

参考文献60-63
英文对照简写表63-64
攻读学位期间公开发表的论文64-65
致谢65-66