菜心（Brassica parachinensis Bailey）乙醇酸氧化酶与富含苯丙氨酸蛋白关系探讨

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摘要：乙醇酸氧化酶(EC 1．1．3．15，GO)是植物光呼吸的关键酶，由一种分子量(Mr)为40kD的亚基构成财务管理论文。前人对GO研究发现的GO单一分子结构与多个等电点(pI)之间的矛盾，本实验组在前期工作中已初步证实GO可以与一种富含苯丙氨酸的蛋白形成GO复合蛋白。在此基础上以免疫杂交为主要手段，对GO复合蛋白的组成、GO与富含苯丙氨酸蛋白的关系、富含苯丙氨酸蛋白的性质及其对GO电泳的影响了研究，主要结果如下：10％醋酸沉淀、硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-50分子筛柱层析、DEAE-cellulose-52离子交换柱层析，从菜心(Brassica parachinensis Bailey)绿叶中具有GO活性、pI＞8.3的GO复合蛋白。该GO复合蛋白在SDS-PAGE中呈Mr为40kD的单带。经醋酸纤维素薄膜电泳分析，GO复合蛋白中含有在SDS变性下向负极泳动的蛋白成分大学生论文。氨基酸组成测定的结果，向负极泳动的蛋白富含苯丙氨酸，其含量达12.96％毕业论文题目。GO复合蛋白经SDS变性后，Sephadex G-100凝胶过滤两种蛋白组分：GC-Ⅰ和GC-Ⅱ毕业论文提纲格式。凝胶过滤曲线GC-Ⅰ的Mr约为67kD；GC-Ⅱ的Mr介于14kD和67kD之间毕业论文致谢信。而GC-Ⅰ经SDS-PAGE后出现Mr分别为40kD和14kD的两条带，或只出现Mr为40kD的一条带；GC-Ⅱ在SDS-PAGE中则出现Mr为14kD的一条带，未出现任何条带论文查重站。该结果Mr为14kD的蛋白与GO有密切联系普通论文格式范文。用GO 40kD亚基抗体和GO复合蛋白抗体对GO复合蛋白作斑点杂交和SDS-PAGE Western-blot分析，发现GO 40kD亚基抗体可以识别非SDS变性的GO复合蛋白，而GO复合蛋白抗体对SDS变性下GO的40kD亚基识别能力很弱论文结论范文。据此推测：富含苯丙氨酸的蛋白主要位于GO复合蛋白的外部，而GO主要位于内部；富含苯丙氨酸的蛋白不完全包被GO，其掩盖了GO的抗原决定簇哲学论文。用GO复合蛋白抗体对菜心绿叶粗蛋白作SDS-PAGE Western-blot分析，杂交主带为54kD和14kD，粗蛋白中54kD和14kD的蛋白与GO复合蛋白有免疫源性。从粗蛋白中回收上述54kD和14kD的蛋白，用GO复合蛋白抗体SDS-PAGE Western-blot分析，膜上出现Mr从30kD～97kD的一系列阶梯状杂交条带，条带密集处位于97kD和54kD附近免费论文查重。该结果GO复合蛋白与SDS的比例是可变的，在SDS-PAGE中呈现出多种迁移率。制备菜心绿叶粗蛋白中14kD蛋白的抗体，用该抗体对GO复合蛋白斑点杂交和SDS-PAGE Western-blot分析，发现14kD蛋白抗体可以识别非SDS变性的GO复合蛋白，但不能识别SDS变性下GO的40kD亚基，Mr为14kD的蛋白可能是GO复合蛋白中富含苯丙氨酸的蛋白。用GO 40kD亚基抗体、GO复合蛋白抗体、14kD蛋白抗体对GO复合蛋白SDS-醋酸纤维素薄膜免疫杂交分析，发现GO复合蛋白经SDS变性处理后，其中GO同时向正极和负极泳动，而富含苯丙氨酸的蛋白主要向负极泳动。关键词：菜心论文乙醇酸氧化酶论文富含苯丙氨酸的蛋白论文14kD蛋白论文免疫杂交论文
摘要5-7
Abstract7-9
缩写词9-10
目录10-13
1 前言13-25

