探究种质地黄基于HPLC指纹图谱质量评价及种质资源利用

论文导读：的材料和新制材料，综合主成分值与梓醇含量相关。熟地综合主成分值与5-羟糠醛含量有关，而鲜地黄综合主成分值与麦角甾苷含量相关。同时简化了地黄综合质量评价策略，仅利用包括检测成分在内的少数色谱峰就可对地黄综合质量进行评价。鲜地黄、生地黄和熟地黄药性不同，为揭开药性差别的本质，对鲜地黄、生地黄和熟地黄的指纹图
摘要：本探讨主要目的是建立和改善地黄三种常用的药用形式—鲜地黄、生地黄和熟地黄的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱技术，并利用建立的指纹图谱技术评价和制约地黄药材的质量，对地黄的属内近缘种的药用价值等可利用性进行评价，同时利用指纹图谱技术进行地黄新品种的选育。主要探讨内容包括地黄指纹图谱策略探讨及鲜地黄、生地黄和熟地黄指纹图谱的建立，鲜地黄、生地黄和熟地黄的质量评价，鲜地黄、生地黄和熟地黄HPLC指纹差别及熟地黄炮制质量制约和炮制新策略探讨，地黄属内近缘种化学指纹特点、可利用性和生物学特点探讨，地黄新材料选育等。为了建立和改善地黄指纹图谱技术，采取单因素浅析策略，对地黄HPLC指纹图谱建立中的样品溶液制备策略，色谱条件进行探讨，逐渐建立了用甲醇冷浸后超声波提取，蒸干后用少量低浓度甲醇溶解获得浓缩样品溶液。采取乙腈－磷酸溶液线性梯度洗脱策略，建立了鲜地黄、生地黄205nm HPLC指纹图谱和205nm单波长或205nm和284nm双波长熟地黄指纹图谱。同时建立了地黄中主要检测成分梓醇、5-羟糠醛（5-HMF）和麦角甾苷含量随指纹图谱同时检测的单波长和多波长策略。鲜地黄HPLC指纹图谱可精确的反映地黄的品种特点，生地黄指纹图谱除呈现品种的信息外，还带有产地气候特点、栽培方式以及加工、贮存等信息，而熟地黄指纹图谱主要呈现加工信息，反映熟地的炮制熟化程度。为了评价地黄品质，采取已建立的地黄指纹图谱技术和主成分浅析中的综合主成分值对生地黄、熟地黄和鲜地黄进行质量评价，探讨显示生地黄和鲜地黄主成分浅析中主成分类型主要以色谱峰的化学性质划分，而熟地黄主成分划分主要与熟地炮制历程中色谱峰的变化规律有关。生地主成分浅析中综合主成分值高的，即质量好的生地黄是来自地黄主产区河南、山西的材料和新制材料，综合主成分值与梓醇含量相关。熟地综合主成分值与5-羟糠醛含量有关，而鲜地黄综合主成分值与麦角甾苷含量相关。同时简化了地黄综合质量评价策略，仅利用包括检测成分在内的少数色谱峰就可对地黄综合质量进行评价。鲜地黄、生地黄和熟地黄药性不同，为揭开药性差别的本质，对鲜地黄、生地黄和熟地黄的指纹图谱进行了比较，探讨了熟地炮制历程中指纹的变化。结果显示鲜地黄和生地黄指纹差别主要在色谱图后半部，即苯乙醇苷所在的区域，鲜地黄在干制成生地黄历程中苯乙醇苷类显著降低。其他次生成分大多降低，少数衍生物质峰出现论文导读：
并升高。而生地和熟地指纹图谱在前半部显著不同，炮制成熟地历程中梓醇等环烯醚萜苷类以及多种次生成分降低或消失，衍生物质5-羟糠醛等含量上升。这些变化可能是以鲜地黄到熟地黄药性由寒性变为温性的理由之一。为了充分利用地黄属种质资源，利用建立的鲜地黄指纹图谱技术探讨了地黄属内部分近缘种的化学指纹特点（除天目地黄外），并利用普通杂交技术探讨近缘种之间传粉特性和杂交亲和性。结果显示由于地黄属种间亲缘联系较近，以其化学指纹特点上很难判定亲缘联系特点。地黄的三个近缘种根部梓醇含量低于地黄，而裂叶地黄和茄叶地黄麦角甾苷含量较高，但地黄的这些近缘种不具备代替地黄药用的潜力。杂交结果显示地黄属均为虫媒植物。茄叶地黄为不育种，并对其起源和分类地位进行推测。部分地黄属近缘种之间正反交显示，裂叶地黄和湖北地黄之间杂交可获得有发芽力的种子，其他组合仅获得极少种子或种子不能发芽。为了充分利用地黄种质资源，培育适应本地气候特点的药用、食用地黄新材料，利用不同品种等自然杂交种子进行新材料选育，利用建立的鲜地黄指纹图谱技术和主成分浅析综合主成分值的大小初步选择21个药用地黄材料。对二甲氨基苯甲醛显色策略测定总环烯醚萜苷的相对含量，根据材料间总环烯醚萜苷相对含量大小初步选出10个食用材料。关键词：地黄论文HPLC指纹图谱论文质量评价论文种质资源论文近缘种论文
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ABSTRACT7-13
第一章 文献综述13-25
1 选题的依据、目的和作用13-14

