浅析佐剂基于血小板活化新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠作用机制

论文导读：终：血瘀在RA发病历程中既可成为主要的致病因素,又可作为主要的病理机制而贯穿于整个疾病的始终。3.1.4脾虚是RA血瘀证产生的重要因素：脾虚引起的运化失职、化源匮乏、脾不统血、阳虚寒凝均可致瘀。RA血小板活化的中医机制在于脾虚,应当“以脾论治”。3.2实验探讨结果3.

2.1以大鼠血小板参数、活化指标及超微结构的变化：与NC组

摘要：1目的以中医论述为指导,浅析、总结血小板活化在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)发病中的作用及其中医机制；通过动物实验,观察佐剂性关节炎(adjuvant arthritis, AA)大鼠血清血小板活化因子(platelet activating factor, PAF),外周血血小板参数、血小板α颗粒膜糖蛋白(granule membrane protein140, GMP-140)、血小板分化抗原40配体(cluster of differentiation40pgand, CD40L),胸腺GMP-140、CD40L、CD40L mRNA,血小板超微结构的变化及体质量、足跖肿胀度、关节炎指数(arthritis index, AI)、白细胞介素(interleukin, IL)-1、IL-6、IL-17、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)-α、IL-10的变化和健脾益气中药新风胶囊(Xinfeng Capsules, XFC)对AA大鼠的疗效及上面陈述的指标的影响,并基于血小板活化探讨XFC对AA大鼠的作用机制。以而丰富RA“以脾论治,整体调节”科学内涵,为中医药治疗RA的机理探讨提供新的思路。2策略2.1论述探讨通过文献探讨,总结、浅析血小板活化与中医血瘀证、RA、中医脾虚的联系。以中医论述角度,诠释RA血小板活化“以脾论治”的机制。2.2实验探讨将40只SD (sprague dawley, SD)雄性大鼠按随机数字表分为5组：正常对照(normal control, NC)组、模型对照(model control, MC)组、雷公藤多甙片(tripterygium wilfordii polyglycoside tablet, TPT)组、甲氨喋呤(methotrexate, MTX)组和XFC组,每组8只,除NC组外,向每只大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂(freund's complete adjuvant, FCA)0.1ml致炎,复制成AA大鼠模型,于致炎后第19天开始给予相应药物治疗,①TPT组：将TPT研成细末,加生理盐水配制混匀,按10ml/kg灌胃,每天1次。②MTX组：将MTX研成细末,加生理盐水配制混匀,按10ml/kg灌胃,每周1次；未给药的实验日,给予生理盐水灌胃,10ml/kg,每天1次。③XFC组：将XFC去除胶囊壳研成细末,加生理盐水配制混匀,按10ml/kg灌胃,每天1次。④NC组及MC组予生理盐水灌胃,10ml/kg,每天1次,连续用药30天。实验历程中观察各组大鼠的体质量、足跖肿胀度、AI。实验结束后检测大鼠各指标：采取酶联免疫吸附(enzyme-pnked immunosorbent assay, ELISA)法检测各组大鼠血清PAF、IL-1、IL-6、IL-17、TNF-α、IL-10的表达,流式细胞仪检测大鼠外周血GMP-140、CD40L表达,免疫组化法检测胸腺CD40L的表达,逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)法检测胸腺CD40L mRNA的表达,免疫蛋白印迹(western blotting, WB)法检测胸腺GMP-140的表达,透射电镜观察血小板超微结构的变化。3结果3.1论述探讨结果3.1.1血小板活化在RA的发生、进展中起重要作用：血小板及其活化产物推动了RA滑膜炎症的发生与进展、滑膜组织的增生、血管翳的形成、软骨及骨破坏。3.1.2血小板活化是中医血瘀证本质的重要体现：血瘀证本质体现之一为血小板活化,血小板活化参与了血瘀证的发生与进展,是血瘀证产生的重要生理、病理基础。3.1.3血瘀证贯穿于RA病程的始终：血瘀在RA发病历程中既可成为主要的致病因素,又可作为主要的病理机制而贯穿于整个疾病的始终。3.1.4脾虚是RA血瘀证产生的重要因素：脾虚引起的运化失职、化源匮乏、脾不统血、阳虚寒凝均可致瘀。RA血小板活化的中医机制在于脾虚,应当“以脾论治”。3.2实验探讨结果3.2.1以大鼠血小板参数、活化指标及超微结构的变化：与NC组比较,Mc组AA大鼠血清PAF,外周血PLT、PCT、GMP-140、CD40L,胸腺GMP-140、 CD40L、CD40L mRNA表达显著升高(P0.01),血小板超微结构破坏严重。3.2.2以大鼠体质量、足跖肿胀度、AI的变化：致炎前,各组大鼠的体质量比较,差别无统计学作用(P0.05)；给药前1d,与Nc组相比,Mc组大鼠体质量显著减轻(P0.05),足跖肿胀度、AI显著升高(P0.01)。3.2.3以大鼠细胞因子IL-1、IL-6、IL-17、TNF-α、IL论文导读：40、CD40L及胸腺GMP-140、CD40L、CD40LmRNA表达升高。4.3AA大鼠血小板活化与炎症密切相关,体现为血小板活化指标PAF、GMP-140、CD40L与致炎因子IL-1、IL-6、IL-17、TNF-α,抑炎因子IL-10及足跖肿胀度、AI具有相关性。4.4XFC对AA大鼠体质量、足跖肿胀度、AI具有良好的调控作用。5基于血小板活化XFC对AA大鼠的作用机制5.1XF
