对于腺苷腺苷A2A受体调控肾间质纤维化机制

论文导读：
摘要：探讨背景各种形式的终末期肾病，无关他们的病因是什么，进行性的肾间质纤维化和肾小管萎缩是其共同的病理特点。肾间质纤维化由炎性因素促发，继之出现肾小管上皮细胞向间充质细胞转化。早期的抗炎治疗对策对于预防肾间质纤维化的进程及其重要。然而目前还没有有效的治疗对策可以采取，由此，寻找新的治疗靶点及其紧迫。持续损伤后的肾脏炎症，例如IgA肾病和狼疮性肾炎，作为启动因素，建立了纤维化的舞台，促发了组织纤维化的发生。在这个病理历程中，炎性细胞，如单核巨噬细胞和淋巴细胞发挥了重要作用。肾间质纤维化特点就是肌成纤维细胞的激活和基质蛋白的沉积，主要包括I型胶原和III型胶原。在肾间质纤维化的病程中，通过EMT产生了大量的表达α-A肌成纤维细胞，其是基质蛋白的主要来源。单侧输尿管梗阻(UUO)模型一直被用来阐明肾间质纤维化的发生机制。单核巨噬细胞和淋巴细胞的浸润及淋巴细胞的功能失常在UUO诱导的肾间质纤维化的模型中起重要的致病作用。在这个模型中，细胞水平上，肾小管扩张导致肾小管上皮细胞失去上皮细胞的特点，并获得间充质细胞性状，如α-A的表达和肌动蛋白的重组。由此，肾小管上皮细胞通过EMT历程成为肾肌成纤维细胞的主要来源。在分子水平上，TGF-β1通过激活其下游的Rho/ROCK信号传导通路在EMT中起着关键的作用。最近，腺苷A_(2A)的受体(A_(2A)R)作为一种新的炎症调节因子调控炎症历程和组织修复。药理学探讨表明，A_(2A)R激动剂CGS21680和ATL193，可以有效地抑制炎症，激活A_(2A)R导致肾小球肾炎和肾脏损伤的减轻。此外，最近的探讨发现，在肝星状细胞，激活A_(2A)R可以抑制Rho/ROCK1。以上所有表明，调控A_(2A)R对炎症、EMT事件起着重要的调节作用。由此，我们推测，激活A_(2A)R可以抑制炎症细胞浸润，EMT事件和促纤维化因子，以而防止随之而来的肾间质纤维化。相反，A_(2A)R失活可能导致肾间质纤维化恶化。利用UUO引起的肾间质纤维化实验小鼠模型，我们以多方面评估了A_(2A)R在肾间质纤维化中的调节作用，包括间质淋巴细胞浸润，细胞EMT的生物标志物，促纤维化*本课题为国家自然科学基金资助项目. No30871170因子TGF-β1的表达及其下游Rho/ROCK1途径，以及由此产生的细胞外基质的积累。探讨目的明确腺苷A_(2A)R对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化表型的影响。探讨腺苷A_(2A)R影响肾间质纤维化的分子机制。策略建立C57背景小鼠肾间质纤维化动态模型，采取HE染色、Masson染色、免疫组化对UUO术后3天、7天、14天三个时间结点进行病理学检测及纤维化程度进行评估，计算机辅助图像浅析用于评估肾间质纤维化情况及炎性细胞浸润情况。药理学干预实验，探讨腺苷A_(2A)R对不同处理组表型的影响，采取敲除腺苷A_(2A)R及CGS21680激活腺苷A_(2A)R，对三个时间结点的不同处理组，包括假手术对照组、野生型+梗阻组、A_(2A)R激活+梗阻组、A_(2A)R敲除+梗阻组表型进行浅析，明确A_(2A)R对肾间质纤维化表型的影响。进一步明确腺苷A_(2A)R影响肾间质纤维化的分子机制，利用Western-blot、免疫组化对影响肾间质纤维化的关键环节，肾小管上皮细胞向间充质细胞转化(EMT)进行检测。动态监测肾小管上皮细胞标志E-cadherin及肌成纤维细胞的表面标志α-A的变化。免疫组化明确EMT启动因素炎症细胞浸润的种类，image pro plus计算机辅助图像定量浅析，浅析A_(2A)R对不同组别细胞浸润的影响。利用RT-qPCR检测腺苷A_(2A)R对致纤维化因子TGF-β1和RHO/ROCK1信号途径的影响。结果激活腺苷A_(2A)R减轻了细胞外基质胶原的沉积。激活腺苷A_(2A)R抑制了EMT的进程。激活腺苷A_(2A)R减少了促纤维化因子的表达。腺苷A_(2A)R介导的肾间质纤维化保护作用源于激活腺苷A_(2A)R抑制了T淋巴细胞的浸润。与之相反的是，A_(2A)R失活将对以上表型，发挥完全相反的作用。结论本探讨首次在小鼠UUO模型中证实了激活A_(2A)R阻止肾间质纤维化的保护作用，靶向调控A_(2A)R是防治肾间质纤维化的又一个新的治疗对策。论文导读：对输尿管梗阻小鼠肾间质纤维化表型的影响30-413.1材料与策略30-343.2结果34-363.3讨论36-373.4参考文献37-41第四章腺苷A2A受体调控肾间质纤维化的机制探讨41-654.1材料和策略42-494.2结果49-594.3讨论59-614.4参考文献61-65全文总结65本探讨的革新之处65-66文献综述一66-71参考文献69-71文献综述二71-102参考文献
关键词：腺苷A2A受体论文敲除论文肾间质纤维化论文输尿管梗阻论文炎症论文
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Abstract8-11
摘要11-13
第一章 前言13-17
参考文献14-17
第二章 建立小鼠单侧输尿管梗阻致肾间质纤维化模型17-30

2.1 材料与策略17-21

2.2 实验结果21-24

2.3 讨论24-26

2.4 参考文献26-30

第三章 初步探讨敲除腺苷 A2A 受体对输尿管梗阻小鼠肾间质纤维化表型的影响30-41

3.1 材料与策略30-34

3.2 结果34-36

3.3 讨论36-37

3.4 参考文献37-41

第四章 腺苷 A2A 受体调控肾间质纤维化的机制探讨41-65

4.1 材料和策略42-49

4.2 结果49-59

4.3 讨论59-61

4.4 参考文献61-65

全文总结65
本探讨的革新之处65-66
文献综述一66-71
参考文献69-71
文献综述二71-102
参考文献86-102
攻读博士学位期间以第一作者发表的文章102-103
致谢103-104