简论转移海参岩藻聚糖硫酸酯抗肿瘤活性及作用机制学术

论文导读：和硫酸根含量等结构影响。其中，美国肉参岩藻聚糖硫酸酯是一类具有很高粘度和较高相对分子量的直连硫酸多糖，利用TSKG4000PWXL色谱柱测定其分子量达435KDa。PMP法测定单糖组成，浅析其单糖仅含有岩藻糖。离子色谱法测定其硫酸基含量约为32.9%。本实验以美国肉参岩藻聚糖硫酸酯（SC-FUC）为探讨对象，通过建立体外化学缺氧模型和体
摘要：海参岩藻聚糖硫酸酯是海参体壁中重要的活性硫酸多糖，具有抗肿瘤、抗病毒、免疫调节、降血糖和降血脂等广泛的药理活性，其活性受多糖支链和硫酸根含量等结构影响。其中，美国肉参岩藻聚糖硫酸酯是一类具有很高粘度和较高相对分子量的直连硫酸多糖，利用TSK G4000PWXL色谱柱测定其分子量达435KDa。PMP法测定单糖组成，浅析其单糖仅含有岩藻糖。离子色谱法测定其硫酸基含量约为32.9%。本实验以美国肉参岩藻聚糖硫酸酯（SC-FUC）为探讨对象，通过建立体外化学缺氧模型和体内自发肺转移模型，系统地评价了SC-FUC抗肿瘤活性及初步探讨了其作用机制。主要探讨结果如下：采取MTT法对不同分子量海地瓜SC-FUC低聚糖和美国肉参SC-FUC的体外抗肿瘤活性进行了筛选。结果显示，不同分子量的海地瓜SC-FUC低聚糖对体外培养的肿瘤细胞的生长抑制作用不同，多种肿瘤细胞株对海地瓜SC-FUC低聚糖的作用不敏感；美国肉参SC-FUC具有显著抑制肿瘤细胞增殖活性的作用，人胃癌HGC-27细胞对其作用最为敏感，72和96h的IC50值分别为399.74和126.97μg/mL，具有时间和剂量效应联系。以HGC-27细胞为探讨对象，采取MTT法和RT-PCR法筛选化学缺氧诱导剂CoCl2诱导HGC-27细胞的缺氧浓度，建立化学缺氧模型。结果表明：25μM CoCl2对HGC-27细胞的生长无显著影响，且细胞HIF-1α mRNA的表达量较高，故以浓度为25μM的CoCl2建立缺氧模型。采取MTT、AO/EB染色、TUNEL和RT-PCR法及Western blotting法对缺氧条件下SC-FUC体外抗肿瘤活性及其可能机制进行了探讨。结果表明：SC-FUC能显著抑制缺氧诱导的HGC-27细胞的增殖活性（72和96h的IC50值分别为169.85和100.04μg/ml），转变细胞的周期，形成G2/M期阻滞，并诱导肿瘤细胞凋亡。RT-PCR和Western blotting法实验结果显示，SC-FUC能下调HIF-1α及其介导的Bcl-2、Bcl-xl的表达，上调Bax、细胞色素c和caspase3的表达，增加PARP-1的裂解。提示SC-FUC具有显著抑制缺氧条件下肿瘤细胞生长的活性，其作用机制可能与阻滞细胞周期，并通过HIF-1α及其介导的线粒体信号通路激活肿瘤细胞的凋亡相关。通过探讨S论文导读：HIF-1α论文凋亡论文周期阻滞论文转移论文血管新生论文Lewis肺癌论文转移灶论文本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。摘要5-7Abstract7-16前言16-231缺氧诱导因子与肿瘤的发生16-19

