试析胰岛素APP17肽对糖尿病脑病改善作用及与胰岛素信号通路相关性

论文导读：意义。2.PET/CT显像及免疫组化初步判断APP17肽的意义机制使用PET/CT显像技术对模型组和治疗组中的大鼠脑部糖代谢水平进行了探讨。大鼠脑部的糖代谢评价显示与正常对照组相比,糖尿病脑病组大脑皮层和海马的葡萄糖摄取减少；而与糖尿病脑病组相比，APP17肽给药组，葡萄糖摄取明显增多，脑组织糖代谢水平得到大幅改进。此外，通过对
摘要：本论文运用药理学、影像学和分子生物学等技术，首先以整体水平上开展了APP17肽对糖尿病脑病的改进意义探讨，并运用PET/CT显像技术研究了其对糖尿病脑病大鼠脑部糖代谢的影响；然后以细胞水平和分子水平上研究了APP17肽对胰岛素相关信号转导通路的影响。1. APP17肽对糖尿病脑病大鼠认知能力的影响通过STZ诱导的办法建立2型糖尿病模型，模型大鼠出现显著的的多食、多饮、多尿和体重下降的“三多一少”体现，符合糖尿病的典型特点，成模率为90%。糖尿病模型建立12周后，Morris水迷宫实验筛选出认知功能减退的糖尿病脑病模型，成摸率为41.3%。在给予模型大鼠不同剂量的APP17肽治疗后，发现其并不能改进糖尿病脑病大鼠的血糖水平和体重指标，但是对模型大鼠的记忆功能具有显著的改进意义。2. PET/CT显像及免疫组化初步判断APP17肽的意义机制使用PET/CT显像技术对模型组和治疗组中的大鼠脑部糖代谢水平进行了探讨。大鼠脑部的糖代谢评价显示与正常对照组相比,糖尿病脑病组大脑皮层和海马的葡萄糖摄取减少；而与糖尿病脑病组相比，APP17肽给药组，葡萄糖摄取明显增多，脑组织糖代谢水平得到大幅改进。此外，通过对模型大鼠脑部海马区相关蛋白的检查，发现APP17肽可从明显增多Glut4的表达，对IGF1R和IR的表达无明显性影响，提示APP17肽的意义可能与胰岛素相关通路有关。3. APP17肽对低表达IGF1R的ΔIGF1R-PC12细胞株的意义为进一步研究APP17肽改进糖尿病脑病大鼠认知功能障碍的机制及对胰岛素相关信号转导通路的影响，通过慢病毒包装转染技术，使IGF1R在PC12中的表达受到抑制，通过G418筛选获得了低表达IGF1R的ΔIGF1R-PC12细胞株。从此细胞模型为基础进一步研究了APP17肽意义与IGF1R的相关性。探讨结果表明，APP17肽提升了胰岛素对PC12细胞IR磷酸化的敏感性，而该意义的触发可能与抑制IGF1R通路有关，同时，PI3K-Akt Pathway在APP17肽改进PC12细胞糖代谢的历程中也起着重要意义。本论文运用STZ诱导加Morris水迷宫筛选的办法成功的建立了糖尿病脑病大鼠模型，并证实APP17肽具有改进模型大鼠认知功能的意义。PET/CT发现APP17肽可从改进模型大鼠脑组织对葡萄糖的使用率，而免疫组化的结果证实其可能与增多了脑内Glut4的表达有关。进一步通过探讨APP17肽对低表达IGF1R的ΔIGF1R-PC12细胞株的意义，发现APP17肽的改进意义与胰岛素信号通路中的IR、IGF1R和PI3K有关。此项探讨，将为糖尿病脑病药物的研发提供了新的思路和靶点。关键词：APP17肽论文糖尿病脑病论文胰岛素信号通路论文胰岛素生长因子1型受体论文
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中文摘要6-9
Abstract9-17
引言17-18
第1章 绪论18-35

1.1 2 型糖尿病脑病的探讨发展18-26

1.1 2 型糖尿病脑病的流行病学探讨18-21

1.2 2 型糖尿病脑病的影像学探讨21-22

1.3 2 型糖尿病脑病的发病机制探讨22-25

1.4 2 型糖尿病脑病的动物模型探讨及潜在治疗办法25-26

1.2 1 型糖尿病脑病的探讨发展26-31

1.2.1 1 型糖尿病脑病的流行病学探讨26-27

1.2.2 1 型糖尿病脑病的影像学探讨27

1.2.3 1 型糖尿病脑病的发病机制探讨27-29

1.2.4 1 型糖尿病脑病动物模型的结构转变探讨29-31

1.3 APP17 肽的探讨发展31-35

1.3.1 APP17 肽的神经保护意义32-33

1.3.2 APP17 肽对 Aβ沉积和 Tau 蛋白磷酸化的影响33

1.3.3 APP17 肽的对凋亡相关因子的意义33-35

第2章 材料和办法35-50

2.1 主要仪器35-36

2.2 主要试剂36-37

2.3 实验动物和细胞株37

2.4 主要试剂的配制37-39

2.5 实验办法39-50

2.5.1 糖尿病大鼠模型的建立39-40

2.5.2 Morris 水迷宫论文导读：

试验筛选糖尿病脑病大鼠模型40

2.5.3 APP17 肽对糖尿病脑病大鼠记忆能力的影响40

2.5.4 PET/CT 检测 APP17 肽对糖尿病脑病大鼠脑部糖代谢的影响40-41

2.5.5 脑组织的处理及准备41

2.5.6 免疫组织化学染色41-42

2.5.7 ΔIGF1R-PC12 即 IGF1R 缺失的 PC12 细胞构建及筛选42-46

2.5.8 WST-1 检测 APP17 肽对 PC12 细胞的杀伤意义46

2.5.9 IGF1R 缺失对 APP17 诱导 IRS 磷酸化的影响46-49

2.5.10 统计学办法49-50

第3章 实验结果50-65

3.1 糖尿病脑病大鼠模型的建立50-53

3.

1.1 实验期间各组大鼠一般状态观察50

3.

1.2 糖尿病动物模型的建立50-52

3.

1.3 糖尿病脑病动物模型的建立52-53

3.2 PP17 肽对糖尿病脑病大鼠认知能力的影响53-56
3.

2.1 APP17 肽对糖尿病脑病大鼠血糖、体重的影响53-55

3.

2.2 APP17 肽对糖尿病脑病大鼠认知能力的影响55-56

3.3 PET/CT 检测 APP17 肽对糖尿病脑病大鼠脑部糖代谢的影响56-58
3.4 免疫组化法检测 APP17 肽对糖尿病脑病大鼠脑内 IGF1R、IR和 GLUT4 表达的影响58-59

3.5 IGF1R 缺失的ΔIGF1R-PC12 细胞的构建59-60

3.6 APP17 肽对胰岛素相关信号转导通路的影响60-65

3.6.1 APP17 肽对 PC12 细胞的体外杀伤意义60-61

3.6.2 APP17 肽对 PC12 细胞的体外杀伤意义61-62

3.6.3 IGF1R 可能为 APP17 肽改进 PC12 细胞糖代谢的靶受体62-63
3.6.4 PI3K-Akt Pathway 在 APP17 肽改进 PC12 细胞糖代谢中起到重要意义63-65
第4章 讨论65-72

4.1 APP 糖蛋白性质及代谢产物相关探讨状况65-67

4.2 T 的磷酸化修饰在胰岛素通路中的意义67-70

4.3 APP17 治疗糖尿病脑病相关状况的总结70-72

第5章 结论72-73
参考文献73-91
作者介绍及在学期间所取得的科研成果91-93
致谢93