-10的变化：与NC组相比,MC组大鼠IL-1、IL-6、IL-17、TNF-α显著升高(P0.01),IL-10显著降低(P0.01)。3.2.4以大鼠血小板活化指标与血小板参数、足跖肿胀度、AI、IL-1、 IL-6、IL-17、TNF-α、IL-10的相关性：AA大鼠血清PAF,外周血GMP-140、 CD40L,胸腺GMP-140、CD40L、CD40L mRNA与PLT、PCT、IL-1、IL-6、 IL-17、TNF-α、足跖肿胀度、AI呈正相关,与IL-10呈负相关(P0.01或P0.05)。3.2.5XFC对以大鼠血小板参数及活化指标的影响：与MC组相比,XFC可以显著降低AA大鼠血清PAF,外周血PLT、PCT、GMP-140、CD40L,胸腺GMP-140、CD40L、CD40L mRNA的表达水平(P0.01或P0.05)；与MTX组、TPT组相比,XFC组血清PAF、胸腺GMP-140表达水平显著降低(P0.05),外周血GMP-140、胸腺CD40L mRNA呈下降走势,但差别无统计学作用(P0.05)。3.2.6XFC对以大鼠血小板超微结构的影响：XFC组血小板表面伸出细伪足或小的突起,开放管道细,数量少,血小板α颗粒较前显著增加,线粒体大部分完好,少数肿胀,超微结构较Mc组、MTX组、TPT组有所改善。3.2.7XFC对AA大鼠体质量、足跖肿胀度、AI的影响：XFC组大鼠的体质量显著高于Mc组、MTX组及TPT组(P0.01或P0.05),与Nc组无显著差别(P0.05)；MTX组、TPT组、XFC组三个治疗组AA大鼠足跖肿胀度、AI显著低于Mc组(P0.01),各治疗组间相比,足跖肿胀度、AI差别无统计学作用(P0.05)。3.2.8XFC对细胞因子IL-1、IL-6、IL-17、TNF-α、IL-10表达的影响：XFC能够降低血清IL-1、IL-6、IL-17、TNF-α表达,升高IL-10(P0.01),与MTX组、TPT组相比,XFC组IL-10显著升高(P0.05),IL-17呈下降走势,但差别无统计学作用(P0.05)。4结论4.1血小板活化在RA的发生、进展中发挥重要作用,其中医机制在于脾虚,应当“以脾论治”。4.2AA大鼠有着血小板活化,体现为血清PAF,外周血PLT、PCT、GMP-140、 CD40L及胸腺GMP-140、CD40L、CD40L mRNA表达升高。4.3AA大鼠血小板活化与炎症密切相关,体现为血小板活化指标PAF、 GMP-140、CD40L与致炎因子IL-1、IL-6、IL-17、TNF-α,抑炎因子IL-10及足跖肿胀度、AI具有相关性。4.4XFC对AA大鼠体质量、足跖肿胀度、AI具有良好的调控作用。5基于血小板活化XFC对AA大鼠的作用机制5.1XFC能通过抑制AA大鼠血小板活化而调节细胞因子在炎症中的表达,以而降低足跖肿胀度、AI。5.2XFC能通过降低AA大鼠血清PAF,外周血PLT、PCT、GMP-140、CD40L的表达,抑制血小板活化介导的炎症反应,以而降低足跖肿胀度、AI。5.3XFC能通过降低AA大鼠胸腺GMP-140、CD40L、CD40L mRNA的表达,抑制血小板活化介导的炎症反应,以而降低足跖肿胀度、AI。5.4XFC能通过改善AA大鼠血小板超微结构,抑制血小板活化介导的炎症反应,以而降低足跖肿胀度、AI。关键词：新风胶囊论文佐剂性关节炎论文血小板活化论文血瘀证论文脾虚论文
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ABSTRACT11-17
英文缩略词表17-19
前言19-20
第一部分 论述探讨20-27
1 血小板活化在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的发生进展中起重要作用20-22
1.1 血小板活化因子(platelet activating factor,PAF)推动RA滑膜炎症和血管翳形成20-21
1.2 血小板α颗粒膜糖蛋白(platelet granule membrane protein 140,GMP-140)推动RA滑膜炎症和病情进展21
1.3 血小板分化抗原CD40配体(cluster of differentiation 40 pgand,CD40L)推动RA滑膜组织增生和血管翳形成21-22
2 血小板活化是血瘀证本质的重要体现22-23
3 血瘀证贯穿于RA病程的始终23-25

