谈抗原川芎嗪推动大鼠部分肝切除后再生修复机制初步设计

论文导读：
摘要：探讨背景肝脏是机体的重要代谢器官，许多疾病可以导致肝损伤。机体脏器和组织有着自身损伤修复的功能，同时，营养分子、药物、手术等刺激也可推动损伤的修复。随着肝脏疾病的增加，越来越多的患者需要接受肝切除术或肝移植术，而肝切除术或移植术同样依靠肝脏自身的再生修复能力。肝脏损伤或部分切除后的再生修复能力与活性氧作用以及抗氧化防御功能密切相关。由此，筛选有效的抗氧化剂，探讨利用抗氧化剂推动肝切除后再生，探讨肝脏再生修复新机制，是学术界重点关注的热点领域之一。川芎嗪(四吡嗪，TMPZ)为传统中药川芎中提取的单一化学成分药物，该药物具有显著的高效低毒特点。本探讨小组前期结果表明，川芎嗪有较强的抗氧化作用。我们假设：川芎嗪的抗氧化作用对部分肝切除后修复再生可能有着推动作用。由此，在观察肝脏部分切除后的修复历程中，测定氧化应激相关指标、抗氧化相关指标变化的同时给予抗氧化剂，对于探讨肝脏部分切除后再生修复的新机制具有重要作用。实验目的本实验利用中年大鼠肝切除模型，通过检测转氨酶、MDA含量变化、肝细胞增生核抗原(propferating cell nuclear antigen，PCNA)表达及超氧化物歧化酶（superoxide diutase，ＳＯＤ）表达的变化，探讨川芎嗪对中年大鼠肝切除后肝再生的推动作用及其可能机制。实验策略与探讨案例1.建立不同年龄段大鼠肝切除模型。①部分肝切除策略的探讨。②改善由Higgins和Aderson建立的70%大鼠肝切除模型。③建立不用年龄段大鼠70%肝切除模型。④通过对肝再生率等指标的检测观察不同年龄段大鼠肝切除后肝再生的情况。⑤检测MDA等指标，观察氧化还原调节的重要作用。2.在细胞水平上观察ROS对肝细胞增殖的影响及川芎嗪的保护作用。①通过MTT实验观察tBHP对QZG细胞活力的影响。②通过MTT实验观察川芎嗪的保护作用。③检测SOD的表达及活性变化。3.探讨川芎嗪推动大鼠部分肝切除后修复性再生的机制①通过对肝功和肝再生率等指标的检测证明川芎嗪的促再生作用。②通过对MDA等指标的检测证明川芎嗪在氧化还原调节中发挥的重要作用。③通过western blot等策略证明川芎嗪促再生作用的可能分子机制。实验结果1．同2月龄大鼠相比，随着年龄的增高，肝切除术后肝再生率下降，肝功能降低，PCNA表达降低，MDA损伤加重。提示年龄对肝切除术后肝论文导读：
再生有着显著影响，其机制可能是机体抗氧化能力下降，以至肝切除术中产生的氧化应激损伤加重，以而影响了肝脏正常再生。2．tBHP可以引起细胞活力损伤。给予川芎嗪治疗可以有效地提升SOD的表达，减少MDA生成，阻止tBHP介导的细胞活力损伤。3．经过对中年组大鼠预防性给予川芎嗪治疗发现，川芎嗪可以有效降低ALT、AST水平，改善肝功能；降低MDA含量，减少肝脏脂质过氧化损伤；增加肝细胞中PCNA的蛋白表达，改善肝脏再生环境，推动肝细胞增殖。其机制可能是通过推动SOD的表达，提升抗氧化能力，降低氧化损伤，推动PCNA的表达。结论1.随着年龄的增高，肝切除术引起的氧化损伤加重，肝切除术后肝功能和肝再生能力逐渐下降。2.无论是正常肝细胞的生长发育历程，还是肝切除术后肝再生的历程，活性氧都起了至关重要的作用。过量活性氧引起的氧化损伤，可能阻碍了肝细胞的增殖。3.预防性给予川芎嗪治疗可以有效地减轻因肝切除术引起的氧化损伤，有效改善肝功能，提升肝切除术后肝脏的再生能力。其机制可能是通过提升SOD的表达以而提升机体的抗氧化能力。关键词：川芎嗪论文肝切除术论文抗氧化作用论文核增殖抗原论文
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中文摘要8-11
Abstract11-14
前言14-16
文献回顾16-24
1 ROS 信号与衰老16-19
2 ROS 信号与肝再生19-21
3 川芎嗪与抗氧化21-24
第一部分 各年龄段大鼠肝切除模型的建立24-36
1 材料24-25
2 策略25-29

