简谈轴突载脂蛋白E与神经元损伤和轴突再生相关机制学术
最后更新时间：2024-04-01
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论文导读：
摘要：背景：在哺乳动物中枢神经系统中，神经元及其轴突担负了在结构上构建神经网络，在功能上生成和传递神经信号的作用。生长锥为神经元轴突末端膨大部分，扮演引导轴突生长，最终与靶点接触并传递神经电信号的角色。CNS神经元死亡后，其余神经元无法分裂复制并代替死亡神经元，但轴突受损后体现出一定的再生能力并可推动受损后神经功能的部分恢复。作为CNS中一种主要的载脂蛋白，CNS遭受损伤后，apoE在修复受损神经元以及推动神经元轴突生长方面起到重要作用。但是，损伤后神经元中apoE的来源并不清楚，人类apoE各亚型对生长锥生长和轴突再生的影响也尚待阐明。目的：本探讨旨在关注apoE在神经元损伤和轴突再生中扮演的角色。在神经元方面，明确机械损伤后神经元自身apoE的变化，同时损伤后神经元是否以外界摄入apoE以及受损神经元能否激发胶质细胞合成并分泌apoE的相关机制。在神经元轴突和生长锥方面，明确apoE的mRNA和蛋白在神经元轴突、再生轴突以及生长锥中是否有着，观察apoE各个亚型对轴突再生和生长锥生长的影响并探讨其可能的信号通路。以期进一步明确TBI后神经元中apoE参与的病理历程和探寻apoE各亚型影响CNS疾病不同预后的机制和可能的干预对策。策略：1，离体培养野生型/apoE KO鼠皮质原代神经元和胶质细胞，建立神经元机械损伤模型，利用western blot检测损伤后野生型神经元胞体和对应培养基中apoE的水平。制作野生型胶质细胞和apoE KO鼠皮质原代神经元状态培养基，分别与损伤后apoE KO神经元和野生型胶质细胞孵育，利用western blot检测对应细胞和培养基中apoE水平。选择ERK信号通路抑制剂（U0126）加入损伤后apoE KO鼠神经元状态培养基和野生型胶质细胞孵育中，同样利用western blot检测各组胞体中和对应的培养基中apoE水平。2，离体培养野生型/apoE KO鼠皮质神经块，建立改善的神经块轴突机械切断模型并获得纯净的轴突。利用RT-PCR和免疫荧光检测神经元轴突和断后再生轴突中apoE的mRNA和蛋白。将人类重组apoE蛋白2、3、4加至神经块培养基中，鬼丙环肽染色神经块轴突末端生长锥，观察不同apoE亚型对生长锥的影响。利用ERK信号通路抑制剂检测apoE亚型作用生长锥的可能信号路径。此外，将人类重组apoE蛋白2、3、4加至切断轴突后的神经块培养基中，观察不同apoE亚型对轴突再生的影响。结果：1，与未机械损伤的野生型原代皮质神经元比较，损伤后神经元中apoE水平增加约2.5倍，但对应培养基中apoE水平无显著转变。损伤后神经元以胶质细胞状态培养基中摄取apoE数量约为未损伤神经元的4倍。损伤神经元状态培养基能激发胶质细胞合成apoE增加约3倍和分泌apoE增加约2倍，加入ERK信号通路抑制剂U0126后，显著地降低了胶质细胞apoE的合成和分泌。2，在神经元轴突和切断后再生的轴突中，RT-PCR和免疫荧光分别显示apoE的mRNA和蛋白为阳性。在神经块中，加入人类重组apoE蛋白2、3、4后生长锥荧光强度分别为：50.7±19.4，58.5±15.4，23.4±13.5，加入apoE4+U0126后生长锥荧光强度为32.8±13.2，其中加入apoE4的生长锥荧光强度，显著低于加入apoE2、3的生长锥荧光强度，而U0126干预的实验组生长锥荧光强度大于未干预组的生长锥荧光强度。在切断轴突后神经块中，加入人类重组apoE蛋白2、3、4后，再生轴突比例为0.414±0.078，0.347±0.091，0.186±0.080，显示apoE4对断后轴突再生推动作用最弱。结论：1，机械损伤后神经元合成apoE增加，同时损伤的神经元以外界摄取更多外源性apoE，并且通过ERK途径诱导胶质细胞合成和分泌的apoE增加。2，ApoE4能负性影响生长锥生长；阻断ERK信号途径能抑制apoE4对生长锥的负性影响。同时apoE4对切断后轴突再生为负性影响。关键词：载脂蛋白E论文神经元论文机械损伤论文轴突再生论文生长锥论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。英汉缩略语名词对照6-8
中文摘要8-11
英文摘要11-14
第一部分 载脂蛋白E在损伤后神经元中的变化及其信号通路的探讨14-44
前言14
第一节 原代神经元机械损伤模型的建立14-28
1 材料14-16
2 策略16-22
3 结果22-26
4 讨论26-28
第二节 机械损伤后神经元中载脂蛋白E的变化及相关机制28-40
1 材料28-30
2 策略30-36
3 结果36-38
4 讨论38-40
参考文献40-44
第二部分 载脂蛋白E对神经元轴突再生以及生长锥生长的影响44-83
前言44-45
第一节 神经块轴突机械切断模型的建立及纯净轴突获得45-57
1 材料45-46
2 策略46-50
3 结果50-55
4 讨论55-57
第二节 载脂蛋白E和神经元生长锥及轴突再生相关机制探讨57-79
1 材料57-59
2 策略59-68
3 结果68-76
4 讨论76-79
参考文献79-83