1.1肿瘤缺氧162HIF1α与肿瘤细胞周期和凋亡16-

C-FUC对缺氧诱导的HGC-27细胞转移活性及其作用机制，结果表明，SC-FUC可显著抑制缺氧条件下肿瘤细胞的迁移（P0.01）、粘附（P0.05，P0.01）和侵袭能力（P0.01）。在转录和翻译水平上，RT-PCR和Western blotting法结果表明，SC-FUC可下调Hpa和HIF-1α及其介导的MMP-2/-9的表达，上调TIMP-2/-1的表达，以而通过降低肿瘤细胞外基质的侵袭能力而发挥抗转移作用。采取MTT法、体外小管形成和鸡胚尿囊膜实验,探讨SC-FUC对肿瘤血管新生的影响。结果说明SC-FUC能显著抑制内皮细胞的生长和新生血管的生成。RT-PCR和Western blotting检测显示，SC-FUC可以抑制血管内皮生长因子VEGF mRNA和蛋白的表达。提示SC-FUC可通过抑制VEGF的活性抑制血管新生。通过建立小鼠Lewis肺癌自发肺转移模型，进一步验证SC-FUC在体内抑制肿瘤生长和转移的作用。结果表明，SC-FUC可以显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长和肺转移，平均抑制率分别为45.6%和65.9%；可降低荷瘤小鼠肿瘤组织中HIF-1α、Hpa及MMP-2/-9、VEGF mRNA和蛋白的表达。提示SC-FUC能显著抑制肿瘤细胞在小鼠体内的生长和转移，可通过降低ECM降解酶的活力，减少VEGF的释放，以而抑制肿瘤转移和血管新生。综上所述，本论文系统地探讨了SC-FUC体外、体内抗肿瘤生长和转移作用，并初步阐明了其抑制肿瘤生长、转移和血管新生的机制，为深入挖掘海参岩藻聚糖硫酸酯药用价值，推动海参多糖的加工利用提供论述基础和科学依据。关键词：美国肉参SC-FUC论文化学缺氧论文人胃癌论文HGC-27细胞论文HIF-1α论文凋亡论文周期阻滞论文转移论文血管新生论文Lewis肺癌论文转移灶论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。摘要5-7
Abstract7-16
前言16-23
1 缺氧诱导因子与肿瘤的发生16-19

1.1 肿瘤缺氧16

1.2 HIF1α与肿瘤细胞周期和凋亡16-17

1.3 HIF1α与肿瘤转移17-18

1.4 HIF1α与肿瘤血管论文导读：同肿瘤细胞株增殖活性的影响26-303.2美国肉参SCFUC对不同肿瘤细胞株增殖活性的影响30-314小结31-32第二章海参岩藻聚糖硫酸酯对缺氧条件下人胃癌HGC27细胞生长的影响32-60第一节CoCl_2诱导化学性缺氧模型的建立32-361材料和策略32-341.1实验材料321.2试剂32-331.3仪器331.4策略33-341.

4.1CoCl2对HGC27细胞增

新生18

1.5 HIF1α的探讨对于肿瘤治疗的作用18-19

2 岩藻聚糖硫酸酯的结构和生物活性19-22

2.1 褐藻岩藻聚糖硫酸酯结构和生物活性的探讨进展19-21

2.

1.1 抗凝血活性20

2.

1.2 抗肿瘤活性20-21

2.

1.3 降血糖降血脂活性21

2.2 海参岩藻聚糖硫酸酯结构和生物活性的探讨进展21-22
3 立题依据，探讨目的和作用22-23
第一章 海参岩藻聚糖硫酸酯体外抗肿瘤活性的筛选23-32
1 实验材料23-24

1.1 海参23

1.2 试剂23

1.3 细胞株23-24

1.4 仪器24

2 实验策略24-26

2.1 海参岩藻聚糖硫酸酯的提取和制备24-25

2.

1.1 海参粗多糖的提取24

2.

1.2 不同分子量海地瓜岩藻聚糖硫酸酯低聚糖的制备24-25

2.

