浅议莲心莲心碱与STI571对CML原代细胞Hsp90、IAPs表达影响学术

论文导读：1)。(6)Nef4μM或Nef8μM联合STI571组与control组比较LivinmRNA水平显著降低(P0.05)；Nef8μM联合STI571组与单用STI571组比较pvinmRNA水平显著下降(P0.05)。结论：(1)Nef与STI571能降低CML原代细胞bcr/abl和Stat5A的mRNA水平。(2)Nef与STI571均能下调Hsp90的基因表达,且联合用药较单用STI571其Hsp90的基因表达下调更显著；联
摘要：目的：进一步探讨莲心碱(Nef)增强伊马替尼(STI571)对慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia, CML)原代细胞敏感性的作用机制,探讨Nef与STI571对CML原代细胞bcr/abl融合基因及Jak-stat信号通路、热休克蛋白90(Hsp90)及细胞凋亡抑制因子(IAPs) Survivin, Livin基因表达的影响。策略：采取逆转录实时定量荧光PCR (RT-qPCR)法,蛋白质免疫印迹(Western-Blotting)法检测CML原代细胞相关基因的表达和蛋白水平。结果：(1)Nef与STI571均能下调bcr/abl基因的表达(P0.01)。(2)各药物处理组Stat5A mRNA水平均较未经药物处理的对照(control)组降低(P0.05)。(3)除Nef4μM组外,其余各药物处理组与control组比较其Hsp90AA1及Hsp90AB1mRNA水平显著下降(P0.01)：且Nef4μM或Nef8μM联合STI571组与单用STI571组比较其Hsp90AA1及Hsp90AB1mRNA水平也显著下降(P0.01)。(4)联合药物组CML原代细胞Hsp90蛋白水平较control组或单用STI571组显著性下降(P0.05)。(5)Nef和STI571均能下调Survivin mRNA水平(P0.01)；且Nef4μM或Nef8μM联合STI571组与单用STI571组比较survivin mRNA水平显著下降(P0.01)。(6)Nef4μM或Nef8μM联合STI571组与control组比较Livin mRNA水平显著降低(P0.05)；Nef8μM联合STI571组与单用STI571组比较pvin mRNA水平显著下降(P0.05)。结论：(1)Nef与STI571能降低CML原代细胞bcr/abl和Stat5A的mRNA水平。(2)Nef与STI571均能下调Hsp90的基因表达,且联合用药较单用STI571其Hsp90的基因表达下调更显著；联合药物组较control组和单用STI571组,Hsp90蛋白水平显著下降。(3)Nef和STI571均能下调Survivin mRNA水平,且联合用药较单用STI571其survivin mRNA水平降低更显著。(4) Nef4μM或Nef8μM联合ST论文导读：
I571之后能够下调Livin mRNA水平。关键词：莲心碱论文伊马替尼论文热休克蛋白90论文细胞凋亡抑制因子论文
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ABSTRACT6-8
目录8-10
縮略词10-11
前言11-13
第一章 Nef与STI571对CML原代细胞bcr/abl及下游信号通道Jak-Stat的影响13-22
1 材料13-15

1.1 标本13-14

1.2 主要试剂与药物14

1.3 主要材料及仪器14-15

2 策略15-17

2.1 标本采集15

2.2 单个核细胞的提取及实验分组15

2.3 RT-qPCR法检测各组Jak-Stat基因的表达15-17

2.3.1 引物15-16

2.3.2 细胞总RNA提取16

2.3.3 逆转录成cDNA16-17

2.3.4 荧光定量PCR17

3 统计学处理17
4 结果17-20

4.1 Nef对bcr/abl及Jak-Stat通道基因表达的影响17-20

4.

1.1 溶解曲线17-18

4.

1.2 Nef对bcr/abl,Jak2,Stat3,Stat5的影响18-20

5. 讨论20-21

6. 结论21-22

第二章 Nef与STI571对CML原代细胞Hsp90基因表达和蛋白水平的影响22-35
1 材料22-24

1.1 主要试剂与药物22-23

1.2 主要仪器23-24

2 策略24-29

2.1 标本的采集和单个核细胞的分离24

2.2 实验分组24-25

2.3 RT-qPCR法检测各组Hsp90基因表达水平25-27

2.3.1 细胞总RNA的提取25

2.3.2 逆转录成cDNA25-26

2.3.3 引物26

2.3.4 Realtime PCR扩增26-27

2.4 Western Blotting法检测HSP90蛋白水平27-29

2.4.1 蛋白标本的准备27-28

2.4.2 制备SDS-PAGE凝胶及电泳28

2.4.3 凝胶转膜及其检测28-29

3 统计学处理29-30
4 结果30-33

4.1 对HSP90基因表达的影响30-32

4.

1.1 溶解曲线30

4.

1.2 对HSP90AA1,Hsp90AB1的影响30-32

4.2 Nef对HSP90蛋白论文导读：3RealtimePCR扩增373统计学处理374实验结果37-394.1溶解曲线37-384.2Nef对CML原代细胞Survivin和Livin基因表达的影响38-395讨论39-406结论40-41结语41-42参考文献42-47综述47-58参考文献54-58致谢58-59在校期间发表的论文59上一页123
水平的影响32-33
5 讨论33-34
6 结论34-35
第三章 Nef与STI571对CML原代细胞细胞凋亡抑制因子survivin及pvin基因表达的影响35-41
1 材料35-36

1.1 主要试剂35-36

1.2 主要仪器36

2 策略36-37

2.1 标本采集及前处理36

2.2 Realtime PCR法检测细胞凋亡抑制因子Survivin,Livin的表达36-37

2.1 细胞总RNA的提取及逆转录36

2.2 引物36-37

2.3 Realtime PCR扩增37

3 统计学处理37
4 实验结果37-39

4.1 溶解曲线37-38

4.2 Nef对CML原代细胞Survivin和Livin基因表达的影响38-39

5 讨论39-40
6 结论40-41
结语41-42
参考文献42-47
综述47-58
参考文献54-58
致谢58-59
在校期间发表的论文59