浅论线虫大肠杆菌内源性非编码RNADsrA对秀丽线虫基因调控作用怎样

论文导读：
摘要：目的：通过观察表达DsrA的大肠杆菌对秀丽线虫寿命的影响，来探讨大肠杆菌内源性非编码RNA对秀丽线虫基因的调控作用，进一步探讨非编码RNA的调控途径以及其在物种之间的作用。策略：用野生型大肠杆菌K12和DsrA突变的大肠杆菌（NM6003或DDS719）分别培养秀丽线虫，通过寿命实验观察11种秀丽线虫（N2，dcr-1，rde-1，rde-2，rde-4，alg-1，alg-2，rrf-3，eri-3，tm3026，tm2908）的寿命。利用半定量逆转录PCR（Polymerase Chain Reaction）和实时定量PCR观察DsrARNA对秀丽线虫mRNA水平的影响，进一步观察RNA干扰（RNAinterference，RNAi）相关基因对DsrARNA这种调控作用的影响。给予转基因秀丽线虫注射DsrARNA后利用共聚焦显微镜观察F42G9.6::GFP的荧光表达变化。还通过秀丽线虫与大肠杆菌相互作用的长期实验探究DsrA在大肠杆菌和秀丽线虫之间的作用。结果：1.以DsrA缺失突变的大肠杆菌（NM6003或DDS719）为食的秀丽线虫N2寿命长于用野生型大肠杆菌K12喂食者（P＜0.01）。2. F42G9.6突变的秀丽线虫（tm2908）在两种不同的食物野生型大肠杆菌K12和DsrA缺失突变的大肠杆菌上生长时，秀丽线虫的寿命无差别；在同样的大肠杆菌K12上的存活时间，秀丽线虫tm2908短于秀丽线虫N2（P＜0.05）。3.用大肠杆菌K12和DsrA突变的大肠杆菌分别培养秀丽线虫N2，逆转录PCR和实时定量PCR结果均显示大肠杆菌K12培养的秀丽线虫F42G9.6mRNA水平比DsrA突变的大肠杆菌喂食的秀丽线虫mRNA水平低（P＜0.01）。4.用DsrA RNA注射转基因秀丽线虫Pdpy-30::F42G9.6::gfp，共聚焦显微成像显示F42G9.6::GFP的荧光强度变弱，荧光强度定量浅析结果显示荧光强度相对降低（P＜0.05）；而注射转基因秀丽线虫PF42G9.6::gfp荧光强度未见显著变化。5. RNAi相关基因突变的秀丽线虫寿命实验显示，大肠杆菌K12和NM6003对突变线虫rde-4寿命影响差别不如二者对野生型秀丽线虫N2差别显著（P＜0.05），其它七种突变线虫（dcr-1，rde-1，rde-2，alg-1，alg-2，rrf-3，eri-3）在两种细菌之间的寿命差别显著（P＜0.01），其中rde-2突变的线虫在以上两种细菌上的存活时间都较秀丽线虫N2长。6.分别用大肠杆菌K12或DsrA突变的大肠杆菌NM6003培养秀丽线虫rde-4和rde-2，实时定量PCR结果显示：与秀丽线虫N2相比，细菌NM6003喂食的突变线虫rde-4的F42G9.6mRNA水平只有很少的升高（P＜0.05），而另一种秀丽线虫rde-2则有显著的升高（P＜0.01）。7.秀丽线虫与大肠杆菌相互作用的长期实验结果：2周后用细菌NM6003培养的秀丽线虫总数比细菌K12培养的线虫数目多（P＜0.05）；培养线虫的平板上残余的细菌K12与NM6003之间的比值较没有线虫的对照平板上细菌比值增加（P＜0.05）。结论：1.表达DsrA RNA的大肠杆菌可以缩短秀丽线虫的寿命。2.大肠杆菌表达的非编码RNA DsrA降低了秀丽线虫的F42G9.6mRNA的表达水平。3.大肠杆菌表达的DsrA抑制秀丽线虫基因F42G9.6的表达可能并不是通过喂食RNA干扰的途径实现的。4. DsrA对大肠杆菌具有保护作用。关键词：秀丽线虫论文大肠杆菌论文非编码论文RNA论文RNA干扰论文
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ABSTRACT7-9
前言9-11
材料与策略11-23
结果23-29
讨论29-33
结论33-34
参考文献34-36
综述36-45
参考文献41-45
致谢45-46