1.1 选题的依据和作用13-14

1.2 探讨的目的14

2 国内外探讨进展14-25

2.1 地黄有效成分、药理作用及加工炮制历程中化学成分的变化14-16

2.

1.1 环烯醚萜及环烯醚萜苷类14

2.

1.2 糖类14-15

2.

1.3 氨基酸类15

2.

1.4 酚类物质15

2.

1.5 其他成分15-16

2.2 地黄分类地位及近缘种探讨16-18

2.1 地黄分类地位16

2.2 地黄近缘种探讨16-18

2.3 中药指纹图谱探讨18-20

2.3.1 中药指纹图谱探讨策略与技术18-19

2.3.2 地黄指纹图谱探讨19-20

2.4 地黄的病害及防治论文导读：

20-21

2.4.1 地黄真菌性病害20

2.4.2 地黄病毒病20-21

2.4.3 地黄植原体病害21

2.4.4 地黄病毒病和植原体病害防治对策21

2.5 地黄的植物生理生化探讨21-25

2.5.1 地黄的组织培养21-22

2.5.2 抗性生理探讨22-23

2.5.3 地黄分子遗传学探讨23-25

第二章 地黄指纹图谱建立25-59
1 地黄指纹图谱策略探讨25-36

1.1 引言25-26

1.2 材料与策略26-27

1.2.1 材料26

1.2.2 药品与试剂26

1.2.3 策略26-27

1.2.4 色谱策略27

1.3 结果与讨论27-34

1.3.1 流动相选择27-29

1.3.2 样品溶液制备策略的选择29-34

1.4 小结34-35

1.5 地黄指纹图谱的其它策略35-36

2 鲜地黄和生地黄指纹图谱的建立36-46

2.1 引言36

2.2 材料与策略36-39

2.1 材料36

2.2 材料处理36-37

2.3 试剂37

2.4 样品溶液制备37

2.5 色谱条件37-38

2.6 策略有效性浅析38

2.7 数据浅析38-39

2.3 结果与计论39-46

2.3.1 鲜地黄、生地黄指纹图谱提取波长的选择39

2.3.2 策略有效性39

2.3.3 鲜地黄指纹图谱的建立39-41

2.3.4 生地黄指纹图谱的建立41-46

3 熟地黄指纹图谱的建立46-51

3.1 引言46

3.2 材料与策略46-47

3.

2.1 材料46

3.

2.2 材料处理46-47

3.

2.3 试剂47

3.

2.4 样品溶液制备47

3.

2.5 色谱浅析47

3.

2.6 策略有效性47

3.3 结果与浅析47-51

3.1 熟地黄指纹图谱提取波长的选择47

3.2 熟地黄指纹图谱建立47-49

3.3 策略有效性浅析49

3.4 熟地黄样品间相似性浅析49-51

4 地黄中主要检测成份梓醇、5-羟糠醛和麦角甾苷随指纹图谱同时测定51-59

4.1 引言51-52

4.2 材料与策略52

4.

2.1 材料52

4.

2.2 策略52

4.

2.3 标准曲线获取52

4.

2.4 策略有效性浅析52

4.3 结果与浅析52-58
4.

3.1 鲜地黄、生地黄中梓醇和麦角甾苷随指纹图谱同时测定52-55

4.

3.2 鲜地黄及生地黄中多种成份多波长同时测定55-56

4.

3.3 熟地黄中多种成份随指纹图谱同时测定56-57

4.

