简论淋巴细胞强化阿托伐他汀对不稳定型心绞痛患者PCI围术期CD4+T淋巴细胞试述Sprouty1表达影响大纲

论文导读：te.ThelevelofSprouty-1prote12345下一页
DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-028

2.201

3.08.021

基金项目：国家自然科学基金资助项目（81160046） 作者单位：530021南宁，广西医科大学第一附属医院心内科广西心血管病研究所
通信作者：李浪，Email：drlilang@163.com
【摘要】目的探讨强化剂量他托伐他汀对不稳定心绞痛患者PCI围术期CD4+T淋巴细胞Sprouty1表达的影响。方法入选广西医科大学第一附属医院住院不稳定型心绞痛患者52例，随机（随机数字法）分为强化他汀组（术前80 mg/d，术后40 mg/d，n=26）和常规他汀组（术前术后均20 mg/d，n=26）。分别于PCI术前、术后16～24 h抽取新鲜外周血，免疫磁珠法分选出CD4+T淋巴细胞，荧光定量PCR检测Sprouty1mRNA表达，蛋白免疫印迹法检测Sprouty1蛋白表达，酶联免疫法检测IL-2炎症因子的表达。结果①与PCI术前强化组相比，PCI术后强化组Sprouty1mRNA、Sprouty1蛋白表达明显升高（P0.05）③与PCI术前强化组相比，术后强化组IL-2浓度降低（P0.05）。结论强化剂量的阿托伐他汀可以通过上调CD4+T淋巴细胞Sprouty1的表达，从而减少PCI术后心肌的炎症反应。
【关键词】不稳定型心绞痛；阿托伐他汀；CD4+T淋巴细胞；Sprouty1；IL-2
Effects of large dose of atorvastatin on the expression of Sprouty-1 in CD4+T lymphocytes from unstable angina patients during perioperative period of PCI WEN Wei-ming，SU Qiang，WANG Jiang-you，ZHOU You，LIU Yang，LU Yong-guang，LI Lang. Department of Cardiology，The First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University，Nanning 530021，China.
Corresponding author：LI Lang，Email：drlilang@163.com
【Abstract】ObjectiveTo investigate the effects of large dose of atorvastatin on the expression of Sprouty-1 in CD4+T lymphocytes from unstable angina patients during perioperative period of PCI.MethodsA total of 52 unstable angina patients enrolled were divided randomly（random number） into large-dose atorvastatin （80 mg/d， n=26） pretreated group and moderate-dose atorvastatin （20 mg/d， n=26） pretreated group. Circulating CD4+T cells were obtained by magnetic cell sorting system （MACS） before PCI and 18-24h after PCI. For detecting the gene expression， the reverse transcription fluorescent quantitative polymerase chain reaction （RT-PCR） was used to 源于：毕业总结范文www.7ctime.com
measure the expression of Sprouty-1 mRNA in CD4+ T lymphocyte. The level of Sprouty-1 prote论文导读：I术后心肌损伤作用机制，为PCI术后心肌损伤的临床防治提供理论依据。1资料与方法1.1一般资料选取2011年10月至2012年4月入住广西医科大学第一附属医院并行择期PCI的UAP患者52例（男45例，女7例），年龄（62.39±9.41）岁，随机（随机数字法）分为强化他汀组（术前2d上一页12345下一页
in was detected with Western blot analysis and IL-2 was quantified by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. Results①Compared with large-dose group before PCI，the expression of Sprouty-1 mRNA and Sprouty-1 protein levels were dramatically increased in large-dose group after PCI （P0.05）. ③Compared with large-dose group before PCI，the serum level of IL-2 was decreased in large-dose group after PCI （P0.05）. ConclusionsLarge-dose atorvastatin pretreatment reduced post-PCI myocardial inflammation through up-regulating the expression of Sprouty-1 mRNA and level of Sprouty-1 protein in CD4+T lymphocytes. 【Key words】Unstable angina； Atorvastatin； CD4+T lymphocytes； Sprouty1， IL-2
经皮冠状动脉介入治疗（percutaneous coronary intervention，PCI）术中及术后的病死率和紧急冠脉搭桥术逐渐减少，但术后心肌损伤（periprocedural myocardial Injury，PMI）仍是临床常见而棘手的并发症，是患者近期和远期预后不良的独立预测因子，临床上缺乏有效的防治方法。 既往研究发现，不稳定性心绞痛（unstable angina pectoris，UAP）急性反应期可激活CD4+T淋巴细胞，并致使IL-2、IFN-γ等炎症因子的分泌增加，参与了不稳定性斑块的发生、发展过程。PCI术可诱发或促进不稳定斑块破裂，不但激活局部的T淋巴细胞，还可以导致外周血淋巴细胞的显著激活和氧化应激产物标志物的显著增高，促进心肌局部炎症的发生发展[3]。Sprouty最早作为在果蝇的支气管分化中成纤维细胞生长因子的拮抗剂而被发现[4]。近年发现Sprouty1参与负性调控淋巴细胞的增殖和分化，过表达 Sprouty1能抑制CD4+T淋巴细胞的分化与激活，并减少IL-2等炎症因子的分泌[5]。因此，可推测Sprouty1参与了炎症反应的过程，并起到负调控炎症反应的作用。
ARMYDA多项研究表明，PCI术前2 d给予80 mg大剂量的阿托伐他汀，能有效降低炎症指标CRP水平，明显减少术后心肌损伤的发生率，30 d主要不良心脏事件危险降低88%[6-7]，推测该效益可能归因于阿托伐他汀抗炎作用。目前虽然他汀类药物在PCI术后心肌损伤中的作用机制尚未完全阐明，但术后心肌CD4+T淋巴细胞被激活，诱发心肌炎症反应是明确的[8]，然而他汀类药物可以抑制心肌炎症反应。因此，本研究观察强化他汀对不稳定心绞痛患者PCI围术期CD4+T淋巴细胞Sprouty1表达的影响，以探讨他汀预防PCI术后心肌损伤作用机制，为PCI术后心肌损伤的临床防治提供理论依据。
1资料与方法

