试论纤维化骨髓间充质干细胞对百草枯所致大鼠肺纤维化治疗学士

论文导读：比较B组显著减轻（P＜0.05）；A组与C组肺W/D比值无差别（P=0.315，P＞0.05）。第14、21、28天血清中表达转化生长因子β（TGF-β）的含量比较中，B组比C组显著增加（P0.05）；组间差别有显著性。第28天C组较B组肺HYP含量降低（P＜0.05），两组肺HYP含量较A组均升高（P＜0.05）结论：骨髓间充质干细胞移植对百草枯诱导大鼠肺纤维化模型的肺纤维化程度
摘要：目的：探讨SD大鼠骨髓间充质干细胞（Bone Marrow-derived MesenchymalSstem Cells，BMSCs）体外分离、纯化和培养策略，并鉴定其生物学特性，建立理想的大鼠BMSCs体外分离培养系统，为BMSCs实验探讨运用奠定基础。策略：取4-6周龄的清洁级雄性SD大鼠，无菌条件下分离大鼠下肢，PBS冲洗骨髓腔，收集骨髓。联合运用密度梯度离心法和全骨髓贴壁培养法分离、纯化和培养SD大鼠BMSCs。光镜下进行细胞形态学观察、采取MTT法绘制细胞生长曲线、运用流式细胞术测定细胞表面标记，并检测BMSCs向成骨、成脂肪细胞分化的潜能。结果：显微镜下体外分离培养的SD大鼠BMSCs呈梭形、成纤维细胞样形态，大小均一，漩涡状生长。细胞生长曲线呈“S”形。P3代SD大鼠BMSCs纯度达98%以上；细胞表面表达CD44、CD90等抗原分子，不表达CD34抗原。诱导P3代BMSCs可向成骨细胞及成脂肪细胞分化。结论：本实验建立起了一种理想的大鼠BMSCs体外分离培养系统。根据这种策略培养出的大鼠BMSCs纯度高、生物学特点稳定，可用于对BMSCs的实验探讨。目的：观察BMSCs在百草枯致大鼠肺纤维化的疗效，为临床百草枯中毒的患者治疗提供新的思路。策略：90只雌性SD大鼠随机分为3组（各30只），为A组（正常对照组）、B组（PQ组）、C组（PQ+BMSCs组）。后两组每只大鼠均腹腔注射百草枯溶液15mg/kg（无菌蒸馏水稀释至1%浓度）。C组于染毒后3h、第3、7天分别行尾静脉移植2×106个/只的雄性SD大鼠BMSC悬液1.5ml。观察大鼠存活率，并于染毒后14天、21天、28天每组随机选取6只大鼠处死，留取血液与肺组织标本。测定肺湿/干（W/D）比值，检测血清TGF-β、肺HYP的含量；观察肺组织病理变化；天狼星红染色肺组织进行肺纤维化程度的观察并定量浅析。结果：百草枯造模后，14天内B组大鼠死亡总共14只，C组死亡4只大鼠。B组与C组的存活率比较有显著差别（P＜0.05）。取B组肺组织行HE、MASON染色，病理符合肺纤维；在观察的第14、21和28天， C组比B组出现肺泡炎症、肺纤维化程度和肺脏结构破坏更轻。天狼星红染色B组Ⅰ型胶原较A组和C组显著增加，C组较A组增加。C组肺W/D比较B组显著减轻（P＜0.05）；A组与C组肺W/D比值无差别（P=0.315，P＞0.05）。第14、21、28天血清中表达转化生长因子β（TGF-β）的含量比较中，B组比C组显著增加（P0.05）；组间差别有显著性。第28天C组较B组肺HYP含量降低（P＜0.05），两组肺HYP含量较A组均升高（P＜0.05）结论：骨髓间充质干细胞移植对百草枯诱导大鼠肺纤维化模型的肺纤维化程度具有一定的抑制作用，可提升存活率，可能与其减少TGF-β的表达有关。关键词：骨髓间充质干细胞论文细胞培养论文诱导分化论文大鼠论文BMSCs论文肺纤维化论文百草枯论文TGF-β论文
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摘要5-7
Abstract7-9
前言9-13
第一部分：骨髓间充质干细胞分离、培养、纯化及其生物学特性的探讨13-24
材料与策略13-19
结果19-22
讨论22-24
第二部分：骨髓间充质干细胞对百草枯所致大鼠肺纤维化治疗的探讨24-39
材料与策略24-30
结果30-36
讨论36-39
结论与展望39-40
参考文献40-46
发表论文46-47
致谢47-48
文献综述48-56
参考文献53-56