谈述辐射拉米夫定对人乙肝病毒相关肝癌细胞放射敏感性影响及机制

论文导读：。结论:抗病毒剂拉米夫定在体外抑制乙肝病毒复制的同时能增强HepG2.2.15细胞的放射增敏感性，其增敏机制可能与拉米夫定下调CycpnD1表达引起G0/G1期阻滞及增强放射诱导的细胞凋亡有关。关键词：HepG2.2.15细胞论文拉米夫定论文CycpnD1论文辐射耐受性论文本论文由www.7ctime.com,需要论文
摘要：目的:探讨抗病毒剂拉米夫定对人乙肝病毒相关肝癌细胞株HepG2.2.15细胞的放射增敏作用，并初步探讨其可能的增敏机制。策略:通过荧光定量PCR法检测不同浓度拉米夫定(0，2.5，5，10，25μg/mL)对人乙肝病毒相关肝癌HepG2.2.15细胞的病毒抑制效果；采取平板克隆形成实验观察拉米夫定对HepG2.2.15细胞株放射敏感性的影响；运用流式细胞仪检测HepG2.2.15细胞的凋亡率及细胞周期分布变化；利用RT-PCR法、细胞免疫组化法及Western Blot法分别检测CycpnD1在HepG2.2.15细胞中表达水平的变化。结果:荧光定量PCR法检测结果显示，拉米夫定可抑制HepG2.2.15细胞内乙肝病毒的复制，且在10μg/mL作用48h时抑制效果最佳；平板克隆形成实验显示拉米夫定可显著降低照射后HepG2.2.15细胞的克隆形成率，其放射增敏比（SER）为1.224；流式细胞仪检测显示拉米夫定联合照射作用HepG2.2.15细胞后体现为凋亡率增加，G0/G1期细胞比例增加(p＜0.05)；拉米夫定联合照射后，细胞内CycpnD1mRNA及CycpnD1蛋白的表达水平均下调。结论:抗病毒剂拉米夫定在体外抑制乙肝病毒复制的同时能增强HepG2.2.15细胞的放射增敏感性，其增敏机制可能与拉米夫定下调CycpnD1表达引起G0/G1期阻滞及增强放射诱导的细胞凋亡有关。关键词：HepG2.2.15细胞论文拉米夫定论文CycpnD1论文辐射耐受性论文
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ABSTRACT4-7
英文缩略词表7-8
第1章 引言8-10
第2章 材料10-14

2.1 细胞株10

2.2 主要试剂10-12

2.1 细胞培养所需主要试剂10-11

2.2 荧光定量 PCR 法所需主要试剂11

2.3 平板克隆形成实验所需主要试剂11

2.4 流式细胞仪检测术所需主要试剂11

2.5 RT-PCR 法所需主要试剂11-12

2.6 细胞免疫组化法所需主要试剂12

2.7 Western Blot 法所需主要试剂12

2.3 主要仪器设备12-14

第3章 策论文导读：细胞周期分布变化193.7RT-PCR法检测细胞周期蛋白D1(CycpnD1)mRNA的表达变化19-213.7.1提取各组细胞总RNA19-203.7.2将细胞总RNA逆转录成cDNA203.7.CR扩增20-213.7.4琼脂糖凝胶电泳213.8细胞免疫组化法初步检测各组细胞内CycpnD1蛋白的表达21-223.9Westernblot法检测各组细胞内CycpnD1蛋白的表达变化
略14-25

3.1 细胞培养14-16

3.

1.1 细胞复苏14

3.

1.2 细胞换液14-15

3.

1.3 细胞传代15

3.

1.4 细胞冻存15-16

3.

1.5 绘制细胞生长曲线16

3.2 细胞照射策略16-17

3.3 荧光定量 PCR 法确定最佳药物浓度及作用时间17

3.4 平板克隆形成实验观察拉米夫定对细胞放射敏感性的影响17-18

3.5 流式细胞仪检测 HepG

2.15 细胞的凋亡率变化18-19

3.6 流式细胞仪检测 HepG

2.15 细胞周期分布变化19

3.7 RT-PCR 法检测细胞周期蛋白 D1(CycpnD1)mRNA 的表达变化19-21

3.7.1 提取各组细胞总 RNA19-20

3.7.2 将细胞总 RNA 逆转录成 cDNA20

3.7.3 PCR 扩增20-21

3.7.4 琼脂糖凝胶电泳21

3.8 细胞免疫组化法初步检测各组细胞内 CycpnD1 蛋白的表达21-22

3.9 Western blot 法检测各组细胞内 CycpnD1 蛋白的表达变化22-24

3.9.1 细胞蛋白提取22-23

3.9.2 SDS-PAGE 电泳23

3.9.3 转膜23

3.9.4 免疫反应23

3.9.5 化学发光，显影，定影23-24

3.9.6 凝胶图象浅析24

3.10 统计学浅析24-25

第4章 结果25-33
4.1 MTT 法绘制 HepG

2.15 细胞生长曲线25-26

4.2 拉米夫定对 HepG

2.15 细胞病毒复制的影响26-27

4.3 拉米夫定对 HepG

2.15 细胞放射敏感性的影响27-28

4.4 流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率变化28-29

4.5 流式细胞仪检测各组细胞的周期分布变化29-30

4.6 HepG

2.15 细胞经不同处理后 CycpnD1mRNA 的表达变化30-31

4.7 HepG

2.15 细胞经不同处理后 CycpnD1 蛋白的表达变化31-33

第5章 讨论33-36
第6章 结论与展望36-37

6.1 结论36

6.2 展望36-37

致谢37-38
参考文献38-40
攻读学位期间的探讨成果40-41
综述41-49
参考文献47-49