1.1一般资料

选取2011年10月至2012年4月入住广西医科大学第一附属医院并行择期PCI的UAP患者52例（男45例，女7例），年龄（62.39±9.41）岁，随机（随机数字法）分为强化他汀组（术前2 d论文导读：ABI、美国），Odessay双色红外激光成像系统扫描仪。1.4细胞提取根据Ficoll-Paque密度梯度离心法提取三组患者和健康志愿者PBMC细胞，重悬于1ml1640培养基，取10μlPBMC重悬细胞加90μlPBS稀释10倍后作细胞计数，余下细胞严格按照DynabeadsFlowCompTMHumanCD4磁珠分选试剂盒说明书操作分选CD4+T淋巴细胞。分选出的
给予80mg/d， 术后给予40 mg/d，n=26）和常规他汀组（术前术后均为20 mg/d，n=26）两组均为术前2 d首次服用阿托伐他汀。UAP患者均经冠脉照影证实存在冠状动脉狭窄，有行PCI指征，且心肌酶学标记物CK-MB和CTnI阴性，无他汀应用禁忌证，初发心绞痛、劳累恶化性心绞痛和静息性心绞痛。排除：①合并严重感染或肿瘤患者；②严重肝肾功能不全者；③他汀类药物过敏者；④脑卒中；⑤左室射血分数<30%；⑥急诊PCI。

