简谈药线可转形穴位注射药线对脑缺血再灌注大鼠皮质区PCNA、Caspase-3影响

论文导读：
摘要：目的本项目从川芎嗪为模型药物，采取可生物降解的高分子材料，将川芎嗪制备成合适的可转形穴位注射药线，使该药线具有在室温下为液体状，在体内形成半固体凝胶状的特性。选取脑缺血再灌注大鼠，将大椎及双侧内关进行穴位埋可转形穴位注射药线的治疗，并与相同穴位埋川芎嗪胶原药线和川芎嗪药物羊肠线作对比。采取免疫组化的办法观察治疗后大鼠脑皮质区增殖细胞核抗原（PCNA）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的调节意义。办法本探讨参照前人实验探讨，采取正交设计法，将壳聚糖混合物、无水磷酸氢二钾和川芎嗪按一定比例混合制备成可转形穴位注射药线，并探讨该药线埋入家兔穴位后，在其体内的释放程度从及该药线对大鼠脑皮质区PCNA、Caspase-3的影响。⑴可转形穴位注射药线在体内释放度的测定：选用健康家兔，将川芎嗪药物羊肠线、川芎嗪胶原药线从及可转形药物羊肠线按一定剂量埋入家兔内关、大椎穴，用高效液相色谱法（HPLC），测定家兔不同时段的血药浓度，将三种药线进行对比，评估各组药线的体内释放性能。⑵可转形药线对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮质区PCNA和Caspase-3的影响的实验探讨：选用健康Sprague-Dawley（SD）大鼠40只，随机分为4组，每组10只大鼠，分别是模型组，可转形穴位注射药线组，川芎嗪药物羊肠线组和川芎嗪胶原药线组。采取改良线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型（MCAO），在大鼠大椎、双侧内关进行穴位埋药线处理。在最后观察日24h后采取心脏灌注技术断头取脑，固定于4%多聚甲醛溶液中6-8h,进行石蜡包埋，用免疫组化法测定大鼠脑皮质区PCNA、Caspase-3的表达，并采取HPIAS-1000计算机高清晰彩像分析仪对切片进行图像分析，所得数据进行统计学处理。结果1.可转形穴位注射药线在体内释放度的测定：高效液相色谱法（HPLC）法，测定家兔血药浓度药物羊肠线组在28h后达到最大值，随后逐渐下降；胶原药线组在24h后释放值达到高峰，随后逐渐下降；可转形药线组在22h后释放值达到最高值，随后逐渐下降，32h后仍有释放表达。2.免疫组化检测实验结果显示：模型组大鼠脑皮质区Caspase-3阳性细胞显著增加，有少量PCNA表达，可转形穴位注射药线组、川芎嗪药物羊肠线组、川芎嗪胶原药线组同时与模型组对比，对Caspase-3、PCNA表达的影响有明显性差别（P0.05）；其中，可转形穴位注射药线组降低Caspase-3、升高PCNA蛋白表达的效果显著优于后两组（P0.05）；后两组同时对比，无明显性差别（P＞0.05）。结论1.可转形穴位注射药线在体内释放在大鼠体内释放时间教缓慢，有较好的缓释效果。2.可转形穴位注射药线可上调PCNA，下调Caspase-3，以而减少脑缺血所造成的损伤。可转形穴位注射药线对PCNA、Caspase-3的影响显著优于川芎嗪药物羊肠线和川芎嗪胶原药线，这与可转形穴位注射药线的缓慢释放药物的特性密切相关。关键词：脑缺血再灌注论文可转形穴位注射药线论文大椎论文内关论文增殖细胞核抗原论文半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3论文
本论文由www.7ctime.com,需要可从关系人员哦。中文摘要5-7
Abstract7-10
缩略词中英文对照表10-11
前言11-14
实验探讨14-26
1 实验用品14-15

1.1 实验动物14

1.2 实验仪器及试剂14-15

2 实验办法15-17

2.1 药线的制备15-16

2.2 埋线工具的制作16-17

实验

一、可转形穴位注射药线中川芎嗪在体内释放度的测定17-19

1 动物实验17
2 高效液相色谱法测定血液中川芎嗪的浓度17-19

2.1 色谱条件17-18

2.2 血液样品的处理18

2.3 标准曲线的绘制18

2.4 测试每组血清血药浓度18-19

实验二 可转形穴位注射药线对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮质区PCNA 和 Caspase-3 表达的影响探讨19-26
1 准备工作19-20

1.1 实验用线栓的制备19

1.2 MCAO 动物模型的制备19-20

2 模型筛选标准(Zea Long 法)20
3 实验动物分组及处理办法20-21
4 免疫组化法检测大鼠脑皮质区 PCNA 和 Caspase-3 的表达21-23

4.1 标本采集与处理21-22

4.2 PCNA 或 Caspase-3 的免疫组化的实验步骤22

4.3 图像分析22-23

4.4 统计学分析23

5 实验结果及分析23-26

5.1 家兔血药浓度的测定23-24

5.2 脑缺血再灌注大鼠皮质区 PCNA 和 Caspase-3 的表达及可转形穴位注射药线对其的影响24-26
讨论26论文导读：血时间32-34结语34-35参考文献35-39附录1：综述39-49参考文献46-49附录2：图49-52一、可转形穴位注射药线和川芎嗪胶原药线的形态49-50二、各组PCNA的表达50-51

三、各组Caspase-3的表达51-52致谢52上一页12

-34
1 可转形穴位注射药线的探讨26-27
2 局灶性脑缺血模型的探讨27-28
3 川芎嗪对脑血管疾病的治疗意义的探讨28-29
4 选穴依据29-30
5 PCNA 和 Caspase-3 与脑缺血再灌注损伤30-32
6 关于测定体内的释放度时的采血时间32-34
结语34-35
参考文献35-39
附录 1：综述39-49
参考文献46-49
附录 2：图49-52

一、、可转形穴位注射药线和川芎嗪胶原药线的形态49-50

二、、各组 PCNA 的表达50-51

三、、各组 Caspase-3 的表达51-52

致谢52