探索糖醛酸三羟基异黄酮保肝解毒作用及其对UGTs活性调控

论文导读：
摘要：目的：大豆异黄酮是大豆生长历程中产生的一类次级代谢产物，探讨发现它具有多种生物学功能。尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGTs)是体内最重要的Ⅱ相代谢酶。本论文对大豆异黄酮的解毒作用及其对UGTs活性影响的机理进行了探讨。策略：利用对乙酰氨基酚（APAP）致小鼠肝脏损伤为模型进行三羟基异黄酮肝脏保护实验，通过检测小鼠的天冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酸氨基转移酶(ALT)、乳酸脱氢酶（LDH）、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、谷胱甘肽(GSH)等生化指标来观察三羟基异黄酮对由对乙酰氨基酚所致小鼠肝损伤的保护作用，同时进行了三羟基异黄酮及葡萄糖醛酸内酯对肝损小鼠保护作用的比较实验；利用RT-PCR策略检测小鼠肝脏中UGTs同工酶mRNA的表达；取经过三羟基异黄酮处理后的肝脏微粒体进行体外孵育实验，检测肝脏中UGTs的活性，再考察对乙酰氨基酚在体外孵育反应中的代谢情况。结果：(1)与模型组比较，三羟基异黄酮及与葡萄糖醛酸内酯一起用药能够显著降低ALT、AST、LDH的活力，提升TP、ALB、GSH的含量，与空白对照组接近，起到恢复的作用；单独利用Glu效果不显著。(2)与空白对照组及模型组比较，三羟基异黄酮能够提升UGTs中的UGT1A1、UGT1A5、UGT1A10及UGT2B1的mRNA的表达量；(3)三羟基异黄酮可以上调UGTs的活性，并且能够提升APAP在体外孵育反应中的代谢转化。结论：三羟基异黄酮对由APAP所致肝脏损伤的小鼠有保护作用，单独利用Glu其保护作用不显著。三羟基异黄酮保护作用的机制可能与三羟基异黄酮上调UGT1A1、UGT1A5、UGT1A10及UGT2B1等同工酶的mRNA的表达有关，即三羟基异黄酮能够诱导增加Ⅱ相代谢酶UGTs的活性，以而加强由UGTs介导的APAP代谢失活途径，降低APAP的毒性作用，对小鼠起到保护作用。关键词：三羟基异黄酮论文对乙酰氨基酚论文尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶论文mRNA表达论文微粒体论文体外孵育论文
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ABSTRACT6-8
致谢8-14
第一章 绪论14-22

1.1 大豆异黄酮简述14论文导读：

-16

1.1 大豆异黄酮理化性质15

1.2 大豆异黄酮的吸收与代谢15

1.3 大豆异黄酮的生理作用15-16

1.4 大豆异黄酮的解毒作用16

1.2 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶简述16-19

1.2.1 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶的分布及分类17

1.2.2 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶的功能17

1.2.3 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶活性的影响因素17-19

1.2.4 异黄酮与 UGTs19

1.3 对乙酰氨基酚简述19-21

1.3.1 对乙酰氨基酚的代谢19

1.3.2 对乙酰氨基酚肝脏损伤机制19-20

1.3.3 对乙酰氨基酚的治疗靶点20-21

1.3.4 大豆异黄酮对 APAP 肝毒性的影响21

1.4 探讨目的21-22

第二章 三羟基异黄酮解毒实验22-40

2.1 材料22-23

2.

1.1 实验动物22

2.

1.2 试剂与仪器22-23

2.2 实验策略23-28

2.1 试剂配制23

2.2 实验分组及动物处理23

2.3 血清及肝脏的处理23-24

2.4 白蛋白 (ALB) 的测定24

2.5 总蛋白 (TP) 的测定24-25

2.6 丙氨酸氨基转移酶 (ALT) 的测定25-26

2.7 天冬氨酸氨基转移酶 (AST) 的测定26

2.8 谷胱甘肽 (GSH) 的测定26-27

2.9 乳酸脱氢酶 (LDH) 的测定27-28

2.10 统计浅析28

2.3 结果28-34

2.3.1 Gen 对白蛋白 ALB 的影响28-29

2.3.2 Gen 对总蛋白 (TP) 的影响29

2.3.3 Gen 对 AST 、 ALT 的影响29-31

2.3.4 Gen 对谷胱甘肽的影响31-33

2.3.5 Gen 对 LDH 的影响33-34

2.4 三羟基异黄酮、葡萄糖醛酸内酯对小鼠保护作用的比较34-39

2.4.1 Gen、 Glu 对 ALB 的影响的比较34-35

2.4.2 Gen、 Glu 对 TP 影响的比较35

2.4.3 Gen、 Glu 对 AST 、 ALT 影响的比较35-37

2.4.4 Gen、 Glu 对 GSH 影响的比较37-38

2.4.5 Gen、 Glu 对 LDH 影响的比较38-39

2.5 结论39-40

第三章 三羟基异黄酮调节肝脏 UGTS 表达的实验探讨40-50

3.1 材料40-41

3.

1.1 实验动物40

3论文导读：84.4讨论584.5结论58-59第五章结论与展望59-605.1主要结论595.2展望59-60参考文献60-65攻读硕士学位期间发表的论文65-66上一页123
.

1.2 试剂与仪器40-41

3.2 实验策略41-45

3.

2.1 试剂配制41

3.

2.2 实验分组及动物处理41-42

3.

2.3 引物设计42-43

3.

2.4 总 RNA 的提取43-44

3.

2.5 总 RNA 的浓度44

3.

2.6 反转录44

3.

2.7 PCR44-45

3.

2.8 电泳鉴定45

3.

2.9 统计浅析45

3.3 结果与浅析45-48

3.1 RNA 浓度测定结果45-46

3.2 电泳结果46-47

3.3 电泳条带灰度扫描47-48

3.4 讨论48-49

3.5 结论49-50

第四章 三羟基异黄酮对 UGTS 活性及 APAP 代谢的影响50-59

4.1 材料50-51

4.

1.1 实验动物50

4.

1.2 试剂与仪器50-51

4.2 实验策略51-54
4.

2.1 Gen、 Glu 对小鼠肝细胞微粒体 UGTs 的诱导作用51-52

4.

2.2 对乙酰氨基酚的体外代谢52-54

4.

2.3 统计浅析54

4.3 结果54-58
4.

3.1 三羟基异黄酮对小鼠肝细胞微粒体 UGTs 活力的影响54-55

4.

3.2 对乙酰氨基酚的体外代谢55-58

4.4 讨论58

4.5 结论58-59

第五章 结论与展望59-60

5.1 主要结论59

5.2 展望59-60

参考文献60-65
攻读硕士学位期间发表的论文65-66