谈活性氧醛糖还原酶在高尿酸诱导内皮细胞氧化损伤中作用

论文导读：论文本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。中文摘要5-7Abstract7-9实验探讨一高尿酸通过氧化应激损伤内皮细胞功能9-33前言9-12材料和策略12-18结果18-25讨论25-28小结28-29参考文献29-33实验探讨二醛糖还原酶在高尿酸诱导内皮细胞氧化应激损伤中
摘要：探讨背景：高尿酸血症是独立于高血压、糖尿病、肥胖等危险因素之外的引发心血管疾病和慢性肾脏病的危险因素。尿酸最初在体内是作为抗氧化剂出现的,为什么尿酸在高浓度下转变为促氧化物?目前认为高尿酸导致的内皮细胞的炎症反应是由氧化应激所导致的,但该历程是如何启动的?文章中我们将通过体内、体外实验寻找高尿酸刺激内皮细胞后可能的炎症反应途径。目的：探讨高浓度尿酸导致内皮细胞功能障碍的作用机制。策略：人脐静脉内皮细胞(HUVECs)用含10%FBS的1640培养液培养,尿酸刺激终浓度为600μmol/L,刺激24h。利用稳定同位素标记氨基酸细胞培养技术(SILAC)联用液相色谱-质谱(LC-MS)浅析对策筛选高尿酸条件下内皮细胞中差别表达的蛋白,其中醛糖还原酶(aldose reductase, AR)显著上调,随后用Western Blot等验证了该结果。HUVECs分对照组、正常浓度尿酸组(300μmol/L)和高尿酸(600μmol/L)组,刺激24h,激光共聚焦显微镜检测细胞内总ROS及其组分(O2-、H2O2、1O2、·OH)和ONOO的变化情况。酶标仪检测细胞培养上清液NO水平变化。后在上面陈述的实验基础上利用AR抑制剂,再次检测ROS及NO水平,并观察AR抑制剂与NADPH氧化酶可能相互联系。动物实验：野生型雄性C57BL/6小鼠和C57BL/6来源的雄性AR-/-小鼠分别制作高尿酸血症模型,野生型C57BL/6小鼠在造模历程中不同分组分别给予AR抑制剂Epalresta、O2-清除剂PEG-SOD、H2O2清除剂Catalase治疗,采血检测UV、NO、vWF和H2O2。AR-/-小鼠也采血检测UA、NO和vWF。结果：我们用高浓度尿酸培养内皮细胞,利用SILAC/LC-MS,共筛选出差别蛋白39个,其中AR表达显著上调,因AR与氧化应激的明确关联引起我们的注意,随后用Western Blot验证了该结果。我们用激光共聚焦显微镜检测不同浓度尿酸刺激后内皮细胞内ROS及其组分表达。发现生理浓度尿酸刺激内皮细胞后细胞内总ROS、O2-、1O2、·OH表达下调,H2O2表达上调；如果用高浓度尿酸刺激内皮细胞则细胞内总ROS、O2-、·OH、H2O2表达上调,1O2表达下调。提示高浓度尿酸保留部分抗氧化能力,但丧失降低O2·-、H2O2和-OH的能力。因O2·-可快速向H2O2转化,而·OH半衰期极短,考虑H2O2可能为高尿酸介导内皮细胞功能障碍主要ROS成分。细胞上清液NO水平表达下降为炎症反应有着重要指标。利用过氧化氢酶特异清除H2O2可减轻细胞炎症损伤。HUVECs予AR抑制剂预处理后加高尿酸刺激,与高尿酸组比较,细胞内总ROS降低,NO水平升高。AR抑制剂也抑制NADPH氧化酶激活,提示高尿酸可能首先激活AR途径,进而提升NADPH氧化酶来源ROS的产生,推动炎症反应的发生。为验证体外实验结果,我们利用野生型雄性C57BL/6小鼠制作高尿酸血症模型,发现单独高尿酸血症模型组血清H2O2升高,与体外实验结果一致。给予AR抑制剂治疗后,血清H2O2产生减少,内皮功能部分恢复。同时利用AR-/-小鼠制作高尿酸模型,发现AR缺失可减轻高尿酸导致的内皮细胞功能障碍。结论：高尿酸通过激活AR,增加H20O产生,进而导致内皮细胞功能障碍。但高浓度UA仍保留部分清除1O2等ROS成份的能力。关键词：尿酸论文醛糖还原酶论文氧化应激论文活性氧论文内皮功能障碍论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。中文摘要5-7
Abstract7-9
实验探讨

一、高尿酸通过氧化应激损伤内皮细胞功能9-33

前言9-12
材料和策略12-18
结果18-25
讨论25-28
小结28-29
参考文献29-33
实验探讨

二、醛糖还原酶在高尿酸诱导内皮细胞氧化应激损伤中的作用探讨33-64

前言33-35
材料和策略35-46
结果46-56
讨论56-59
小结59-60
参考文献60-64
文献综述 尿酸及其利与弊64-90
参考文献77-90
英文缩略词表90-91
攻读学位期间发表论文及参加科研情况91-92
致谢92-93