谈扩增同种异基因抗原特异性调节性T细胞体外扩增

论文导读：提供了论述依据。另外,本论文还探讨了通过调控细胞代谢途径以CD4+CD25-T细胞体外诱导产生抗原特异性Treg细胞的策略。探讨表明通过磷酸二酯酶(PDEs)抑制剂提升细胞胞内cAMP水平不仅可以抑制T细胞增殖和IL-2的分泌,同时可诱导产生具有免疫抑制功能的Treg细胞。本论文采取PDEs抑制剂Cilostamide和耐受型树突状细胞(tDCs),在分别
摘要：CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Tregs)在维持免疫耐受、抑制自身免疫性疾病病理反应及移植排斥反应的历程中起着重要的作用。但是由于Treg细胞的表型和Treg细胞在外周血中数量甚少,限制了基于Treg细胞治疗策略的临床运用。同时有文献报道扩增得到的Treg细胞的免疫治疗效果大于初始的Treg细胞,由此,开展体外诱导或扩增大量Treg细胞的探讨具有重要的作用。目前主要可以通过anti-CD3/CD28抗体包被的免疫磁珠结合IL-2体外广谱扩增Treg细胞,或者利用同种异基因抗原呈递细胞(APCs)通过抗原特异性方式体外扩增抗原特异性Treg细胞。前者扩增得到的Treg细胞的抗原特异性较差,而后者的扩增倍数较少。动物模型探讨表明抗原特异性Treg细胞在抑制自身免疫性疾病方面功能强于多克隆Treg细胞。本论文综合了目前采取的各种扩增策略,建立了通过同种异基因B细胞诱导产生抗原特异性Treg细胞的策略：即第一轮扩增将免疫磁珠分选的人CD4+CD25+Foxp3+T细胞和人B淋巴细胞按1：4比例体外混合培养并加入外源白介素-2(IL-2)和抗CD28抗体；将第一轮扩增得到的Treg细胞用anti-CD3/CD28抗体包被的免疫磁珠和IL-2刺激,进行第二轮扩增以获得更多数量的抗原特异性Treg细胞,第二轮刺激分为添加或未添加免疫抑制剂雷帕霉素(Rapamycin, RAPA)两组。本探讨结果表明经过两轮的扩增后,在第二轮扩增中未添加RAPA组可扩增1×103倍,纯度80%；而添加RAPA组可扩增0.8×103倍,纯度90%。添加RAPA组得到的Treg细胞的Foxp3、CTLA4、CD39表达水平高于未添加RAPA组,但是HLA-DR变化不大。未添加RAPA组扩增得到的Treg细胞分泌低水平的IL-2、IL-17、IL-4和IFN-γ,而添加RAPA组得到的Treg细胞几乎不分泌上面陈述的各种细胞因子。体外扩增实验结果表明未添加RAPA组Treg细胞体现出部分免疫反应无能性,而添加RAPA组Treg细胞则体现出完全的免疫反应无能性。经人B淋巴细胞扩增得到的抗原特异性Treg细胞能够有效地抑制同源抗原引起的免疫反应,而对多克隆刺激和异源抗原的免疫反应抑制能力较弱,表明体外扩增的Treg细胞呈现出抗原特异性特点。本论文采取人B细胞体外扩增抗原特异性Treg细胞,再通过anti-CD3/CD28抗体包被的免疫磁珠进一步进行刺激可以在体外获得大量的抗原特异性的Treg细胞,并且在加入雷帕霉素后可以有效地提升Treg细胞的纯度和免疫抑制功能。本探讨同时表明人B淋巴细胞扩增得到的Treg细胞呈现出抗原特异性的特点。本探讨结果为利用第三方无关供者Treg细胞进行免疫治疗的可行性提供了论述依据。另外,本论文还探讨了通过调控细胞代谢途径以CD4+CD25-T细胞体外诱导产生抗原特异性Treg细胞的策略。探讨表明通过磷酸二酯酶(PDEs)抑制剂提升细胞胞内cAMP水平不仅可以抑制T细胞增殖和IL-2的分泌,同时可诱导产生具有免疫抑制功能的Treg细胞。本论文采取PDEs抑制剂Cilostamide和耐受型树突状细胞(tDCs),在分别添加不同的外源细胞因子条件下体外诱导CD4+CD25Foxp3-T细胞产生CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞。初步探讨结果表明通过添加外源IL-2可以推动Cilostamide诱导产生CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞。另外,在IL-2和Cilostamide有着的条件下,通过添加TGF-β可以提升Foxp3的表达水平。由此,在添加TGF-β和IL-2的条件下,Cilostamide和tDCs可以体外诱导产生Treg细胞。本探讨结果将有助于进一步有效地利用C ilostamide体外诱生功能性Treg细胞。关键词：抗原特异性Treg细胞论文人B淋巴细胞论文体外扩增论文
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Abstract8-11
第一章 抗原特异性Tregs的体外扩增培养11-27
前言11-13
材料与策略13-19
结果与浅论文导读：28材料与策略28-36结果与浅析36-44讨论44-45参考文献45-46第三章Cilostamide体外诱导Treg细胞的初步探讨46-57前言46-47材料与策略47-52结果与浅析52-54讨论54-55参考文献55-57综述57-68参考文献64-68结论68-69致谢69-71在读期间发表的论文71上一页12
析19-22
讨论22-24
参考文献24-27
第二章 抗原特异性Tregs的功能探讨27-46
前言27-28
材料与策略28-36
结果与浅析36-44
讨论44-45
参考文献45-46
第三章 Cilostamide体外诱导Treg细胞的初步探讨46-57
前言46-47
材料与策略47-52
结果与浅析52-54
讨论54-55
参考文献55-57
综述57-68
参考文献64-68
结论68-69
致谢69-71
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