1.3 美国肉参岩藻聚糖硫酸酯的提取和分离纯化25

2.2 不同分子量海地瓜 SCFUC 低聚糖和美国肉参 SCFUC 体外抗肿瘤活性的筛选25-26

2.3 统计学浅析26

3 结果26-31
3.1 不同分子量海地瓜 SCFUC 低聚糖对不同肿瘤细胞株增殖活性的影响26-30

3.2 美国肉参 SCFUC 对不同肿瘤细胞株增殖活性的影响30-31

4 小结31-32
第二章 海参岩藻聚糖硫酸酯对缺氧条件下人胃癌 HGC27 细胞生长的影响32-60
第一节 CoCl_2诱导化学性缺氧模型的建立32-36
1 材料和策略32-34

1.1 实验材料32

1.2 试剂32-33

1.3 仪器33

1.4 策略33-34

1.4.1 CoCl2对 HGC27 细胞增殖的影响33

1.4.2 CoCl2对 HIF1α mRNA 表达的影响33-34

1.5 统计学浅析34

2 结果34-36

2.1 CoCl2对 HGC27 细胞增殖活性的影响34-35

2.2 化学缺氧条件的确定35-36

3 小结36
第二节 SCFUC 对缺氧条件下 HGC27 细胞生长的影响36-40
1 材料和策略36-37

1.1 实验材料36

1.2 试剂36

1.3 仪器36

1.4 策略36-37

1.4.1 对缺氧条件下 HGC27 细胞增殖活性的影响37

1.4.2 对缺氧条件下 HGC27 细胞培养上清中 LDH 释放量的影响37

1.4.3 对缺氧条件下 HGC27 细胞一般形态的影响37

2 结果37-39
2.1 SCFUC 抑制缺氧条件下 HGC27 细胞的增殖活性37-3论文导读：的影响393小结39-40第三节SCFUC对缺氧条件下HGC27细胞凋亡及其作用机制的影响40-531材料和策略40-451.1实验材料401.2试剂40-411.3仪器411.4策略41-441.4.1AO/EB染色法检测SCFUC对缺氧诱导的HGC27细胞凋亡形态的影响411.4.2TUNEL法检测SCFUC对缺氧条件下HGC27细胞凋亡率的影响41-421.4.3RTPCR法检测
8

2.2 对缺氧条件下 HGC27 细胞中 LDH 释放量的影响38-39

2.3 对缺氧条件下 HGC27 细胞一般形态的影响39

3 小结39-40
第三节 SCFUC 对缺氧条件下 HGC27 细胞凋亡及其作用机制的影响40-53
1 材料和策略40-45

1.1 实验材料40

1.2 试剂40-41

1.3 仪器41

1.4 策略41-44

1.4.1 AO/EB 染色法检测 SCFUC 对缺氧诱导的 HGC27 细胞凋亡形态的影响41
1.4.2 TUNEL 法检测 SCFUC 对缺氧条件下 HGC27 细胞凋亡率的影响41-42
1.4.3 RTPCR 法检测 SCFUC 对缺氧条件下 HGC27 细胞中 HIF1α及其介导的凋亡相关基因 mRNA 表达的影响42-43
1.4.4 Western blotting 法检测缺氧条件下 HGC27 细胞中 HIF1α及其介导的线粒体凋亡通路相关蛋白表达的影响43-44

