试析受体GB1e在乳腺癌细胞中亚细胞分布及功能初

论文导读：噬作用重新进入细胞质。HA-GB1e稳定表达细胞系中，Baclofen能够增强Akt的磷酸化水平，但对细胞增殖没有影响。现有结果为后续探讨GB1e在肿瘤细胞中的生物学功能奠定了实验基础。关键词：GABA_B受体论文GB1e论文分泌论文MCF-7论文MDA-MB-231论文膜表达论文本论文由www.7ctime.com,需要
摘要：γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid，GABA)为脊椎动物大脑中的主要抑制性神经递质，通过离子型受体GABAA和GABAC以及代谢型受体GABA_B发挥其功能。其中，代谢型GABA_B受体属于GPCR家族，通过G蛋白及其下游效应分子调节细胞功能。GABA_B受体在大脑中分布广泛，其功能异常与多种神经性及精神性疾病相关，包括癫痫、精神分裂症和药物滥用等。由此，GABA_B受体已经成为神经系统疾病中的一个关键靶点。探讨发现，GABA_B受体可以调节多种肿瘤细胞的增殖与迁移，但机制不明。GABA_B受体的亚单位GB1具有多种亚型，其中GB1e（不含跨膜区及胞内区）的mRNA广泛表达于外周组织及多种人源肿瘤细胞系中。有一篇报道表明GB1e在人的正常的外周组织中是表达的，但是尚未见到肿瘤细胞中GB1e表达的报道。本论文检测了外源性GB1e在人乳腺癌细胞MDA-MB-231及MCF-7中的亚细胞分布。首先，构建了带有不同标签的GB1e质粒，包括pEGFP-N1-GB1e-GFP，pEGFP-N1-HA-GB1e和pEGFP-N1-GB1e-3×Flag等；其次，构建了稳定表达GB1e的人乳腺癌细胞系MDA-MB-231/HA-GB1e和MCF-7/HA-GB1e。 ELISA实验结果表明GB1e在MDA-MB-231和MCF-7细胞膜表面没有表达，confocal图像显示GB1e分布于细胞质中，免疫沉降法（IP）检测到GB1e可分泌到细胞培养液中，并且分泌性的GB1e可以通过吞噬作用重新进入细胞质。HA-GB1e稳定表达细胞系中，Baclofen能够增强Akt的磷酸化水平，但对细胞增殖没有影响。现有结果为后续探讨GB1e在肿瘤细胞中的生物学功能奠定了实验基础。关键词：GABA_B受体论文GB1e论文分泌论文MCF-7论文MDA-MB-231论文膜表达论文
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Abstract5-8
1 绪论8-15

1.1 GABA_B受体的介绍8-11

1.2 GABA_B受体与肿瘤11-13

1.3 GB1e 与肿瘤13-14

1.4 本课题的探讨目标、内论文导读：172.5稳定细胞系的建立17-182.6SDS-PAGE电泳182.7蛋白免疫印迹（Westernblotting）18-192.8激光共聚焦扫描显微技术（Confocallaserscanningmicroscopy）19-213材料与策略21-343.1实验材料213.2实验策略21-344实验结果34-434.1GB1在乳腺癌细胞中的免疫染色344.2GB1e质粒的构建34-354.3稳定表达HA-GB1e的MD
容和作用14-15
2 主要实验技术及其原理15-21

2.1 ELISA15

2.2 脂质体转染15-16

2.3 MTT16

2.4 免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）16-17

2.5 稳定细胞系的建立17-18

2.6 SDS-PAGE 电泳18

2.7 蛋白免疫印迹（Western blotting ）18-19

2.8 激光共聚焦扫描显微技术（Confocal laser scanning microscopy）19-21
3 材料与策略21-34

3.1 实验材料21

3.2 实验策略21-34

4 实验结果34-43

4.1 GB1 在乳腺癌细胞中的免疫染色34

4.2 GB1e 质粒的构建34-35

4.3 稳定表达 HA-GB1e 的 MDA-MB-231 细胞系的构建与检测35-36

4.4 稳定表达 HA-GB1e 的 MCF-7 细胞系的构建与检测36-37

4.5 GB1e 在乳腺癌细胞中的亚细胞分布37-38

4.6 GB1e 可分泌至培养液中38

4.7 分泌性 GB1e 可被细胞吞噬38-39

4.8 在 MDA-MB-231 细胞表面 GB1e 不与 GB2 形成异二聚体39-40
4.9 稳定表达 HA-GB1e 的 MCF-7 细胞系下游信号通路 pAkt 的检测40-41

4.10 HA-GB1e 稳定表达对 MDA-MB-231 细胞增殖影响41-43

5 总结与讨论43-45
致谢45-46
参考文献46-53
附录 主要符号和缩略词表53