EDFs技术探索与甘蓝S基因定位探讨

论文片段—伸长的DNA纤维论文,DNA纤维制备技术探索论文,S位点论文,基因定位论文,荧光原位杂交论文,
摘要：当个S位点基因发现之后,对于它在植物中自交不亲和信号转导途径中的研究就热点。现在的研究已经,控制自交不亲和性的S-locus的三种基因为SLG、SCR/SP11及SRK,在芸苔属植物传代中紧密连锁遗传本科论文。作为一个芸苔属物种,甘蓝具备它们所共有的特征:染色体过于短小包装致密毕业论文免费下载。,单拷贝低拷贝的杂交定位反应在甘蓝细胞内,S-locus在甘蓝基因组中的具体位置的研究却定论。荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)的建立,使得S-locus在染色体上的定位可能本科毕业论文。S-locus在甘蓝基因组中可能以单拷贝形式存在,这对于甘蓝染色体短小的特征而言,确立单个拷贝位点的准确位置有的难度法学论文。于是选择EDF-FISH(extended DNA fiber FISH),将染色体伸展开,然后在伸长的DNA纤维上原位杂交确定S-locus的位置。,传统上提取间期细胞核制备EDFs的方法在以甘蓝为的实验中并不是非常。论文主要的内容是:以芸薹属植物甘蓝为代表的小型染色体植物物种,尝试并比较多种实验方法和技术来降低DNA分子的包装,增加其直线上的距离来制备EDFs,同时探索性的创建了一种简便易行的EDF制备方法,进而以甘蓝S基因座的两种基因为探针在甘蓝粗线期染色体和EDFs荧光原位杂交,杂交的结果对新建立的EDFs制备技术的可行性以及高效性检验,进而甘蓝的S位点的物理图谱,并深入的分析S位点在甘蓝单倍体基因组中的拷贝数硕士论文答辩技巧。本研究以西南农业大学繁育的典型性自交不亲和的结球甘蓝2003al及羽衣甘蓝K14、K37和K39为,利用间期细胞核染色质梳理伸长处理和中期染色体拉伸制备制备EDFs,并与新创建的EDFs制备技术的伸长效果相比较,导出了制备DNA纤维最佳效果的伸长技术本科毕业论文评语。为验证制备的EDFs适合于运用原位杂交技术基因定位进而构建详尽的遗传图谱,利用SRK和SCR/SP11两种探针了定性杂交;实验结果也为甘蓝单倍体基因组中S基因的单拷贝性了证实;将EDF-FISH杂交结果与经过裂解的处理粗线期细胞内原位杂交图谱比较分析。简要的实验操作及其实验结果如下:关键词：伸长的DNA纤维论文DNA纤维制备技术探索论文S位点论文基因定位论文荧光原位杂交论文
摘要7-9
ABSTRACT9-12
第1章 文献综述12-26

1.芸薹属植物自交不亲和性的研究进展12-14

1.1 芸薹属植物自交不亲和基因12-14

1.2 SLG、SRK和SCR基因之间的物理距离14

2.原位杂交组织化学技术的起源及发展14-26

2.1 染色体制片技术和探针制备技术的进展15-20

2.

1.1 染色体制片技术和探针制备技术的发展16

2.

1.2 探针制备技术的进展16-20

2.2.EDF制备技术的改进与Fiber-FISH的起源与发展20-23

2.1 玻片的处理20-21

2.2 消化液的功用21

2.3 制备EDF的选材21-22

2.4 DNA纤维的制备22-23

2.3 原位杂交技术在植物研究中的应用23-26

2.3.1 应用于中期及间期细胞遗传学分析23

2.3.2 染色体结构变异鉴定23-24

2.3.3 检测基因扩增和缺失24

2.3.4 基因特异性DNA序列的定位24-25

2.3.5 染色体RNA和基因组进化的研究25-26

第2章 引言26-30
第3章 与方法30-44

(一) extended DNA fibers(EDFs)的制备30-36

1.实验30-31

1.1 植物30

1.2 工具酶和主要的分子细胞遗传学试剂30

1.3 常用溶液的配置30-31

2.方法31-36

2.1 载玻片处理31

2.2 用于EDF制备的的选择31-32

2.1 甘蓝游离态中期染色体的制备31

2.2 甘蓝间期细胞核的31-32

2.3 前期染色体的制备32

2.3 伸长夜最佳成分的选择32-34

2.3.1 蛋白酶K缓冲液最佳成分及其浓度的选择32-33

2.3.2 酶液最适浓度的确定33-34

2.4 制备EDF程序34-36

2.4.1 以中期染色体为制备EDF34-35

2.4.2 以间期染色质制取EDF35

2.4.2 以前期染色体制取EDF35-36

(二) 荧光原位杂交36-44

1.实验和主要药品36-37

1.1 36

1.2 主要的分子生物学试剂及分子细胞遗传学试剂36

1.3 常用溶液的配置36-37

2.方法37-44

2.1 探针的制备37-40

2.

1.1 甘蓝基因组DNA的提取(CTAB法提取DNA)37-38

2.

1.2 探针的合成与标记38-40

2.2 粗线期染色体的荧光原位杂交40-42

2.1 染色体制片40

2.2 制片的预处理40-41

2.3 杂交41-42

2.3 EDF-FISH42-44

第4章 结果与分析44-60

1.植物中EDF制备技术的探索44-48

1.1 提高EDF前体粘附率的探索44-45

1.2 EDF前体制备的方法改进效果45-46

1.2.1 游离态中期染色体的制取效果45-46

1.2.2 间期细胞质的提取效果46

1.2.3 分裂前期细胞染色体的制取效果46

1.3 伸长液的最佳成分的选择46-48

1.3.1 蛋白酶K缓冲液的最佳成分及其浓度的选择46-47

1.3.2 伸长液中酶浓度的选择47-48

2.EDF的制备效果48-50

2.1 利用中期制备的EDF48

2.2 利用间期制备的EDF48

2.3 前期制备的EDF48-49

2.4 小结49-50

3.FISH的结果与分析50-52

3.1 探针的50-51

3.

1.1 甘蓝基因组DNA的提取50

3.

1.2 探针的标记50-51

3.2 甘蓝S-locus的定位分析51-52
3.

2.1 粗线期染色体中的荧光原位杂交51-52

3.

2.2 染色体纤维上的原位杂交52

4.论文所需的主要荧论文片段—ISH的优势63-642.4甘蓝染色体组与甘蓝型油菜中甘蓝组的异同点的初步探讨642.5提高杂交信号检测效率的探索64-66第6章66-67参考文献67-73致谢73-74硕士期间发表论文及参与课题情况74上一页12伸长的DNA纤维论文,DNA纤维制备技术探索论文,S位点论文,基因定位论文,荧光原位杂交论文,
光图片52-60
第5章 讨论60-66

1.EDFs制备方法的探讨60-62

1.1 制片技术的选择60

1.2 伸长液与EDFs的制备效果的关系60-61

1.3 最佳实验的选择及EDFs空间分辨率的浅析61-62

2.S基因的定位研究62-66

2.1 硫酸葡聚糖和甲酰胺的用量探索63

2.2 DAPI的功用探讨63

2.3 甘蓝S基因的定位与EDF-FISH的优势63-64

2.4 甘蓝染色体组与甘蓝型油菜中甘蓝组的异同点的初步探讨64

2.5 提高杂交信号检测效率的探索64-66

第6章 66-67
参考文献67-73
致谢73-74
硕士期间发表论文及参与课题情况74