1.5 统计学浅析44-45

2 结果45-51

2.1 对缺氧条件下 HGC27 细胞凋亡形态的影响45

2.2 对缺氧条件下 HGC27 细胞凋亡率的影响45-46

2.3 对缺氧诱导的 HGC27 细胞中 HIF1α及其介导的线粒体凋亡通路相关基因表达的影响46-49

2.4 对缺氧诱导的 HGC27 细胞中凋亡相关蛋白表达的影响49-51

3 讨论51-52
4 小结52-53
第四节 SCFUC 对缺氧条件下 HGC27 细胞周期的影响53-60
1 材料和策略53-55

1.1 实验材料53

1.2 试剂53

1.3 仪器53-54

1.4 策略54-55

1.4.1 RTPCR 法检测 HGC27 细胞周期调控基因 CycpnB1 和 Cdc2 mRNA表达的影响54
1.4.2 RTRCR 法检测 HGC27 细胞周期检查点相关基因 mRNA 表达的影响54-55

1.5 统计学浅析55

2 结果55-58
2.1 SCFUC 对缺氧条件下 HGC27 细胞周期调控相关基因 mRNA 表达的影响55-57
2.2 SCFUC 对缺氧条件下 HGC27 细胞周期检查点相关基因 mRNA 表达的影响57-58
3 讨论58-59
4 小结59-60
第三章 海参岩藻聚糖硫酸酯抑制缺氧条件下肿瘤细胞转移和血管新生及其作用机制的探讨60-78
第一节 海参岩藻聚糖硫酸酯抑制缺氧条件下肿瘤转移及其作用机制的论文导读：11.1实验材料781.2药品和试剂78-791.3主要仪器791.4实验策略79-801.4.1Lewis肺癌细胞在小鼠体内传代791.4.2动物模型的复制和实验791.4.3肿瘤抑制率的测定791.4.4Lewis肺癌自发肺转移抑制率791.4.5RTPCR法测定肿瘤组织中转移相关基因mRNA的表达79-801.4.6Westernblotting法检测肿瘤组织中上一页12345
探讨60-71
1 材料和策略60-64

1.1 实验材料60

1.2 试剂60-61

1.3 仪器61

1.4 策略61-64

1.4.1 对肿瘤细胞迁移能力的影响61

1.4.2 对缺氧条件下 HGC27 细胞侵袭能力的影响61-62

1.4.3 对缺氧条件下 HGC27 细胞粘附能力的影响62

1.4.4 RTPCR 法检测 SCFUC 对缺氧条件下 HGC27 细胞转移相关基因表达的影响62-63
1.4.5 Western blotting 检测 SCFUC 对缺氧条件下 HGC27 细胞转移相关蛋白表达的影响63-64

1.5 统计学浅析64

2 结果64-68

2.1 SCFUC 对肿瘤细胞粘附能力的影响64

2.2 SCFUC 对 HGC27 细胞迁移能力的影响64-65

2.3 SCFUC 对 HGC27 细胞侵袭能力的影响65-66

2.4 SCFUC 对缺氧条件下 HGC27 细胞转移相关基因表达的影响66-68

2.5 SCFUC 对缺氧条件下 HGC27 细胞转移相关蛋白表达的影响68

3 讨论68-70
4 小结70-71
第二节 海参岩藻聚糖硫酸酯抑制血管新生作用的探讨71-78
1 材料和策略71-73

1.1 材料71

1.2 试剂71

1.3 仪器71

1.4 策略71-73

1.5 统计学浅析73

2 结果73-76

2.1 SCFUC 抑制缺氧条件下 HUVEC 细胞增殖的活性73-74

2.2 SCFUC 抑制缺氧条件下 HUVEC 细胞体外小管的形成74

2.3 对鸡胚尿囊膜血管生长的影响74-75

2.4 对缺氧条件下 HGC27 细胞 VEGF mRNA 表达的影响75-76

2.5 SCFUC 抑制缺氧条件下 HGC27 细胞 VEGF 蛋白的表达76

3 讨论76-77
4 小结77-78
第四章 海参岩藻聚糖硫酸酯体内抑制肿瘤生长和转移作用及其机制的探讨78-86
1 材料与策略78-81

1.1 实验材料78

1.2 药品和试剂78-79

1.3 主要仪器79

1.4 实验策略79-80

1.4.1 Lewis 肺癌细胞在小鼠体内传代79

1.4.2 动物模型的复制和实验79

1.4.3 肿瘤抑制率的测定79

1.4.4 Lewis 肺癌自发肺转移抑制率79

1.4.5 RTPCR 法测定肿瘤组织中转移相关基因 mRNA 的表达79-80

1.4.6 Western blotting 法检测肿瘤组织中论文导读：响82-832.4SCFUC抑制转移和血管新生相关蛋白的表达83-843讨论84-854小结85-86结论86-87本论文的特点及革新之处87-88参考文献88-97致谢97-98发表的学术论文98上一页123456
转移相关蛋白的表达80

1.5 数据浅析80-81

2 结果81-84

2.1 SCFUC 对小鼠抑瘤率的影响81

2.2 SCFUC 对荷瘤小鼠肺转移的影响81-82

2.3 SCFUC 对转移相关基因 mRNA 表达的影响82-83

2.4 SCFUC 抑制转移和血管新生相关蛋白的表达83-84

3 讨论84-85
4 小结85-86
结论86-87
本论文的特点及革新之处87-88
参考文献88-97
致谢97-98
发表的学术论文98