1.1 GO的分布13-14

1.1 GO在高等植物中的分布13-14

1.2 GO在低等植物中的分布14

1.3 GO在动物中的分布14

1.2 GO基因的克隆及其表达调控14-16

1.2.1 GO基因的克隆14-15

1.2.2 GO基因的异源表达15

1.2.3 GO基因表达调控15-16

1.3 GO翻译后的转运与组装16-17

1.3.1 GO翻译后的转运16-17

1.3.2 GO翻译后的组装17

1.4 GO的分子结构17-19

1.4.1 GO的一级结构17

1.4.2 GO的高级结构17-19

1.4.3 GO活性中心的结构19

1.5 GO分子结构与pI的矛盾及理论的19-21

1.5.1 GO分子结构与pI的矛盾19-20

1.5.2 GO同工酶理论的及其疑点20-21

1.6 GO与其他蛋白关系的研究21-23

1.6.1 GO与富含苯丙氨酸的蛋白紧密21-23

1.6.2 与GO的富含苯丙氨酸的蛋白在SDS变性下向负极泳动的现象23

1.7 本论文研究目的23-25

2 与方法25-32

2.1 实验25

2.2 实验试剂25

2.3 主要仪器25-26

2.4 实验方法26-32

2.4.1 蛋白含量测定26

2.4.2 层析柱的装柱和再生26

2.4.3 4%～20% SDS-PAGE26-27

2.4.4 SDS-醋酸纤维素薄膜电泳27

2.4.5 GO复合蛋白的提取27-28

2.4.6 GO复合蛋白中GO活性的测定28-29

2.4.7 GO 40kD亚基的制备29

2.4.8 GO复合蛋白在SDS-PAGE中向负极泳动的蛋白的制备29

2.4.9 粗蛋白中54kD蛋白和14kD蛋白的制备29

2.4.10 蛋白抗体制备29-30

2.4.11 SDS-PAGE Western blot30

2.4.12 醋酸薄膜免疫杂交30

2.4.13 斑点杂交30-31

2.4.14 GO复合蛋白SDS-Sephadex G-100凝胶过滤31

2.4.15 蛋白氨基酸组成测定31-32

3 结果与分析32-51

3.1 蛋白质含量标准曲线测定32

3.2 GO复合蛋白的提取32-33

3.3 GO复合蛋白特性分析33-40

3.1 GO复合蛋白蛋白含量测定及GO活性检测33-34

3.2 GO复合蛋白SDS-PAGE分析34-36

3.3 GO复合蛋白SDS-醋酸纤维素薄膜电泳分析36-37

3.3.4 GO复合蛋白在SDS-PAGE中向负极泳动的蛋白的及其氨基酸组成分析37-38论文片段—PAGEWestern-blot分析46-473.4.514kD蛋白抗体制备及其免疫杂交分析47-493.4.6GO复合蛋白SDS变性后醋酸纤维素薄膜免疫杂交分析49-514讨论与51-574.1讨论51-564.1.1GO复合蛋白是由GO和富含苯丙氨酸的蛋白构成51-524.1.2GO复合蛋白中GO与富含苯丙氨酸蛋白的空间位置关系524.1.3富含苯丙氨酸的蛋白可能是Mr为14kD的蛋白菜心论文,乙醇酸氧化酶论文,富含苯丙氨酸的蛋白论文,14kD蛋白论文,免疫杂交论文,

3.5 GO复合蛋白SDS变性后Sephadex C-100凝胶过滤分析38-40

3.4 GO复合蛋白中GO与富含苯丙氨酸的蛋白的关系分析40-51

3.4.1 GO 40RD亚基抗体对GO复合蛋白作斑点杂交以及SDS-PAGE Western-blot分析40-42
3.4.2 GO复合蛋白抗体对GO复合蛋白作斑点杂交以及SDS-PAGE Western-blot分析42-45
3.4.3 GO复合蛋白抗体对菜心绿叶粗蛋白作SDS-PAGE Western-blot分析45-46
3.4.4 GO复合蛋白抗体对菜心绿叶粗蛋白中54kD蛋白和14kD蛋白作SDS-PAGE Western-blot分析46-47

3.4.5 14kD蛋白抗体制备及其免疫杂交分析47-49

3.4.6 GO复合蛋白SDS变性后醋酸纤维素薄膜免疫杂交分析49-51

4 讨论与51-57

4.1 讨论51-56

4.

1.1 GO复合蛋白是由GO和富含苯丙氨酸的蛋白构成51-52

4.

1.2 GO复合蛋白中GO与富含苯丙氨酸蛋白的空间位置关系52

4.

1.3 富含苯丙氨酸的蛋白可能是Mr为14kD的蛋白52-53

4.

1.4 富含苯丙氨酸的蛋白引起GO复合蛋白与SDS能力的变化53-54

4.

1.5 GO复合蛋白向负极泳动的组分鉴定及其机理分析54-55

4.

1.6 富含苯丙氨酸的蛋白存在的功能和55-56

4.2 56-57
参考文献57-65
附录65-66
致谢66-67