3.1 历史源流23-24

3.2 病因病机24-25

4 脾虚是血瘀证产生的重要因素25-26
4.1 运化失职致瘀25-26论文导读：321.11免疫蛋白质印记法(WesternBlot)检测胸腺GMP-140的表达32-341.12免疫组化法检测胸腺CD40L的表达34-351.13超微电镜观察血小板超微结构的变化351.14统计学处理35-362结果36-472.1佐剂性关节炎(adjuvantarthritis,AA)大鼠体质量的变化362.2AA大鼠足跖肿胀度、AI的变化362.3AA大鼠外周血血小板参数的变化36-372.

4.2 化源匮乏致瘀26

4.3 脾不统血致瘀26

4.4 阳虚寒凝致瘀26

5 小结26-27
第二部分 实验探讨27-48
前言27-28
1 材料与策略28-36

1.1 动物28

1.2 主要药品及试剂28

1.3 主要仪器设备28-29

1.4 模型复制及给药29

1.5 足跖肿胀度29-30

1.6 关节炎指数(arthritis index,AI)30

1.7 全自动血细胞浅析仪检测外周血血小板参数的表达30

1.8 酶联免疫吸附法(enzyme-pnked immunosorbent assay,ELISA)检测血清PAF、IL-

1、IL-6、IL-17、TNF-α、IL-10的表达30-31

1.9 流式细胞仪检测外周血GMP-140、CD40L的表达31-32
1.10 逆转录-聚合酶链反应法(reverse transcription polymerasechain reaction,RT-PCR)检测胸腺CD40L mRNA的表达32
1.11 免疫蛋白质印记法(Western Blot)检测胸腺GMP-140的表达32-34

