探索内皮ZNF580在S1P诱导内皮细胞迁移和增殖中作用

论文导读：A.hy926siRNA-ZNF580⑤细胞迁移实验浅析ZNF580对内皮细胞迁移特性的影响。⑥MTT比色法浅析ZNF580对内皮细胞增殖活性的影响。⑦利用半定量RT-PCR、明胶酶谱策略检测EA.hy926、EA.hy926pEGFP-ZNF580和EA.hy926siRNA-ZNF580三种细胞基质金属蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)表达情况。⑧利用半定量RT-PCR、ELISA策
摘要：目的：探讨人C2H2型锌指蛋白新基因ZNF580在1-磷酸鞘氨醇(sphingosine1-phosphate, S1P)诱导的内皮细胞迁移和增殖中的作用,为阐明ZNF580基因的功能提供新的实验依据,为肿瘤血管发生的治疗提供新的可能靶点。策略：①RT-PCR技术检测S1P受体和ZNF580在EA.hy926内皮细胞的表达情况。②以不同浓度(0-10μM)SIP刺激EA.hy926内皮细胞不同时间(0-12h)后,利用半定量RT-PCR、Western blot策略检测S1P对ZNF580表达的影响。③运用p38mitogen-activated protein kinase(p38MAPK)信号通路特异性抑制剂SB203580预处理EA.hy926内皮细胞1h后,半定量RT-PCR和Western blot策略探讨S1P是否通过此信号通路影响ZNF580的表达。④利用pEGFP-ZNF580转染EA.hy926内皮细胞,获得瞬时过表达ZNF580的EA.hy926内皮细胞,即EA.hy926pEGFP-ZNF580;利用化学合成siRNA-ZNF580转染EA.hy926内皮细胞,获得瞬时低表达ZNF580的EA.hy926内皮细胞,即EA.hy926siRNA-ZNF580⑤细胞迁移实验浅析ZNF580对内皮细胞迁移特性的影响。⑥MTT比色法浅析ZNF580对内皮细胞增殖活性的影响。⑦利用半定量RT-PCR、明胶酶谱策略检测EA.hy926、EA.hy926pEGFP-ZNF580和EA.hy926siRNA-ZNF580三种细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)表达情况。⑧利用半定量RT-PCR、ELISA策略检测EA.hy926、EA.hy926pEGFP-ZNF580和EA.hy926siRNA-ZNF580三种细胞血管内皮生长因子(vascular endothepal growth factor, VEGF)表达情况。结果：EA.hy926内皮细胞表达ZNF580,同时表达S1P1(edg1)、S1P3(edg3)、 S1P5(edg8)三种EDG受体,上面陈述的基因的PCR特异性扩增产物分别为352bp、701bp、236bp,与预期结果一致；S1P刺激EA.hy926内皮细胞后,ZNF580mRNA和蛋白水平的表达均上调,且有剂量和时间效应。在剂量效应中,S1P浓度为0.1μM时, ZNF580表达开始增加,当S1P浓度为0.5μM, ZNF580的表达水平达到峰值。在时间效应中,当刺激时间为1h时,ZNF580表达开始增加,当刺激时间为4h时,ZNF580的表达水平达到峰值。与正常组比较结果均有统计学作用(P0.05); p38MAPK特异性信号通路抑制剂SB203580能够抑制S1P诱导的ZNF580的上调作用；ZNF580基因过表达(低表达)在推动(抑制)MMP-2和VEGF的表达的同时,内皮细胞迁移和增殖活性显著增强(减弱)。结论：本实验首次确定了人脐静脉内皮EA.hy926细胞表达ZNF580,并初步阐明了S1P-ZNF580信号在内皮细胞迁移和增殖历程中的作用,为深入探讨人C2H2型锌指蛋白新基因ZNF580的功能及其相关信号转导通路提供了实验基础和技术平台,为肿瘤血管发生的治疗提供了新的可能靶点。关键词：ZNF580论文迁移论文增殖论文S1P论文MAPK论文内皮细胞论文
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Abstract6-9
缩略语/符号说明9-11
前言11-15
探讨近况、成果11-13
探讨目的、策略13-15
对象和策略15-36
结果36-52
讨论52-57
结论57-58
参考文献58-63
发表论文和参加科研情况说明63-64
附录64-67
综述67-83
综述参考文献76-83
致谢83