试述抗体GD动物模型尝试性复制

论文导读：的多克隆抗体可显著增加FRTL-5细胞内第二信使cAMP的产生。综上可以看出由免疫鼠抗人TSH单克隆抗体得到的二抗确实模拟了最初的免疫原-hTSH的作用。该抗体不仅成功引起了免疫动物自身T3、T4水平的升高,而且还能促使正常家兔T3、T4水平的升高。进一步的细胞实验证实了该多克隆抗体具有类似于TSH样的活性。而该抗体与TSH之间也有
摘要：Gres' disease (GD)是一种自身免疫性疾病,其发病理由和致病机理较为复杂,至今为止国内外都没有得出一个明确的结论。本论文的目的旨在利用实验动物探究GD可能的发病理由及其内在的致病机理,以期为临床探讨提供一个可用实验动物模型的建立策略。通常在未经治疗的GD患者血清中有着着一种促甲状腺素受体抗体(TRAb),该抗体能与甲状腺细胞膜上的促甲状腺素受体(TSHR)结合并推动T3、T4的合成与分泌。独特型-抗独特型(id and anti-id)免疫网络学说认为TRAb可能相当于TSHAb1诱生的TSHAb2,因TSHAb2含有与TSH相似的结构成为其“内影像”,以而模拟TSH与TSHR结合促使甲状腺激素分泌增加。为验证该论述,本论文利用鼠抗人TSH单克隆抗体免疫家兔使其产生针对该抗体的多克隆抗体,也即TSHAb2c随后通过测定免疫后试验动物的T3、T4以及TRAb.甲状腺刺激性抗体(TSAb),以观察该二抗对实验动物本身的影响。随后进一步提取纯化该多克隆抗体,注射健康家兔后,观察不同时段家兔体内T3、T4水平的变化。利用FRTL-5细胞系生长对TSH的绝对依赖性,利用MTT(四唑盐)比色试验法测定了提取纯化后的多克隆抗体对其生长的维持作用,即该多克隆抗体的类TSH样作用。为进一步观察该多克隆抗体与TSHR结合后的信号传递途径,测定了加入多克隆抗体后FRTL-5细胞中第二信使cAMP的产生情况。为验证该二抗是否能与TSHR结合,利用125I标记的人TSH (125I-hTSH)测定了该多克隆抗体与TSH之间竞争结合TSHR的能力。结果显示经过多次免疫加强后实验动物均能产生针对鼠抗人TSH单克隆抗体的多克隆抗体,伴随抗体效价的不断增高,实验动物T3、T4水平均有不同程度升高,两者呈现一致走势。在经过4-5次加强免疫后所有实验动物的TRAb和TSAb测定均呈阳性,而且TRAb和TSAb的升高走势同实验动物抗体的产生走势相一致。该多克隆抗体同125I-hTSH竞争性结合实验表明,在一定范围内两者间有着着同TSHR竞争性结合的联系。纯化后的多克隆抗体静脉注射正常家兔后可促使其T3,T4升高。MTT比色试验法测定的结果则显示出该多克隆抗体具有类似于TSH样的生物学活性,对于去除了TSH后其它组分不变的培养基中的FRTL-5细胞仍能维持其正常贴壁及生长。cAMP的测定则显示出同加入了hTSH的正常对照组相比,单独加入纯化后的多克隆抗体可显著增加FRTL-5细胞内第二信使cAMP的产生。综上可以看出由免疫鼠抗人TSH单克隆抗体得到的二抗确实模拟了最初的免疫原-hTSH的作用。该抗体不仅成功引起了免疫动物自身T3、T4水平的升高,而且还能促使正常家兔T3、T4水平的升高。进一步的细胞实验证实了该多克隆抗体具有类似于TSH样的活性。而该抗体与TSH之间也有着着同TSHR的竞争性结合。该实验动物模型在部分特点上吻合了GD病人的临床体现,为进一步探讨GD的发病理由和致病机理提供了重要的帮助。关键词：Gres’病论文促甲状腺素受体抗体论文甲状腺刺激性抗体论文FRTL-5细胞论文
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Abstract6-9
前言9-14
探讨近况、成果9-12
探讨目的、策略12-14
1 对象和策略14-24
2 结果24-38
3 讨论38-44
结论44-45
参考文献45-50
发表论文和参加科研情况说明50-51
附录51-54
综述54-64
综述参考文献62-64
致谢64