1.2采集标本

UAP组冠脉造影证实具有冠脉病变并需要置入支架的患者分别采集PCI前，术后18～24 h新鲜外周静脉血20 ml。对照组入选后于次日早上用采集新鲜外周静脉血20 ml。20 ml中取1 ml血自然凝固20 min后，2000 r/min离心10 min，收集血清用于ELISA检测IL-2。余下用肝素抗凝后分离细胞。本实验遵照广西医科大学委员会人体试验管理规范执行。所有的病例选择和标本提取均获患者知情同意并签署同意书。
1.3材料
人淋巴细胞分离液（索莱宝，中国），Dynabeads FlowCompTM Human CD4试剂盒（Dynal，挪威），RPMI1640培养基（Hyclone，USA），TRNzol-A+总RNA提取试剂（天根，中国）RevertAidTM FistStrand cDNA Synthesis kit（Fermentas，立陶宛），Fase Start Universal SYBR Green Master（Rox，USA）， Sprouty1mRNA、GAPDHmRNA引物（生工，中国），兔抗人Sprouty1单抗（santa cruz ，USA），羊抗兔荧光二抗（LI-COR，USA），GAPDH单抗（碧云天，中国），荧光二抗（KPL，USA），蛋白Marker（Fermentas，立陶宛），Human TNF-alpha Platinum ELISA和Human IL-2 Platinum ELISA（ebioscience，USA）， Step-one 荧光定量基因扩增仪（ABI、美国），Odessay双色红外激光成像系统扫描仪。

1.4细胞提取

根据Ficoll-Paque密度梯度离心法提取三组患者和健康志愿者PBMC细胞，重悬于1 ml 1640培养基，取10 μl PBMC重悬细胞加90 μl PBS稀释10倍后作细胞计数，余下细胞严格按照Dynabeads FlowCompTM Human CD4磁珠分选试剂盒说明书操作分选CD4+T淋巴细胞。分选出的细胞同样做细胞计数，同时用0.4%台盼蓝染色观察并计算出活细胞存活率，存活率>90%的CD4+T淋巴细胞留下备用。

1.5荧光定量PCR检测Sprouty1mRNA表达量

按照 Trizol操作说明提取细胞的总RNA， 并用Nanodrop测量其浓度，同时用1%琼脂糖凝胶电泳检测RNA有无降解，调整 RNA 的量为 1 μg/μl ，逆转录合成cDNA。采用SYBR GreenΙ荧光标记法检测PCR 产物，总反应体系为20 μl ，Sprouty1引物：上游：5’-TTCCCTCCTTCCCCTGTTGCCA-3’下游：5’- CCAGGTGCAGCTTCCCAGTCC-3’；GAPDH引物：上游：5’-GAGTCAACGGATTTGGTCGT-3’下游：5’- GACAAGCTTCCCGTTCTCAG-3’，按试剂盒说明设置反应体系及参数，每个样本均做复孔检测，同时每次反应均设置阴性孔。PCR产物经过测序检测。结果采用2-ΔΔCT法比较。 源于：论文提纲格式范文www.7ctime.com
摘自：学年论文格式www.7ctime.com
论文导读：
PCI术前2 d给予80 mg大剂量的阿托伐他汀，可以上调Sprouty1蛋白表达，降低血清IL-2质量浓度。而常规剂量组Sprouty1蛋白表达上调不明显，血清IL-2质量浓度表现出升高趋势，可能与PCI术刺激炎症的加强有关。强化他汀减少术后心肌损伤，可能通过上调CD4+T淋巴细胞Sprouty1的表达，进而降低IL-2质量浓度起效.强化他汀能减少术后心肌损伤机制，与上调CD4+T淋巴细胞Sprouty1的表达，降低PCI术后的炎症反应有关。在人T细胞中Sprouty1基因经TCR信号刺激作用后表达上调，随后又负反馈调控TCR信号通路，减少IL-2的分泌[5]。此外，一些物理因素也可以对Sprouty1进行调控，例如，Huebert等[20]发现心脏受机械负荷刺激降低可导致Sprouty1上调，并伴随ERK1/2磷酸化程度降低，改善机械非负荷性刺激所致的心肌面积增大。在分子生物学水平上，微小核糖核酸-21（miRNA-21）对于Sprouty1表达的调控是目前研究的热点。microRNA-21可通过和sprouty-mRNA碱基配对引导RNA诱导的沉默复合体降解sprouty-mRNA或阻碍其翻译[21]。
参考文献
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