探讨激酶Prostratin诱导急性髓系白血病细胞分化及其作用机制初步

论文导读：周期与细胞分化密切相关，许多诱导分化剂在引起肿瘤细胞分化的同时引起增殖抑制和周期阻滞。细胞计数的结果显示，prostratin能时间和剂量依赖地引起急性髓系白血病的增殖抑制。通过流式细胞仪检测细胞周期和蛋白印迹技术，发现prostratin通过下调p21及CycpnD

3、CDK4、123下一页

摘要：白血病是造血系统的恶性肿瘤，严重危害着人类身体健康，其中以急性髓系白血病最为常见。虽然随着探讨的深入，治愈率有所提升，但难治，复发，老年性的急性髓系白血病仍缺乏有效的治疗药物和手段。诱导分化疗法的出现使这一不足得到很大改善。目前全反式维甲酸诱导分化已经成为治疗急性早幼粒细胞白血病已成为临床首选案例。诱导分化疗法很可能成为急性髓系白血病治疗未来的进展方向。PKC是依赖钙、磷脂和DAG激活的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的多基因超家族，为信号转导中的关键部分。蛋白激酶C亚型的异常表达和活性增高在白血病的形成和分化历程起着重要作用，由此是白血病治疗的重要靶标。Prostratin是一种天然化合物，属于蛋白激酶C的激动剂，它最大的优点在于没有促癌活性，目前已经被临床用来治疗艾滋病。尽管prostratin的特性反映了其成为一种安全的诱导分化剂的可能，但目前并无探讨涉及这方面。我们主要进行了prostratin诱导急性髓系白血病分化的效果和机制探讨。通过吉姆萨染色观察细胞形态学变化，发现prostratin使急性髓系白血病细胞出现具有分化特点的形态学转变，而流式细胞仪检测细胞表面分化抗原表达的变化发现prostratin能增强急性髓系白血病细胞细胞表面的粒系和单核系细胞特有的标志CD11b和CD14的表达，并且这种作用呈时间效应和剂量效应。MAPK通路在细胞分化历程中发挥重要作用，通过蛋白印迹技术，我们发现prostratin能够激活MAPK通路的三条主要支路REK，JNK和p38通路。Prostratin引起的急性髓系白血病细胞CD11b的表达增强能被REK通路特异性抑制剂U0126完全抑制而不被JNK和p38的抑制剂所抑制，说明只有REK通路是prostratin诱导急性髓系白血病所必需的。而PKC抑制剂GFX对prostratin引起急性髓系白血病细胞的RAF/MEK/ERK通路的激活和细胞表面的CD11b表达增强皆可完全抑制，说明prostratin对ERK通路的激活是PKC介导的。细胞增殖和周期与细胞分化密切相关，许多诱导分化剂在引起肿瘤细胞分化的同时引起增殖抑制和周期阻滞。细胞计数的结果显示，prostratin能时间和剂量依赖地引起急性髓系白血病的增殖抑制。通过流式细胞仪检测细胞周期和蛋白印迹技术，发现prostratin通过下调p21及CycpnD

3、CDK4、论文导读：

CDK6，以而降低Rb蛋白的磷酸化，抑制下游基因的转录，使细胞出现G0/G1期阻滞。另外，由于联合用药是急性髓系白血病治疗中的常用对策，我们检测了prostratin与阿糖胞苷，地昔他宾，维生素D3联合作用对急性髓系白血病细胞系HL-60表面CD11b表达的影响，结果显示prostratin分别与上面陈述的三种药物联合作用均有协同作用。而这种联合诱导作用能被PKC抑制剂GFX和MEK抑制剂U0126完全阻断，说明，PKC/ERK通路参与了这种协同诱导作用。综上所述我们的探讨确定了prostratin能引起急性髓系白血病细胞的增殖抑制，周期阻滞和分化。并且初步阐述了这几种作用的机制。同时证明prostratin与几种白血病治疗药物具有协同作用。关键词：急性髓系白血病论文诱导分化论文蛋白激酶C论文prostratin论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。摘要4-6
Abstract6-11
第1章 绪论11-21

