探究蛋白乙醇—水相中酪蛋白水解物酶法修饰及一些性质变化

论文导读：
摘要：酪蛋白是生物活性肽的重要来源之一。本探讨采取碱性蛋白酶水解酪蛋白制备酪蛋白水解物，并在乙醇-水介质中对酪蛋白水解物进行类蛋白反应修饰，评估类蛋白反应修饰产物的ACE抑制活性、金属离子螯合能力及抑制碳酸钙沉淀能力；同时，对具有最高ACE抑制活性及最大类蛋白合成量的修饰产物进行溶剂分级，探讨分级处理对修饰产物ACE抑制活性的影响；最后，模拟体外消化，分析ACE抑制活性最高和类蛋白合成量最大的修饰产物极为分级产物的酶抗性。所得到的探讨结果如下：（1）酪蛋白水解物的制备条件为：水解时间6h时，水解物的ACE抑制活性最高，此时水解度为11.6%，相应的IC50=42.8μg/mL。（2）采取响应面分析法，优化得到碱性蛋白酶催化下乙醇-水介质中酪蛋白水解物类蛋白反应修饰的适宜条件为：反应时间固定为6h，乙醇浓度56.8%（v/v）、底物浓度56.8%（w/v）、酶添加量8.36kU/g蛋白质、反应温度37.5℃。如果选择木瓜蛋白酶作为类蛋白反应催化用酶，则固定反应时间6h、底物浓度50%（w/v），单因素试验优化得到最适条件为：乙醇浓度70%（v/v），酶添加量3kU/g蛋白质，反应温度40℃。（3）在优化条件下制备不同类蛋白反应程度的修饰产物，对其ACE抑制活性的测定可知，碱性蛋白酶修饰产物4（TCH4）与木瓜蛋白酶修饰产物1（MCH1）显示出最大的ACE抑制活性，分别为62.5%和64.5%；而碱性蛋白酶修饰产物8（TCH8）与木瓜蛋白酶修饰产物8（MCH8）则显示出最大的类蛋白合成程度，但活性较低，分别为35.6%和41.7%。ACE抑制动力学探讨表明酪蛋白水解物、TCH4、TCH8及TCH11均为ACE的竞争性抑制剂。（4）对酪蛋白水解物及碱性蛋白酶修饰产物的金属离子螯合能力测定结果可知，修饰产物的锌离子及钙离子螯合能力均低于酪蛋白水解物，亚铁离子螯合能力略高于水解物，表明乙醇-水相类蛋白反应不利于酪蛋白水解物金属离子螯合能力的提升。酪蛋白水解物及碱性蛋白酶修饰产物对ACE的抑制意义并非由其对锌离子的螯合引起，但抑制碳酸钙沉淀能力则可归于其对钙离子的螯合意义。（5）采取水及体积比为3:7、7:3的乙醇-水溶剂对TCH4和TCH8分级，发现分级处理对它们的ACE抑制活性有影响。分级溶剂中乙醇浓度的增多，使分级产物上清部分的ACE抑制活性增多，沉淀部分则相反。7:3（v/v）乙醇-水溶剂分级的上清部分的活性显著高于修饰产物，并且以TCH4得到的上清部分活性最高（69.5%）。即低极性有机溶剂（7:3，v/v）有利于以修饰产物中分离出具有较高ACE抑制活性的肽组分。（6）对修饰产物及分级产物的进一步水解可知，所得的64个消化产物中有62个的ACE抑制活性为45.1-74.8%，均高于酪蛋白水解物（44.4%），表明乙醇-水相介质中的类蛋白反应修饰可从提升酪蛋白水解物的酶抗性。关键词：酪蛋白水解物论文类蛋白反应论文ACE抑制活性论文金属离子螯合论文溶剂分级论文酶抗性论文
本论文由www.7ctime.com,需要可从关系人员哦。摘要8-9
Abstract9-11
1 引言11-21

1.1 酪蛋白介绍11-12

1.1 结构11

1.2 营养价值及运用11-12

1.2 血管紧张素转化酶抑制肽12-17

1.2.1 血管紧张素转化酶13-14

1.2.2 ACE 抑制肽的意义机理14

1.2.3 ACE 抑制肽的活性评估14-15

1.2.4 ACE 抑制肽的意义方式15-16

1.2.5 ACE 抑制肽的稳定性16

1.2.6 ACE 抑制肽的探讨发展16-17

1.3 肽金属螯合物17

1.4 钙吸收与抑制钙沉淀17-18

1.5 类蛋白反应18-19

1.5.1 机制及影响因素18

1.5.2 一般运用18-19

1.6 探讨目的及作用19-20

1.7 探讨的主要内容20

1.8 探讨的创新点20-21

2 材料与办法21-29

2.1 试验材料21-22

2.

1.1 原料与试剂21-22

2.

1.2 主要仪器设备22

2.2 探讨的技术路线22-23

2.3 实验办法23-29

2.3.1 蛋白酶活力的测定23-2论文导读：级产物的进一步水解27-282.3.8统计分析28-293结果与分析29-453.1蛋白酶活力293.2游离氨基含量的测定293.3酪蛋白水解物的制备293.4碱性蛋白酶催化下类蛋白反应修饰及产物性质分析29-413.4.1类蛋白反应条件优化29-323.4.2有机溶剂的添加对类蛋白反应的影响32-333.4.3ACE抑制活性分析33-353.4.4金属离子螯合能力分析
4

2.3.2 游离氨基含量及水解度的测定24

2.3.3 酪蛋白水解物的制备24

2.3.4 类蛋白反应条件的优化24-25

2.3.5 性质测定25-27

2.3.6 修饰产物的溶剂分级27

2.3.7 修饰产物及分级产物的进一步水解27-28

2.3.8 统计分析28-29

3 结果与分析29-45

3.1 蛋白酶活力29

3.2 游离氨基含量的测定29

3.3 酪蛋白水解物的制备29

3.4 碱性蛋白酶催化下类蛋白反应修饰及产物性质分析29-41

3.4.1 类蛋白反应条件优化29-32

3.4.2 有机溶剂的添加对类蛋白反应的影响32-33

3.4.3 ACE 抑制活性分析33-35

3.4.4 金属离子螯合能力分析35-36

3.4.5 抑制碳酸钙沉淀能力分析36-37

3.4.6 修饰产物的溶剂分级处理分析37-38

3.4.7 修饰产物及分级产物的酶抗性分析38-41

3.5 木瓜蛋白酶催化下类蛋白反应修饰及产物性质分析41-45

3.5.1 类蛋白反应条件优化41-43

3.5.2 ACE 抑制活性分析43

3.5.3 修饰产物的酶抗性分析43-45

4 讨论45-51

4.1 酪蛋白水解物的制备45

4.2 类蛋白反应与 ACE 抑制肽45-47

4.3 金属离子螯合与抑制钙沉淀47-48

4.4 溶剂分级处理对 ACE 抑制活性的影响48-49

4.5 ACE 抑制肽的酶抗性49-51

5 结论51-52
致谢52-53
参考文献53-61
攻读硕士期间发表的学术论文61