简析职业性职业性慢性锰中毒人群及染锰PC12细胞中MnSOD基因表达水平变化结论

论文导读：，随MnCl2浓度增加，RNA表达水平逐渐下降；MnCl2浓度与RNA相对表达量的相联系数为-0.958，p＜0.05，MnCl2作用时间与RNA相对表达量的相联系数为-0.14，p＞0.05。【探讨结论】1MnSOD基因mRNA表达水平可能与职业性慢性锰中毒的发生有关，MnSOD的表达下降可能有助于锰中毒的发生；2MnCl2对PC12细胞具有毒性作用，浓度越高，毒性作用越强，MnS
摘要：【探讨背景】锰是人体必需的微量元素，也是一种重要的环境和工业污染物，由于职业性、医源性和环境接触的理由，锰主要通过呼吸道吸收，体内含量增高，可以通过血脑屏障进入脑组织，损坏中枢神经系统。慢时锰在大脑中蓄积，尤其在纹状体中含量最高，主要影响纹状体苍白球和黑质网状带，引发基底节多巴胺神经元退行性病变。由于发病率的升高，职业性慢性锰中毒受到越来越多的关注。锰中毒的典型症状—震颤和肌张力增高，类似帕金森氏综合征。还可出现学习记忆功能、认知功能和空间方向感的显著障碍及易哭泣、烦躁、胆怯怕人、孤独自闭等显著情绪转变的症状。锰的神经毒性作用机制目前尚不完全清楚，主要涉及氧化应激、线粒体损伤、神经递质代谢及细胞凋亡等方面。在氧化应激及线粒体损伤机制中，主要的抗氧化剂锰超氧化物歧化酶（MnSOD）具有十分重要的作用，本课题组前期探讨发现，MnSOD基因多态性与职业性慢性锰中毒的易感性有关，可能为易感基因。在锰暴露历程中，探讨其表达的变化与疾病的发生具的联系具有十分重要的作用。【探讨目的】分别以锰暴露病例对照人群和PC12细胞体外染锰模型为探讨对象，观察职业性慢性锰中毒病例与对照中MnSOD mRNA表达水平的差别，体外细胞模型在锰不同的时间剂量作用下，细胞增殖抑制及MnSOD mRNA表达水平的变化，探讨MnSOD在锰神经毒作用中的机制。【探讨策略】1.筛选临床上确诊的职业性慢性锰中毒病人31例作为病例组，病例诊断依据国家职业性慢性锰中毒诊断标准GBZ3-2006。选择与病人同性别、同工种、同车间、同期作业，工龄（相差≤3年）、年龄（相差≤5岁）相近，个人生活史和家族遗传史相似等而未发病的人群作为对照组。对每位确定的探讨对象采血5ml，提取RNA。采取半定量RT-PCR策略检测MnSOD基因RNA表达水平，统计浅析病例组与对照组人群基因表达水平的差别，浅析MnSOD基因表达与职业性慢性锰中毒的联系。2.以大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)为模型，采取0、100、200、400、600、800、1000μmol/LMnCl2的培养液，分别培养对数生长期PC12细胞1、2、3、4天后，光学显微镜观察细胞增殖及形态变化，用MTT法测定锰的细胞毒性作用，提取细胞RNA，RT-PCR策略检测RNA表达水平变化。【探讨结果】1对照组和病例组在性别构成、年龄和工龄上差别无统计学作用；MnSOD基因mRNA表达水平在职业性慢性锰中毒病例组与对照组间有显著性差别(t=-4.589,p＜0.05)，二者差别的95%可信区间为[-0.277，-0.107]，且病例组较对照组表达减少。2MTT实验结果显示，在一定浓度的条件下，锰对PCl2细胞的增殖抑制呈时间、浓度依赖效应。随着浓度的增大以及作用时间的延长，锰对PC12细胞增殖的抑制程度逐渐增强；400μmol/L MnCl2作用下3天，细胞生长抑制率超过50%；相关浅析发现MnCl2浓度与细胞抑制率的相联系数为0.975，p＜0.05，而MnCl2作用时间与细胞抑制率的相联系数为0.116，p＞0.05。MnSOD mRNA表达水平实验结果显示，相同时间下，各浓度MnCl2所致PC12细胞MnSOD基因RNA表达水平有着显著差别（p＜0.05），随MnCl2浓度增加，RNA表达水平逐渐下降；MnCl2浓度与RNA相对表达量的相联系数为-0.958，p＜0.05，MnCl2作用时间与RNA相对表达量的相联系数为-0.14，p＞0.05。【探讨结论】1MnSOD基因mRNA表达水平可能与职业性慢性锰中毒的发生有关，MnSOD的表达下降可能有助于锰中毒的发生；2MnCl2对PC12细胞具有毒性作用，浓度越高，毒性作用越强，MnSOD基因mRNA的表达越少。说明MnSOD mRNA的表达，可能参与了锰致神经细胞损伤的历程，推测其高表达可能对锰的神经毒性起到抑制作用。关键词：锰论文职业性慢性锰中毒论文PC12细胞论文MnSOD论文mRNA表达论文
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摘要7-9
ABSTRACT9论文导读：1探讨对象161.2实验材料16-171.3探讨策略17-201.4结果20-242染锰PC12细胞MnSOD基因表达水平变化探讨24-372.1实验材料24-252.2探讨策略25-282.3结果28-37讨论37-431探讨样本的选择392候选基因MnSOD的选择39-403MnSOD基因mRNA表达水平与职业性慢性锰中毒的联系40-414染锰PC12细胞MnSOD基因表达水平变
-12
主要符号表12-13
前言13-16
1 职业性慢性锰中毒人群 MnSOD 基因表达水平探讨16-24

1.1 探讨对象16

1.2 实验材料16-17

1.3 探讨策略17-20

1.4 结果20-24

2 染锰 PC12 细胞 MnSOD 基因表达水平变化探讨24-37

2.1 实验材料24-25

2.2 探讨策略25-28

2.3 结果28-37

讨论37-43
1 探讨样本的选择39
2 候选基因 MnSOD 的选择39-40
3 MnSOD 基因 mRNA 表达水平与职业性慢性锰中毒的联系40-41
4 染锰 PC12 细胞 MnSOD 基因表达水平变化探讨41-43
结论43-44
参考文献44-47
附录47-50
综述50-54
参考文献52-54
攻读学位期间取得的探讨成果54-55
致谢55