1.1 探讨背景11-13

1.2 白血病诱导分化治疗的探讨进展13-16

1.3 蛋白激酶 C 是白血病等恶性肿瘤治疗最有前景的靶标16-18

1.3.1 靶向蛋白激酶 C 的抗肿瘤药物探讨情况16-17

1.3.2 靶向蛋白激酶 C 的抗肿瘤药物研发实例17-18

1.4 PKC 亚型选择性激动剂及抑制剂的探讨近况及困境18-19

1.5 Prostratin 探讨情况19-21

第2章 Prostratin 诱导急性髓系白血病细胞分化21-29

2.1 实验材料21-22

2.

1.1 实验细胞21

2.

1.2 实验试剂与耗材21

2.

1.3 实验仪器21-22

2.2 实验策略22-23

2.1 吉姆萨染色实验22

2.2 流式细胞仪检测细胞分化抗原簇表达22

2.3 原代白血病细胞分离22-23

2.3 实验结果23-27

2.3.1 Prostratin 引起急性髓系白血病细胞形态学变化23-24

2.3.2 Prostratin 诱导急性髓系白血病细胞 CD11b 表达24-26

2.3.3 Prostratin 诱导急性髓系白血病细胞 CD14 表达26

2.3.4 Prostratin 诱导原代急性髓论文导读：ostratin抑制急性髓系白血病细胞的增殖31-323.3.2Prostratin引起急性髓系白血病细胞周期阻滞32-343.4本章小结34-35第4章Prostratin引起急性髓系白血病细胞分化机制的初步探讨35-414.1实验材料35-364.1.1实验细胞354.1.2实验试剂与耗材354.1.3实验仪器35-364.2实验策略364.2.1流式细胞仪检测分化抗原簇表达364.4
系白血病细胞 CD11b 表达26-27

2.4 本章小结27-29

第3章 Prostratin 引起急性髓系白血病细胞周期阻滞29-35

3.1 实验材料30

3.

1.1 实验细胞30

3.

1.2 实验试剂与耗材30

3.

1.3 实验仪器30

3.2 实验策略30-31
3.

2.1 细胞计数实验30

3.

2.2 流式细胞仪检测细胞周期30-31

3.

2.3 Western Blot 检测周期蛋白31

3.3 实验结果31-34

3.1 Prostratin 抑制急性髓系白血病细胞的增殖31-32

3.2 Prostratin 引起急性髓系白血病细胞周期阻滞32-34

3.4 本章小结34-35

第4章 Prostratin 引起急性髓系白血病细胞分化机制的初步探讨35-41

4.1 实验材料35-36

4.

1.1 实验细胞35

4.

1.2 实验试剂与耗材35

4.

1.3 实验仪器35-36

4.2 实验策略36
4.

2.1 流式细胞仪检测分化抗原簇表达36

4.4.2 Western Blot 检测蛋白表达变化36

4.3 实验结果36-40

4.3.1 Prostratin 通过激活细胞内 ERK 通路发挥诱导分化作用36-39
4.3.2 Prostratin 通过 PKC 介导 ERK 通路激活引起的诱导分化效应39-40

4.4 本章小结40-41

第5章 Prostratin 与临床治疗白血病药物的联合效应41-47

5.1 实验材料42

5.

1.1 实验细胞42

5.

1.2 实验试剂与耗材42

5.

1.3 实验仪器42

5.2 实验策略42-43
5.

2.1 流式细胞仪检测分化抗原簇表达42-43

5.3 实验结果43-46
5.3.1 Prostratin 与 Decitabine 及 VD3联合作用43-44
5.

3.2 Prostratin 与 ARA-C 联合作用44-45

5.3.3 PKC/ERK 通路参与 prostratin 与其他药物的协同作用45-46

5.4 本章小结46-47

结论47-49
参考文献49-53
缩略词表53-55
攻读硕士学位期间所发表的学术论文55-57
致谢57