试述猪血猪血凝性脑脊髓炎病毒LAMP检测策略建立及其临床初步运用大专

论文导读：
摘要：猪血凝性脑脊髓炎(Porcine hemagglutinating encephalomyeptis)是常见于仔猪的一种具有高度接触性的、急性传染病。该疾病是由冠状病毒属成员，即血凝性脑脊髓炎病毒（Hemagglutinating encephalomyeptis virus,HEV）感染所引起。临床资料显示，该病的高发群体为1～3周龄的仔猪，主要体现为呕吐、衰竭从及显著的神经症状，该病引起的死亡率极高，可达到20～100%。由此，在该病的制约中，及时准确的诊断显得尤为重要。目前，针对该病已经建立了多种诊断办法：包括病毒的分离鉴定、巢式PCR、RT-PCR、荧光定量PCR、血凝/血凝抑制试验（HA/HI）、血清中和试验（VN）、酶联免疫吸附试验等等。这些办法虽在实际诊断中发挥巨大意义，但也有其问题之处，如有的操作繁杂，有的耗时费力。为了进一步完善该病的检测手段，本文进行了新型诊断技术的探讨。根据HEV较为保守的M基因序列，设计合成了两对LAMP引物，通过优化反应条件，建立了用于HEV检测的环介导等温扩增（LAMP）办法。对该办法的特异性及敏感性进行了试验评价。结果显示，该办法简便易行，于63℃水浴1h即可完成，且反应效果良好。与猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪瘟病毒（CV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）从及猪圆环病毒（PCV）均无交叉反应，其敏感性比传统PCR要高出10倍左右。此外，运用所建立的HEV新型快速LAMP检测办法，对采集的吉林省某猪场的15份疑似HEV感染病例样本进行初步检测。同时，用本实验室已经建立的荧光定量PCR检测办法作为对照，对该办法的临床检测效果进行评价。结果，LAMP检测的阳性率为47%（7/15）,荧光定量PCR检测办法的阳性率为47%(7/15)。两种办法的符合率为100%。这些探讨结果的获得将为临床上针对HEV的诊断提供重要的论述支持和技术帮助。关键词：猪血凝性脑脊髓炎病毒论文环介导等温扩增技术论文检测办法论文临床运用论文
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Abstract5-11
第一篇 文献综述11-30
第1章 猪血凝性脑脊髓炎的概述极为临床诊断探讨发展11-21

1.1 猪血凝性脑脊髓炎病毒12-13

1.2 流行病学13-14

1.3 临床症状14-16

1.4 致病机理16

1.5 检测办法16-21

第2章 环介导等温扩增技术(LAMP)21-30

2.1 LAMP 技术的原理21-22

2.2 LAMP 技术独特的引物设计22-23

2.3 LAMP 技术的反应历程23-26

2.4 环介导等温扩增技术的主要特点26-27

2.5 LAMP 的运用27-30

第二篇 探讨内容30-57
第一章 猪血凝性脑脊髓炎病毒 LAMP 检测办法的建立30-49

1.1 试验材料30-33

1.2 试验办法33-43

1.3 结果43-47

1.4 讨论47-48

1.5 小结48-49

第二章 猪血凝性脑脊髓炎病毒 LAMP 检测办法的初步运用49-57

2.1 试验材料49-52

2.2 对临床疑似 HEV 样品的 LAMP 检测52-54

2.3 结果54-55

2.4 讨论55-56

2.5 小结56-57

结论57-58
参考文献58-64
攻读硕士期间发表的学术论文64-65
导师及作者介绍65-66
致谢66-67