2.1 分组25-26

2.2 造模26-27

2.3 肝切除率的测定27

2.4 肝再生率的测定27-28

2.5 western blot 法检测 PCNA 的测定28

2.6 ALT、AST 的含量的测定28-29

2.7 肝组织 MDA 含量的测定29

3 结果29-34

3.1 肝切除率的测定29-30

3.2 肝切除术后

1、3、5、7 天肝再生率的测定30-31

3.3 肝切除术后

1、3、5、7 天余肝 PCNA 的 Western Blot 检测31-32

3.4 不同年龄大鼠肝切除术后 1 天肝再生率能力的测定32

3.5 不同年龄大鼠肝论文导读：

切除术后 1 天余肝 ALT、AST 含量的检测32-33

3.6 不同年龄大鼠肝切除术后 1 天余肝组织中 MDA 含量的测定33-34

4 讨论34-36
第二部分 川芎嗪推动氧化损伤后细胞增殖的作用及其机制36-47
1 材料36-37
2 实验策略37-40

2.1 细胞系选择细胞培养37-38

2.2 药物处理38

2.3 细胞培养38-39

2.4 细胞活力的测定39

2.5 细胞氧化损伤脂质过氧化物（MDA）的测定39

2.6 免疫印迹法（Western-blot）测定蛋白的表达39-40

2.7 统计学处理40

3 结果40-43

3.1 川芎嗪对 tBHP 诱导的 QZG 细胞损伤的抑制作用40-41

3.2 川芎嗪对 tBHP 诱导 QZG 细胞氧化损伤脂质过氧化物（MDA）的影响41-42
3.3 川芎嗪对 tBHP 诱导的 QZG 细胞氧化损伤相关抗氧化蛋白表达的影响42-43
4 讨论43-47

4.1 tBHP 干预对 QZG 细胞增殖活性的影响44

4.2 不同浓度川芎嗪作用 4h 对 QZG 细胞活力的影响44-45

4.3 川芎嗪对 tBHP 诱导的 QZG 细胞氧化损伤的保护作用45-47

第三部分 川芎嗪推动大鼠部分肝切除后修复性再生机制的探讨47-55
1 材料47
2 策略47-49

2.1 动物分组及处理47-48

2.2 动物处死及标本采集48

2.3 ALT、AST 的含量的测定48

2.4 肝切除术后 1 天肝再生率的测定48

2.5 血清和肝组织 MDA 含量的测定48

2.6 western blot 法检测的测定48-49

3 结果49-53

3.1 川芎嗪对大鼠肝切除后肝功指标的影响49-50

3.2 川芎嗪对中年大鼠肝切除后肝再生率的影响50

3.3 川芎嗪对大鼠肝切除后肝组织中 PCNA 蛋白表达的影响50-52

3.4 川芎嗪对大鼠肝切除后肝组织 MDA 含量的影响52

3.5 川芎嗪对大鼠肝切除后肝组织中 SOD

1、SOD2 蛋白表达的影响52-53

4 讨论53-55
小结55-56
参考文献56-64
个人简历和探讨成果64-66
附件66-79
致谢79