试析耐药性乳酸菌耐药性筛选及其与拓扑异构酶gyrA基因突变相关性

论文导读：扩增结果DM21测序与标准菌株、质控菌株gyrA基因编码的氨基酸进行比对，结果显示5个氨基酸发生转变，说明菌体DNA旋转酶gyrA基因突变可能导致试验菌株对喹诺酮类药物产生耐药性。关键词：乳酸菌论文生物学特性论文16SrRNA鉴定论文耐药性论文gyrA论文本论文由www.7ctime.com,需要可从
摘要：本论文从内蒙古达茂旗牧区牛乳中分离的16株菌为探讨对象，通过生物学特性探讨，从及16SrRNA序列分析鉴定，确定16株试验菌株中14株为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、1株为乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）、1株为约氏乳杆菌（Lactobacillus johnsonii）。采取纸片扩散法对16株试验菌株进行耐药性测定，通过与CLSI协会药敏标准比对，得知16株试验菌株对环丙沙星和诺氟沙星耐药率达100%，对氧氟沙星和链霉素的耐药率为93.75%，对阿莫西林的耐药率为12.5%，对氨苄西林和红霉素为不耐药。通过对菌株拓扑异构酶Ⅱ(DNA旋转酶)gyrA基因进行PCR扩增，将扩增结果DM21测序与标准菌株、质控菌株gyrA基因编码的氨基酸进行比对，结果显示5个氨基酸发生转变，说明菌体DNA旋转酶gyrA基因突变可能导致试验菌株对喹诺酮类药物产生耐药性。关键词：乳酸菌论文生物学特性论文16SrRNA鉴定论文耐药性论文gyrA论文
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Abstract4-8
1 引言8-14

1.1 乳酸菌的概述8-10

1.1 乳酸菌的形态结构8

1.2 乳酸菌的生理生化特性8

1.3 乳酸菌的分类及鉴定技术8-9

1.4 乳酸菌的生态分布9-10

1.5 乳酸菌的益生意义10

1.6 乳酸菌的运用及制品10

1.2 乳酸菌的耐药性10-11

1.3 氟喹诺酮类抗菌药11

1.4 乳酸菌对喹诺酮类抗菌药的耐药机理11-13

1.4.1 拓扑异构酶基因突变11-12

1.4.2 主动外排体系12-13

1.4.3 质粒介导13

1.5 本探讨的目的作用13-14

2 材料与办法14-20

2.1 实验材料14-16

2.

1.1 试验菌株14

2.

1.2 标准菌株14

2.

1.3 质控菌株14

2.

1.4 试验试剂14-15

2.

1.5 PCR 引物15

2.

1.6 试验仪器设备15-16

2.2 试验办法16-20

2.1 试验菌株的活化、纯化和保藏16-17

2.2 试验菌株的形态及生物学特性17

2.3 试验菌株 16SrRNA 鉴定17-18

2.4 耐药菌株的筛查及敏感性试验18-19

2.5 耐药菌株Ⅱ型拓扑异构酶 gyrA 基因突变的测定19-20

3 结果与分析20-32

3.1 试验菌株形态及生物学特性20-22

3.

1.1 试验菌株的菌落形态、镜检及革兰氏染色20-21

3.

1.2 试验菌株的生物学特性21-22

3.2 试验菌株 16SrRNA 鉴定结果22-24
3.

2.1 试验菌株 16SrRNA 扩增条带22

3.

2.2 试验菌株 16SrRNA 同源性分析22-24

3.3 试验菌株的药敏结果24-28

3.1 试验菌株的抑菌圈直径24

3.2 7种抗微生物药药敏标准24-25

3.3 试验菌株的耐药性25-26

3.4 试验菌株对 7 种抗菌药的耐药率26

3.5 7种抗菌药对试验菌株的抑制程度26-28

3.4 试验菌株 DNA 提取28

3.5 试验菌株 gyrA 基因分析28-32

3.5.1 试验菌株 gyrA 基因的 PCR 扩增28-31

3.5.2 试验菌株 gyrA 基因 QRDR 的测序结果31

3.5.3 试验菌株 gyrA 基因编码的氨基酸序列分析31-32

4 讨论32-34

4.1 乳酸菌的生物学特性32

4.2 试验菌株的 16SrRNA 鉴定32-33

4.3 乳酸菌的耐药性33

4.4 gyrA 基因突变介导的耐药性33-34

5 结论34-35
致谢35-36
参考文献36-40
附录40-51
作者介绍51