3.4论文导读：

熟地黄中多种组份随指纹图谱同时测定的多波长法57-58

4.4 结论58-59

第三章 基于地黄 HPLC 指纹图谱的生地黄和熟地黄质量制约和质量评59-111
1 运用 HPLC 指纹图谱技术确定熟地黄炮制终点59-64

1.1 引言59

1.2 策略和实验59-60

1.2.1 指纹图谱建立及相似性计算策略59-60

1.2.2 试剂与材料60

1.2.3 熟地黄加工60

1.2.4 样品溶液制备和色谱浅析60

1.3 结果与讨论60-64

1.3.1 指纹图谱的建立60-61

1.3.2 策略有效性浅析61

1.3.3 熟地黄加工历程中指纹图谱及梓醇、5-HMF、麦角甾苷的变化61-63

1.3.4 作为对照样品的熟地黄指纹及熟地黄标准指纹63

1.3.5 熟地黄最佳加工时间63-64

1.4 结论64

2 地黄 HPLC-DAD 多波长指纹图谱的建立及在熟地炮制中的运用64-71

2.1 引言64-65

2.2 策略和实验65-66

2.1 地黄多波长指纹建立及相似性计算策略65

2.2 试剂与材料65

2.3 熟地炮制、样品溶液制备及色谱浅析65-66

2.4 策略有效性浅析66

2.3 结果与讨论66-70

2.3.1 多波长指纹图谱的建立66-67

2.3.2 策略有效性浅析67-68

2.3.3 熟地加工历程中多波长指纹图谱变化68-69

2.3.4 熟地黄最佳加工时间69-70

2.4 结论70-71

3 生地黄质量综合指标成分的选择及以 HPLC 指纹图谱为基础的质量评价71-82

3.1 引言71

3.2 材料与策略71-75

3.3 结果与浅析75-82

3.1 共有峰之间相关性浅析75

3.2 主成分浅析及主成分解释75-77

3.3 生地质量综合评价77-79

3.4 综合评价指标的简化79-82

3.4 讨论82

3.5 结论82

4 鲜地黄、生地黄和熟地黄 HPLC 指纹差别及熟地黄炮制历程中指纹及成分的变化82-92

4.1 引言82-83

4.2 材料与策略83

4.

2.1 材料83

4.

2.2 策略83

4.3 结果与浅析83-88
4.

3.1 鲜地黄与生地黄指纹差别83-86

4.

3.2 生地黄与熟地黄指纹差别86

4.

3.3 熟地黄炮制历程中指纹（成份）的精细变化86-88

4.4 总结88-92
5 熟地黄综合质量评价及炮制评价指标选择92-98

5.1 引言92

5.2 材料与策略92-9论文导读：1121.2.2梓醇、麦角甾苷含量测定及指纹图谱获取1121.2.3传粉与杂交1121.2.4发芽率测试1121.3结果与浅析112-1181.3.1地黄及其近缘种指纹图谱112-1131.3.2单波长法随指纹图谱同时测定近缘种中梓醇和麦角甾苷的含量113-1161.3.3地黄及其近缘种传粉特性及杂交结果116-1181.4小结118-1192鲜地黄质量评价及药用、食用地黄
3

5.3 结果与浅析93-97

5.

3.1 熟地黄质量评价及指标峰的选择93-95

5.

3.2 熟地黄质量评价指标成分选择及化简95-97

5.

3.3 熟地黄炮制质量制约标准的选择97

5.4 结论97-98
6 地黄加工新策略探讨98-111

6.1 引言98

6.2 材料与策略98-100

6.

2.1 材料98-99

6.

2.2 切片的加工99

6.

2.3 检测99

6.

2.4 相似性浅析99-100

6.3 结果与浅析100-110
6.3.1 北京 1 号干燥切片及种子繁殖的一年生鲜地黄自然干燥切片的性质100-101
6.

3.2 干制鲜地黄切片的熟化加工101-110

6.4 小结110-111
第四章 地黄近缘种及种质资源利用探讨111-135
1 地黄近缘种替代药用价值浅析与传粉特性探讨111-119

1.1 引言111

1.2 材料与策略111-112

1.2.1 材料111-112

1.2.2 梓醇、麦角甾苷含量测定及指纹图谱获取112

1.2.3 传粉与杂交112

1.2.4 发芽率测试112

1.3 结果与浅析112-118

1.3.1 地黄及其近缘种指纹图谱112-113

1.3.2 单波长法随指纹图谱同时测定近缘种中梓醇和麦角甾苷的含量113-116

1.3.3 地黄及其近缘种传粉特性及杂交结果116-118

1.4 小结118-119

2 鲜地黄质量评价及药用、食用地黄选育119-135

2.1 引言119

2.2 材料与策略119-121

2.1 材料的选育119-120

2.2 选育材料 HPLC 指纹图谱的获取120

2.3 选育材料梓醇、麦角甾苷含量测定及综合主成分值计算120

2.4 总环烯醚萜苷相对含量的测定120-121

2.3 结果与浅析121-134

2.3.1 鲜地黄指纹及梓醇、麦角甾苷含量随指纹图谱同时测定121-125

2.3.2 鲜地黄质量评价125-131

2.3.3 总环烯醚萜苷含量测定131-132

2.3.4 药用及食用地黄的选育132-134

2.3.5 药用食用地黄选育标准探讨134

2.4 小结134-135

总结135-137
参考文献137-141
附录141-143
致谢143-144
作者介绍144