试议大蒜素诱导人卵巢癌细胞SKOV3凋亡机制-

论文导读：FCM)检测凋亡率的变化；FCM检测细胞周期分布；磷酸化蛋白激酶芯片检测信号通路的活化情况,由免疫印迹实验进一步证实。主要结果:(1)不同浓度大蒜素作用不同时间对SKOV3细胞的增殖抑制作用:CCK-8法检测结果显示一定浓度范围的大蒜素对SKOV3细胞的生长具有显著的抑制作用，且呈时间-剂量依赖性。不同浓度组分别作用于SKOV3细胞24、
摘要：探讨目的:大蒜素是以大蒜中分离提取的一种重要成分,以往的探讨显示，大蒜素可显著抑制卵巢癌细胞H08910和OVCA-3的生长，并诱导细胞凋亡。然而，大蒜素诱导卵巢癌细胞凋亡的机制并不十分清楚。本探讨以人卵巢癌SKOV3细胞为实验对象，阐明大蒜素诱导卵巢癌细胞凋亡的作用机制。主要策略:采取CCK-8法测定大蒜素对SKOV3细胞增殖活性的效应；AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞术(FCM)检测凋亡率的变化；FCM检测细胞周期分布；磷酸化蛋白激酶芯片检测信号通路的活化情况,由免疫印迹实验进一步证实。主要结果:(1)不同浓度大蒜素作用不同时间对SKOV3细胞的增殖抑制作用:CCK-8法检测结果显示一定浓度范围的大蒜素对SKOV3细胞的生长具有显著的抑制作用，且呈时间-剂量依赖性。不同浓度组分别作用于SKOV3细胞24、48、72h，其抑制率差别有显著性作用(P0.05)。利用中效方程得出，48h的IC50为22.23μg/m。(2)大蒜素对SKOV3细胞周期的影响:12.5μg/ml、25μg/ml浓度大蒜素作用SKOV3细胞48h后，细胞周期发生变化。各实验组G1期细胞百分比降低，S期细胞百分比无显著变化，G2期细胞百分比增高，细胞显著阻滞于G2期,与对照组比较有统计学作用(P0.01)。(3)大蒜素对SKOV3细胞凋亡的影响:12.5μg/ml、25μg/ml浓度大蒜素作用48h后细胞凋亡率随着药物浓度的增加而增加，早晚期凋亡率(％)分别为7.37±1.21、15.87±1.65，与对照组(2.33±0.42)比较均显著提升(P0.01)；加入JNK信号通路抑制剂（SP600125）20μM作用15min后，凋亡率显著减低(P0.01)。(4)磷酸化蛋白激酶芯片对大蒜素激活的信号通路的筛选:12.5μg/ml的大蒜素作用24h后，磷酸化蛋白激酶芯片结果显示，P53(S46)、T(T308)和c-Jun(S63)等信号通路被激活。(5)大蒜素对JNK通路激活的影响:（0-100μg/ml）的大蒜素作用15min后，JNK蛋白的磷酸化随着浓度的增加显著增加；25μg/ml的大蒜素作用不同时间后，JNK的磷酸化在15min最强；加入SP600125后JNK的磷酸化显著受到抑制。表明大蒜素诱导SKOV3细胞凋亡与JNK通路有关。(6)大蒜素对线粒体凋亡通路的影响：25μg/ml的大蒜素作用SKOV3细胞（0、6h、12h）后,在胞浆蛋白中,Bax蛋白的表达量显著减弱,Cyt C蛋白的表达则显著增强；而线粒体Bax、Cyt C蛋白表达正好相反。加入SP600125后，在胞浆蛋白中，Bax蛋白的表达增加，Cyt C蛋白的表达减弱；而线粒体蛋白表达正好相反。表明JNK的活化，包括Bcl-2家族的活化，引发了线粒体介导的凋亡信号通路的活化，导致Bax迁移后的大量堆积和Cyt C的释放，导致卵巢癌SKOV3细胞凋亡。结论：我们的实验结果表明大蒜素具有抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用，并阻滞细胞于G2期。大蒜素诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡的作用可能与JNK通路的活化和Bax的迁移，引起细胞色素C的释放有关。关键词：大蒜素论文SKOV3论文凋亡论文JNK通路论文
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Abstract7-9
缩略词表9-10
前言10-13
第一部分 大蒜素对人卵巢癌 SKOV3 细胞增殖及凋亡的影响13-21
材料和策略13-16
实验结果16-21
第二部分 大蒜素诱导人卵巢癌 SKOV3 细胞凋亡机制探讨21-32
材料和策略21-27
实验结果27-32
讨论32-38
附录

一、大蒜素作用卵巢癌SKOV3细胞48h后Bcl-xl蛋白的表达38-39

附录

二、以 DADS为例，经典的caspase依赖的线粒体途径的细胞凋亡方式39-40

参考文献40-45
总结45-46
综述46-55
参考文献52-55
附录55-58
致谢58