分析腺癌癌相关成纤维细胞（CAFs）和Wnt基因对乳腺癌细胞增殖影响

论文导读：）。其中每组上层MCF-7细胞数为5×10~2/2×10~2，下层CAFs/NBFs细胞数为1×10~4。利用公式—平均克隆量/接种细胞量×10~0%计算MCF-7细胞的克隆率。3、采取Transwell小室将CAFs/NBFs与MCF-7间接共培养，每个标本进行3组不同处理，每组重复3次。分为对照组（完全培养基单独培养MCF-7）、实验组1（MCF-7+NBFs共培养）、实验组2（MCF-7+CAFs共
摘要：目的:探讨来源于人乳腺癌相关成纤维细胞（CAFs）的Wnt基因通过Wnt信号通路对乳腺癌细胞增殖的影响。策略：1、收集6例术前未进行任何治疗且术后病理证实为乳腺浸润性导管癌的女性患者的乳腺癌组织及正常组织标本。采取胶原酶消化分离法提取和培养CAFs、正常乳腺成纤维细胞（NBFs）。2、建立Matrigel胶三维立体细胞培养模型—CAFs/NBFs与MCF-7体外共培养：每个标本进行六组不同处理，每组重复3次。分为对照组1（人乳腺癌细胞系MCF-7单独培养）、对照组2（MCF-7+NBFs共培养），实验组1（MCF-7+CAFs共培养）、实验组2（MCF-7+CAFs+Wnt3a单克隆抗体共培养）、实验组3（MCF-7+CAFs+Wnt5a单克隆抗体共培养）、实验组4（MCF-7+CAFs+Wnt10b单克隆抗体共培养）。其中每组上层MCF-7细胞数为5×10~2/2×10~2，下层CAFs/NBFs细胞数为1×10~4。利用公式—平均克隆量/接种细胞量×10~0%计算MCF-7细胞的克隆率。3、采取Transwell小室将CAFs/NBFs与MCF-7间接共培养，每个标本进行3组不同处理，每组重复3次。分为对照组（完全培养基单独培养MCF-7）、实验组1（MCF-7+NBFs共培养）、实验组2（MCF-7+CAFs共培养），然后采取实时定量PCR检测各组MCF-7中Wnt3a、Wnt5a、Wnt10b基因表达的差别。结果： Matrigel胶双层细胞的三维立体培养结果：（1）实验组1中MCF-7细胞的克隆率与对照组1、对照组2相比显著升高，说明CAFs对MCF-7的克隆有推动作用。（2）实验组2、实验组4的细胞克隆形成率较实验组1均显著降低，较对照组1、对照组2仍有升高，说明Wnt3a单抗、Wnt10b单抗对CAFs有抑制作用，但作用不完全；（3）实验组4的细胞克隆形成率较实验组2显著降低，说明Wnt10b单抗对CAFs的抑制作用比Wnt3a单抗更强；（4）实验组3与实验组1相比，MCF-7细胞克隆率没有显著变化，说明Wnt5a对CAFs的抑制作用不显著。采取实时荧光定量PCR检测CAFs/NBFs与MCF-7间接共培养后MCF-7细胞Wnt信号转导通路的表达，实验组MCF-7细胞中Wnt3a、Wnt5a、Wnt10bmRNA的表达均有所上调。实验组2中Wnt论文导读：CAFs来源的Wnt3a、Wnt10b对人乳腺癌的发生有推动作用；CAFs来源的Wnt5a对乳腺癌的发生无显著推动作用，可能是Wnt5a受多种因素的影响，也可能如近年一些探讨所言Wnt5a是肿瘤抑制基因。而这些作用可能是成纤维细胞上调的Wnt基因通过Wnt信号转导通路影响乳腺干细胞的自我更新和增殖分化来实现的。关键词：人乳腺
3a、Wnt10b的表达较实验组1高，而Wnt5a的表达较实验组1低。结论： CAFs来源的Wnt3a、Wnt10b对人乳腺癌的发生有推动作用；CAFs来源的Wnt5a对乳腺癌的发生无显著推动作用，可能是Wnt5a受多种因素的影响，也可能如近年一些探讨所言Wnt5a是肿瘤抑制基因。而这些作用可能是成纤维细胞上调的Wnt基因通过Wnt信号转导通路影响乳腺干细胞的自我更新和增殖分化来实现的。关键词：人乳腺癌论文癌相关成纤维细胞论文Wnt基因论文三维培养论文克隆论文
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Abstract7-9
前言9-11
实验材料与策略11-20
结果20-26
讨论26-29
参考文献29-33
综述33-42
参考文献39-42
致谢42