探究肾病尿液miRNAs及蛋白质标志物在IgA肾病病情评估中作用大专

论文导读：总医院肾脏病科2012年9月至2013年3月首次经肾活检证实的IgAN患者。另设年龄性别匹配的健康人为对照组。在肾活检前留取尿液标本，分离尿沉渣和尿上清。肾脏病理采取Lee氏分级和半定量评分。1、尿miRNAs的检测：提取尿沉渣RNA，RT-PCR（realtimepolymerasechainreaction，实时定量PCR）检测miR-34a、miR-20

5、miR-21、miR-146a、

摘要：背景和目的：IgA肾病（IgAnephrophathy, IgAN）是世界范围内最常见的原发性肾小球疾病，病情轻重不一且预后有较大差别，作为一种终生性疾病需要对病情进行动态评估，肾活检是诊断IgAN的金标准，但作为有创检查，不易反复进行。因而，寻找能反映IgAN病变程度和预后的无创生物标志物具有重要作用。本课题通过检测与IgAN炎症、增殖、硬化相关的几种尿液中miRNAs和蛋白质标志物，明确其表达变化及对IgAN病情评估的运用价值。办法：收集解放医院肾脏病科2012年9月至2013年3月首次经肾活检证实的IgAN患者。另设年龄性别匹配的健康人为对照组。在肾活检前留取尿液标本，分离尿沉渣和尿上清。肾脏病理采取Lee氏分级和半定量评分。1、尿miRNAs的检测：提取尿沉渣RNA，RT-PCR（realtime polymerase chain reaction，实时定量PCR）检测miR-34a、miR-205、miR-21、miR-146a、miR-155的表达，分析尿miRNAs与IgAN临床指标及病理损害的联系。2、尿蛋白质标志物的检测：酶联免疫吸附法（ELISA）检测尿液上清sIgA、PDGF-DD、TGF-β1、MCP-1、TNF-α、IL-1β的表达，分析其与IgAN临床指标及病理损害的联系。3、绘制ROC曲线（receiveroperating characteristic curve，受试者作业特点曲线）评估尿液各标志物诊断IgAN的敏感度和特异度。logstic回归模型分析IgAN的危险因素。分析联合运用尿miRNAs和蛋白质标志物评估IgAN病情的意义。4、采取肾素-血管紧张素体系（RAS）阻断剂和/或激素（或免疫抑制剂）对IgAN患者进行治疗并随访，研究这些尿液标志物是否能反映疾病发展和疗效。结果：纳入IgAN患者52例，男31例，女21例，平均年龄33.45±10.36岁。其中Lee氏分级II级15例，III级24例，IV-V级13例。25例健康对照组，男13例，女12例，平均年龄33.72±7.79岁。1、IgAN尿沉渣miRNAs的检测与临床病理相关分析：与正常对照组相比，IgAN患者miR-34a、miR-205、miR-155降低、miR-21升高，miR-146a无明显差别。miR-205与血清肌酐（Scr）、24h尿蛋白定量（U-Prot）负相关，与肾小球滤过率（eGFR）正相关。miR-21与Scr、U-Prot正相关，与eGFR负相关。随IgANLee氏分级增多尿沉渣miR-205水平逐渐降低，而miRNA-21水平逐渐升高。五种miRNAs在不同系膜增殖程度的患者间表达无差别。miR-205与肾小球全球硬化比例负相关，miR-21与全球硬化和新月体比例呈正相关。IgAN肾小管萎缩和间质纤维化越重，尿miR-205水平越低，而miR-21越高，但miR-34a、miR-146a、miR-155无明显差别。尿miR-21水平随间质炎细胞浸润程度加重而增多，miR-34a、miR-205、miR-146a、miR-155无明显差别。伴或不伴有肾血管病变的IgAN患者，尿中五种miRNAs的表达无差别。