谈乳腺癌乳腺癌细胞外泌体形态及转录组学科研方法与

论文导读：癌细胞分泌的外泌体为探讨对象，首先进行乳腺癌细胞MDA-MB-231外泌体的提取和纯化，通过低真空原子力显微镜的观察、动态光散射的检测及外泌体特异性蛋白Flotilpn-1的表征，对乳腺癌细胞分泌的外泌体样品进行形态学和分子生物学的初步浅析，证明了它们的有着及来源。进而，通过基于高通量测序的RNA-Seq技术对乳腺癌细胞外泌体的转
摘要：近几年，随着社会压力的不断增加，癌症的发病率越来越高并逐渐成为人们关注的焦点。目前，除心血管疾病外，它已上升成为人类生命健康的第二大杀手。临床结果显示，对癌症的诊断治疗多是在病发晚期且死亡率较高，由此，能否对癌症进行早期诊断治疗已成为攻克这一难题的关键所在。肿瘤转移是导致病人死亡的最重要的理由，其主要通过血液循环系统（循环肿瘤细胞）来介导发生。近年来人们还发现，肿瘤细胞可介导另一种方式——外泌体，它包含有多种生物活性蛋白及核酸分子，可作为癌细胞间生物信息的承载单位，影响着肿瘤的生长、血管的生成、转移，同时也可作为一种与疾病相关的新型特有的生物标志物，在早期诊断中发挥作用。本论文以乳腺癌细胞分泌的外泌体为探讨对象，首先进行乳腺癌细胞MDA-MB-231外泌体的提取和纯化，通过低真空原子力显微镜的观察、动态光散射的检测及外泌体特异性蛋白Flotilpn-1的表征，对乳腺癌细胞分泌的外泌体样品进行形态学和分子生物学的初步浅析，证明了它们的有着及来源。进而，通过基于高通量测序的RNA-Seq技术对乳腺癌细胞外泌体的转录组进行探讨。本论文首次运用高通量测序技术，对乳腺癌外泌体的转录组进行了系统性地浅析，发现乳腺癌外泌体所涉及的基因主要参与细胞间通讯、细胞粘附、周期和代谢等历程，尤其是与整合素信号通路相关。本探讨提供了完整的乳腺癌外泌体中基因表达信息，为进一步揭示外泌体在乳腺癌转移中的机制奠定了扎实的基础。关键词：外泌体论文乳腺癌论文Flotilpn-1论文MIR21论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。摘要5-7
ABSTRACT7-12
第一章 绪论12-23

1.1 外泌体的组成探讨13-15

1.1 外泌体定义13-14

1.2 外泌体内含物浅析14-15

1.2 外泌体的生物学功能探讨进展15-17

1.3 外泌体的运用价值探讨17-23

1.3.1 外泌体在诊断方面的运用17-18

1.3.2 外泌体在治疗方面的运用18-23

第二章 外泌体提取策略的建立23-28

2.1 实验材料23-24

2.

1.1 细胞株23

2.

1.2 主要试剂23

2.

1.3 主要仪器及耗材23-24

2.2 实验策略24-25

2.1 乳腺癌细胞系 MDA-MB-231 传代培养24-25

2.2.

1.1 配制并过滤 DMEM 培养基24

2.2.

1.2 灭活血清24

2.2.

1.3 配制抗青-链霉素24

2.2.

1.4 配制 PBS 磷酸缓冲液24-25

2.2.

1.5 培养 MDA-MB-231 细胞25

2.2.2 外泌体的收集25

2.3 实验结果25-26

2.4 讨论26-27

2.5 本章小结27-28

第三章 外泌体相关检测技术的探讨28-51

3.1 实验材料28-30

3.

1.1 主要试剂28

3.

1.2 主要仪器及耗材28-29

3.

1.3 引物序列29-30

3.2 实验策略30-39
3.

2.1 原子力显微镜观察30

3.

2.2 动态光散射探讨30

3.

2.3 Zeta 电位检测30

3.

2.4 Western blot 检测30-34

3.

2.5 特异核酸浅析34-39

3.3 实验结果39-49

3.1 外泌体的原子力显微镜观察39-41

3.2 外泌体的动态光散射探讨41-42

3.3 外泌体的 Zeta 电位检测42

3.4 Flotilpn-1 蛋白的分子表型鉴定42-45

3.5 特异核酸 Mir21 的浅析45-49

3.4 讨论49-50

3.5 本章小结50-51

第四章 外泌体克隆文库建立及高通量测序浅析51-68

4.1 实验材料51

4.

1.1 主要试剂51

4.

1.2 主要仪器51

4.

1.3 引物与接头序列51

4.2 实验策略51-56

4.3 实验结果56-65

4.

3.1 克隆质检结果及其浅析56-57

4.

3.2 高通量测序结果及其浅析57-65

4.3.

2.1 外泌体总 RNA 的测序结果57

4.3.

2.2 外泌体中基因表达丰度及在染色体上的分布57-60

4.3.

2.3 外泌体中基因的功能富集浅析60-65

4.4 讨论65-67

4.5 本章小结67-68

第五章 总结与展望68-70
5论文导读：.1主要工作与革新点685.2后续探讨工作68-70参考文献70-75致谢75-77攻读硕士学位期间已发表或录用的论文77上一页12
.1 主要工作与革新点68

5.2 后续探讨工作68-70

参考文献70-75
致谢75-77
攻读硕士学位期间已发表或录用的论文77