全文总结83-84
文献综述84-98
参考文献90-98
致谢98-99
攻读博士期间发表文章99-100
摘要：背景：在哺乳动物中枢神经系统中，神经元及其轴突担负了在结构上构建神经网络，在功能上生成和传递神经信号的作用。生长锥为神经元轴突末端膨大部分，扮演引导轴突生长，最终与靶点接触并传递神经电信号的角色。CNS神经元死亡后，其余神经元无法分裂复制并代替死亡神经元，但轴突受损后体现出一定的再生能力并可推动受损后神经功能的部分恢复。作为CNS中一种主要的载脂蛋白，CNS遭受损伤后，apoE在修复受损神经元以及推动神经元轴突生长方面起到重要作用。但是，损伤后神经元中apoE的来源并不清楚，人类apoE各亚型对生长锥生长和轴突再生的影响也尚待阐明。目的：本探讨旨在关注apoE在神经元损伤和轴突再生中扮演的角色。在神经元方面，明确机械损伤后神经元自身apoE的变化，同时损伤后神经元是否以外界摄入apoE以及受损神经元能否激发胶质细胞合成并分泌apoE的相关机制。在神经元轴突和生长锥方面，明确apoE的mRNA和蛋白在神经元轴突、再生轴突以及生长锥中是否有着，观察apoE各个亚型对轴突再生和生长锥生长的影响并探讨其可能的信号通路。以期进一步明确TBI后神经元中apoE参与的病理历程和探寻apoE各亚型影响CNS疾病不同预后的机制和可能的干预对策。策略：1，离体培养野生型/apoE KO鼠皮质原代神经元和胶质细胞，建立神经元机械损伤模型，利用western blot检测损伤后野生型神经元胞体和对应培养基中apoE的水平。制作野生型胶质细胞和apoE KO鼠皮质原代神经元状态培养基，分别与损伤后apoE KO神经元和野生型胶质细胞孵育，利用western blot检测对应细胞和培养基中apoE水平。选择ERK信号通路抑制剂（U0126）加入损伤后apoE KO鼠神经元状态培养基和野生型胶质细胞孵育中，同样利用western blot检测各组胞体中和对应的培养基中apoE水平。2，离体培养野生型/apoE KO鼠皮质神经块，建立改善的神经块轴突机械切断模型并获得纯净的轴突。利用RT-PCR和免疫荧光检测神经元轴突和断后再生轴突中apoE的mRNA和蛋白。将人类重组apoE蛋白2、3、4加至神经块培养基中，鬼丙环肽染色神经块轴突末端生长锥，观察不同apoE亚型对生长锥的影响。利用ERK信号通路抑制剂检测apoE亚型作用生长锥的可能信号路径。此外，将人类重组apoE蛋白2、3、4加至切断轴突后的神经块培养基中，观察不同apoE亚型对轴突再生的影响。结果：1，与未机械损伤的野生型原代皮质神经元比较，损伤后神经元中apoE水平增加约2.5倍，但对应培养基中apoE水平无显著转变。损伤后神经元以胶质细胞状态培养基中摄取apoE数量约为未损伤神经元的4倍。损伤神经元状态培养基能激发胶质细胞合成apoE增加约3倍和分泌apoE增加约2倍，加入ERK信号通路抑制剂U0126后，显著地降低了胶质细胞apoE的合成和分泌。2，在神经元轴突和切断后再生的轴突中，RT-PCR和免疫荧光分别显示apoE的mRNA和蛋白为阳性。在神经块中，加入人类重组apoE蛋白2、3、4后生长锥荧光强度分别为：50.7±19.4，58.5±15.4，23.4±13.5，加入apoE4+U0126后生长锥荧光强度为32.8±13.2，其中加入apoE4的生长锥荧光强度，显著低于加入apoE2、3的生长锥荧光强度，而U0126干预的实验组生长锥荧光强度大于未干预组的生长锥荧光强度。在切断轴突后神经块中，加入人类重组apoE蛋白2、3、4后，再生轴突比例为0.414±0.078，0.347±0.091，0.186±0.080，显示apoE4对断后轴突再生推动作用最弱。结论：1，机械损伤后神经元合成apoE增加，同时损伤的神经元以外界摄取更多外源性apoE，并且通过ERK途径诱导胶质细胞合成和分泌的apoE增加。2，ApoE4能负性影响生长锥生长；阻断ERK信号途径能抑制apoE4对生长锥的负性影响。同时apoE4对切断后轴突再生为负性影响。关键词：载脂蛋白E论文神经元论文机械损伤论文轴突再生论文生长锥论文
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中文摘要8-11
英文摘要11-14
第一部分 载脂蛋白E在损伤后神经元中的变化及其信号通路的探讨14-44
前言14
第一节 原代神经元机械损伤模型的建立14-28
1 材料14-16
2 策略16-22
3 结果22-26
4 讨论26-28
第二节 机械损伤后神经元中载脂蛋白E的变化及相关机制28-40
1 材料28-30
2 策略30-36
3 结果36-38
4 讨论38-40
参考文献40-44
第二部分 载脂蛋白E对神经元轴突再生以及生长锥生长的影响44-83
前言44-45
第一节 神经块轴突机械切断模型的建立及纯净轴突获得45-57
1 材料45-46
2 策略46-50
3 结果50-55
4 讨论55-57
第二节 载脂蛋白E和神经元生长锥及轴突再生相关机制探讨57-79
1 材料57-59
2 策略59-68
3 结果68-76
4 讨论76-79
参考文献79-83
全文总结83-84
文献综述84-98
参考文献90-98
致谢98-99
攻读博士期间发表文章99-100