2、IgAN尿蛋白质标志物的检测与临床病理相关分析：与正常对照组相比，IgAN尿sIgA、PDGF-DD、TGF-β1和MCP-1明显升高，且与Scr、U-prot正相关，与eGFR负相关。两组间IL-1β和TNF-α无明显差别。IgAN Lee氏分级IV-V级患者尿sIgA、PDGF-DD显著高于II级。IV-V级和III级患者尿TGF-β1、MCP-1显著高于II级。随系膜增殖程度增多，尿sIgA、PDGF-DD、TGF-β1、MCP-1、TNF-α水平增多。尿sIgA、TGF-β1和MCP-1水平均与肾小球硬化、总新月体比例、肾小管萎缩程度有关，而肾间质纤维化和炎细胞浸润程度与尿sIgA、MCP-1和TNF-α水平有关。伴或不伴有肾血管病变的IgAN患者，尿中从上几种蛋白质标志物的表达无差别。3、联合尿miRNAs和蛋白质标志物对IgAN的评估意义。logistic回归分析示PDGF-DD≥16.95pg/mg Cr、MCP-1≥237.00pg/mg Cr为IgAN的危险因素。尿miR-2论文导读：
05、miR-21、sIgA、PDGF-DD、TGF-β1、MCP-1均与Scr、U-prot、eGFR有一定相关性。sIgA、PDGF-DD、TGF-β1、MCP-1可从反映系膜细胞增殖轻重；miR-205、miR-21、sIgA、TGF-β1与肾小球全球硬化、肾小管萎缩程度相关；miR-21、sIgA、MCP-1可从反映间质纤维化和炎细胞浸润程度。MCP-1≥969.48pg/mg Cr是中重度系膜增殖的危险因素。miR-21（2-ΔΔct）≥0.8910，TGF-β1≥53.48pg/mg Cr是肾小管中重度萎缩的危险因素。miR-21（2~(-ΔΔct)）≥0.8910提示间质中重度纤维化。miR-21（2~(-ΔΔct)）≥0.6190提示间质炎细胞中重度浸润。4、尿液标志物与临床治疗反应的相关分析。采取RAS阻断剂和/或激素（或免疫抑制剂）治疗，随访4个月后，患者U-Prot较前减少，eGFR较前升高（p=0.026）。激素/免疫抑制剂治疗组，GFR的下降率(ml/min/1.73m2/month)与基线尿miR-146a正相关，与MCP-1负相关；尿蛋白减少（g/24h/month）与miR-205负相关，与sIgA正相关。单纯RAS阻断剂治疗组，GFR的下降率与基线尿PDGF-DD负相关，尿蛋白的减少与TGF-β1正相关。结论： IgAN尿沉渣miRNAs及尿液蛋白质标志物不仅与尿蛋白、eGFR等临床指标相关，也能反映肾小球、肾小管及肾间质的病理损伤特征及程度。联合尿miRNAs与蛋白尿等多个标志物可从提升评估的准确性。有些基线尿中标志物水平可从预测IgAN病变发展从及对临床治疗的反应性，成为潜在的IgAN无创标志物。但需通过长期随访，扩大样本进一步验证，从确定其临床运用价值。关键词：IgA肾病论文标志物论文miRNA论文蛋白质论文
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中文摘要7-10
Abstract10-13
第一部分 IgAN 尿沉渣 miRNAs 的检测与临床病理相关分析13-35
前言13-15
材料与办法15-21
结果21-31
讨论31-34
小结34-35
第二部分 IgAN 尿液蛋白质标志物的检测与临床病理相关分析35-51
前言35-37
材料和办法37-40
结果40-47
讨论47-50
小结50-51
第三部分 联合尿 miRNAs 和蛋白质标志物对 IgAN 病变程度及临床治疗的评估意义51-64
前言51-52
材料办法52-53
结果53-61
讨论61-63
小结63-64
全文总结64-65
参考文献65-74
文献综述 IgA 肾病生物标志物的探讨发展74-84
参考文献80-84
攻读学位期间发表文章状况84-85
致谢85-86