简述空肠空肠弯曲杆菌分离鉴定及其生物膜形成结论

论文导读：.1.2主要试剂20-212.1.3主要仪器212.2实验策略21-272.2.1样品的采集和保存212.2.2细菌的分离和纯化21-222.2.3细菌常规生化检测22-232.2.4PCR检测23-242.2.5细菌保存242.2.6细菌药物敏感性实验242.2.7生物膜体外模型建立与12下一页
摘要：空肠弯曲杆菌对食品安全和人类以及动物健康形成了很大的威胁,感染此菌可引发的细菌性肠炎、动物腹泻和流产,或诱发人类神经系统疾病等。事实证明空肠弯曲杆菌在传播历程中由于受到存活环境的压力,多以生物膜形式有着,但是国内尚无关于空肠弯曲杆菌生物膜建立及其生物膜耐药性方面的探讨。为证实空肠弯曲杆菌生物膜的有着,并探讨实验室条件下体外构建空肠弯曲杆菌生物膜的最佳策略,以及比较浮游型细菌与生物膜菌的耐药情况,本实验首先根据国标GB/T4789.28-2003、SNO175-92对由猪盲肠内容物分离出的可疑菌进行常规生化检测,初步鉴定的阳性菌样进一步进行PCR定性检测；然后采取试管法对分离菌和标准菌在不同环境因素下进行生物膜形成能力的检测,探究不同气体成份、温度、pH和培养基对空肠弯曲杆菌生物膜形成的影响；其次,以不锈钢针、盖玻片、医用输液管为载体,构建空肠弯曲杆菌的体外模型,通过光学显微镜和扫描电镜(SEM)观察在三种载体上生物膜形态：最后,以标准菌为质控菌,采取美国临床实验室标准协会(CLSI)推荐的肉汤稀释法检测分离菌对8种抗生素的耐药性,同时根据ASTM E2799-2011通过卡尔加里生物膜发生装置(MBEC)对分离得到的空肠弯曲杆菌生物膜进行药物敏感性探讨。结果表明：112份猪盲肠内容物直接划板,通过常规生化检测,其中6份为阳性,其中2份经PCR定性检测可确认为空肠弯曲杆菌,此菌在改良Camp-BAP培养基上生长出典型空肠弯曲杆菌菌落,这说明结合焦性没食子酸和无水碳酸钠分别取2.5g/L所制造的生长环境完全符合空肠弯曲杆菌的生长需要,而PCR检测在检测准确性上要优于常规生化检测。2空肠弯曲杆菌在正常空气条件、37℃、pH为7、培养基为MHB时可以更快更好的形成生物膜结构,说明高温、微需氧以及高营养培养基并不适合构建空肠弯曲杆菌的生物膜模型。3在相同培养条件及时间的前提下,扫描电镜观察结果显示,在不锈钢针以及医用输液管上生物膜处于黏附期以及生长期,而在盖玻片上可以观察到成熟期的层叠状生物膜结构,这说明分离菌在三种载体上皆可以形成生物膜,但盖玻片是相对更适合的载体。42株分离菌对头孢哌酮为100%耐药,对喹诺酮类抗生素敏感,对阿奇霉素为高度敏感。空肠弯曲杆菌生物膜的抑菌浓度是浮游状态下该菌MIC值的几百倍至上千倍,但是却不能完全杀死生物膜内细菌,这说明临床利用的抗生素浓度很难治愈由空肠弯曲杆菌形成生物膜引发的疾病以及持续性感染。本探讨在成功构建其生物膜模型的基础上,探讨不同环境因素对此菌生物膜形成的影响,了解和阐明空肠弯曲杆菌在外界的存活特性和致病特点,为预防和减少由于该菌引起的人畜共患病的发生和相关食品安全不足以及探讨此菌生物膜及其耐药性等探讨奠定基础,也可为其他细菌体外生物膜模型的构建提供一定的参考依据。关键词：空肠弯曲杆菌论文分离论文鉴定论文生物膜论文
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Abstract9-11
1 引言11-20

1.1 空肠弯曲杆菌病原学概述11-13

1.1 空肠弯曲杆菌形态特点12

1.2 空肠弯曲杆菌培养条件12

1.3 空肠弯曲杆菌生化特性12-13

1.4 致病毒素13

1.2 空肠弯曲杆菌的流行病学13-16

1.2.1 目前空肠弯曲杆菌的流行情况13-14

1.2.2 空肠弯曲杆菌的传染源及传播途径14-15

1.2.3 空肠弯曲杆菌对人类与动物的危害15-16

1.3 生物膜概述16-19

1.3.1 生物膜形成历程及影响因素16-18

1.3.2 生物膜的检测18

1.3.3 生物膜的耐药性18-19

1.4 探讨目的和作用19-20

2 材料与策略20-27

2.1 实验材料20-21

2.

1.1 实验样品及生物膜载体20

2.

1.2 主要试剂20-21

2.

1.3 主要仪器21

2.2 实验策略21-27

2.1 样品的采集和保存21

2.2 细菌的分离和纯化21-22

2.3 细菌常规生化检测22-23

2.4 PCR检测23-24

2.5 细菌保存24

2.6 细菌药物敏感性实验24

2.2.7 生物膜体外模型建立与论文导读：7-373.1细菌的分离与鉴定27-293.1.1细菌的分离及纯化273.1.2常规生化检测结果27-283.1.CR检测结果28-293.2空肠弯曲杆菌药物敏感性试验29-303.3空肠弯曲杆菌体外生物膜模型的建立与鉴定30-363.3.1空肠弯曲杆菌生物膜形成环境因素的试验30-333.3.2空肠弯曲杆菌生物膜观察结果33-363.4生物膜药敏试验结果36-374讨论
鉴定24-26

2.8 生物膜药物敏感性实验26-27

3 实验结果27-37

3.1 细菌的分离与鉴定27-29

3.

1.1 细菌的分离及纯化27

3.

1.2 常规生化检测结果27-28

3.

1.3 PCR检测结果28-29

3.2 空肠弯曲杆菌药物敏感性试验29-30

3.3 空肠弯曲杆菌体外生物膜模型的建立与鉴定30-36

3.1 空肠弯曲杆菌生物膜形成环境因素的试验30-33

3.2 空肠弯曲杆菌生物膜观察结果33-36

3.4 生物膜药敏试验结果36-37

4 讨论37-42

4.1 空肠弯曲杆菌的分离与鉴定37-38

4.2 气体条件对空肠弯曲杆菌生物膜形成的影响38

4.3 不同温度对空肠弯曲杆菌生物膜形成的影响38-39

4.4 不同培养基及其pH对空肠弯曲杆菌形成生物膜的影响39

4.5 不同载体对空肠弯曲杆菌形成生物膜的影响39-40

4.6 空肠弯曲杆菌及其生物膜耐药性浅析40-42

5 结论42-43
致谢43-44
参考文献44-52
攻读硕士学位期间发表的学术论文52