1.12 免疫组化法检测胸腺CD40L的表达34-35

1.13 超微电镜观察血小板超微结构的变化35

1.14 统计学处理35-36

2 结果36-47
2.1 佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠体质量的变化36

2.2 AA大鼠足跖肿胀度、AI的变化36

2.3 AA大鼠外周血血小板参数的变化36-37

2.4 AA大鼠血清PAF、外周血GMP-140及CD40L的变化37

2.5 AA大鼠胸腺GMP-140、CD40L、CD40L mRNA的变化37

2.6 AA大鼠血清IL-

1、IL-6、IL-17、TNF-α、IL-10的变化37

2.7 血小板活化各指标与血小板参数、足跖肿胀度、AI及细胞因子的相关性浅析37-38
2.8 新风胶囊(Xinfeng Capsules,XFC)对AA大鼠体质量的影响38-39

2.9 XFC对AA大鼠足跖肿胀度、AI的影响39-40

2.10 XFC对AA大鼠外周血血小板参数的影响40

2.11 XFC对AA大鼠血清PAF、外周血GMP-140及CD40L的影响40-42

2.12 XFC对AA大鼠胸腺GMP-140的影响42-43

2.13 XFC对AA大鼠胸腺CD40L的影响43-44

2.14 XFC对AA大鼠胸腺CD40L mRNA的影响44-45

2.15 XFC对AA大鼠血小板超微结构的影响45-46

2.16 XFC对AA大鼠血清IL-

1、IL-6、IL-1

7、TNF-α、IL-10的影响46-47

3 小结47-48 第三部分 讨论48-65
1 RA血小板活化的特点及与中医血瘀证的相关性48-49

1.1 RA血小板活化的特点48

1.2 RA血小板活化与中医血瘀证的相关性48-49

2 RA血小板活化“以脾论治”的依据49-53

2.1 RA“以脾论治”的依据49-52

2.2 RA血瘀证“以脾论治”的依据52-53

3 XFC的方解及其对血小板活化的影响53-56

3.1 君药黄芪53-54

3.2 君药薏苡仁54-55

3.3 臣药雷公藤55

3.4 臣药蜈蚣55-56

4 动物模型的选择依据56-57
5 观测指标的选择理由及作用57-61

5.1 PAF57

5.2 GMP-14057-58

5.3 CD40L58

5.4 血小板参数58-59

5.5 IL-159

5.6 TNF-α59-60

5.7 IL-1060

5.8 IL-660-61

5.9 IL-1761

6 XFC对AA大鼠的疗效浅析61-62

6.1 XFC能增加AA大鼠的体质量61

6.2 XFC能降低AA大鼠的足跖肿胀度、AI61

6.3 XFC能调节AA大鼠的细胞因子平衡61-62

7 XFC对AA大鼠血小板活化指标的影响62
7.1 XFC能降低AA大鼠血清PAF及外周血PLT、PCT、GMP-140、CD40L62
7.2 XFC能降低AA大鼠胸腺GMP-140、CD40L、CD40L mRNA62

7.3 XFC能改善AA大鼠血小板超微结构62

8 基于血小板活化探讨XFC对AA大鼠的作用机制62-65
8.1 XFC通过抑制血小板活化而调节细胞因子以降低足跖肿胀度、AI62
8.2 XFC通过降低AA大鼠血清PAF以降低足跖肿胀度、AI62-63
8.3 XFC通过降低AA大鼠外周血及胸腺GMP-140以降低足跖肿胀度、AI63
8.4 XFC通过降低AA大鼠外周血及胸腺CD40L、CD40L mRNA以降低足跖肿胀度、AI63-64
8.5 XFC通过改善AA大鼠血小板超微结构以降低足跖肿胀度、AI64-65
结语65-67
参考文献67-75
附录75-94
综述

一、血小板活化标志物在类风湿关节炎中的作用及中药干预探讨75-87

参考文献81-87
综述论文导读：二类风湿关节炎以“瘀”论治探讨进展87-94参考文献92-94探讨生在学期间发表的论文94探讨生在学期间出版的著作94-95探讨生在学期间的获奖情况95-96致谢96上一页1234

二、类风湿关节炎以“瘀”论治探讨进展87-94

参考文献92-94
探讨生在学期间发表的论文94
探讨生在学期间出版的著作94-95
探讨生在学期间的获奖情况95-96
致谢96