试论姜黄HC-NPs通过抑制STAT3“再教化”TAMs及其抗肿瘤效应

论文导读：胞（TAMs）的“再教化”作用及体内外的抗肿瘤效应。策略：将小鼠单核/巨噬细胞株RAW264.7（M1表型）与小鼠乳腺癌细胞株4T1共培养，以观察RAW264.7是否被“教化”为M2表型的E-RAW264.7（即TAMs），用流式细胞术（FCM）检测RAW264.7细胞表型分子表达及细胞内细胞因子水平变化，Westernblot检测细胞STAT3及下游蛋白表达水平；再以“教化”后
摘要：目的：探讨联氨基姜黄素纳米脂质体（HC-NPs）通过抑制STAT3信号通路，对肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）的“再教化”作用及体内外的抗肿瘤效应。策略：将小鼠单核/巨噬细胞株RAW264.7（M1表型）与小鼠乳腺癌细胞株4T1共培养，以观察RAW264.7是否被“教化”为M2表型的E-RAW264.7（即TAMs），用流式细胞术（FCM）检测RAW264.7细胞表型分子表达及细胞内细胞因子水平变化，Western blot检测细胞STAT3及下游蛋白表达水平；再以“教化”后的RAW264.7细胞（E-RAW264.7）为探讨对象，分PBS对照组，NPs对照组，HC-NPs处理组，刘氏染色检测细胞形态学变化，MTT检测细胞存活情况，Western blot检测细胞STAT3及下游蛋白表达水平，FCM检测细胞表型分子表达及细胞内细胞因子水平，观察HC-NPs对E-RAW264.7的“再教化”作用，使E-RAW264.7（M2型）回复M1表型的作用。将“再教化”RAW264.7与4T1细胞共培养，分PBS对照组，E-RAW264.7对照组，NPs预处理组（NPs-E-RAW264.7），HC-NPs预处理组（HC-NPs-E-RAW264.7），台盼蓝染色观察4T1细胞的死亡率，FCM检测细胞周期及细胞凋亡，Transwell小室检测细胞迁移能力及侵袭力，Western blot检测细胞STAT3及下游增殖、凋亡、侵袭相关蛋白表达水平。在6-8周BABL/c雌性小鼠近右下肢脂肪垫处移植4T1细胞及RAW264.7细胞。移植后第10天至第25天连续给药5次，3天一次，分为PBS对照组，NPs对照组，HC-NPs处理组及HC处理组。连续测量小鼠肿瘤体积大小，移植后第30天处死小鼠称量肿瘤重量，免疫组织化学（IHC）检测细胞增殖（Ki-67阳性细胞）及新生血管生成（CD31阳性微血管）；TUNEL染色检测细胞凋亡，HE染色显示肿瘤细胞肺转移数目；连续观察小鼠存活期至移植后第60天，检测小鼠的存活率。结果：FCM结果显示，RAW264.7与4T1细胞共培养后，被“教化”为M2表型（IL-10~(high)，TGF-β~(high)，IL-12~(low)），Western blot结果显示E-RAW264.7细胞p-STAT3及其下游MMP9、MMP2、VEGF蛋白表达水平升论文导读：胞形态学发生显著转变，FCM显示HC-NPs可重新回复E-RAW264.7为M1表型（IL-10~(low)，TGF-β~(low)，IL-12~(high)）。Westernblot结果显示HC-NPs可显著下调E-RAW264.7细胞pSTAT3及其下游MMP9、MMP2、VEGF蛋白表达水平。经HC-NPs预处理的E-RAW264.7细胞（HC-NPs-E-RAW264.7）与4T1细胞共孵育后，不影响4T1细胞存活率和细胞凋亡，但却能
高；用HC-NPs处理E-RAW264.7细胞后，细胞形态学发生显著转变，FCM显示HC-NPs可重新回复E-RAW264.7为M1表型（IL-10~(low)，TGF-β~(low)，IL-12~(high)）。Western blot结果显示HC-NPs可显著下调E-RAW264.7细胞pSTAT3及其下游MMP9、MMP2、VEGF蛋白表达水平。经HC-NPs预处理的E-RAW264.7细胞（HC-NPs-E-RAW264.7）与4T1细胞共孵育后，不影响4T1细胞存活率和细胞凋亡，但却能显著减少S期细胞数量（P0.05）；Transwell小室迁移及侵袭实验结果显示，与对照组相比，4T1细胞与HC-NPs-E-RAW264.7细胞共培养后，4T1细胞迁移能力及侵袭力下降，与western blot检测的相应蛋白水平变化一致。体内实验显示，HC-NPs组的小鼠肿瘤生长速度及小鼠肿瘤重量显著低于对照组；存活曲线显示，HC-NPs组小鼠存活率（80%）显著高于HC组（40%）；免疫组化结果显示HC-NPs处理组中Ki-67阳性的肿瘤细胞及CD-31阳性微血管密度都显著减少；TUNEL染色浅析显示，与对照组相比，HC-NPs处理组的肿瘤细胞凋亡增加；对肺组织切片进行的肿瘤细胞计数结果显示，HC-NPs显著降低了肿瘤细胞肺转移数目。结论：HC-NPs能通过抑制STAT3信号途径，使肿瘤微环境“教化“后的巨噬细胞发生型别“再教化”，此类巨噬细胞在体外与4T1小鼠乳腺癌细胞共培养后，体现为对肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭及血管生成等方面的抑制作用。另外，HC-NPs在体内实验中体现出显著的抗肿瘤作用，且与HC相比，延长了小鼠的存活时间，减低了毒副作用，由此HC-NPs具有良好的运用前景。关键词：联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒论文肿瘤相关巨噬细胞论文STAT3论文乳腺癌论文
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中文摘要7-10
英文摘要10-14
前言14-16
第一部分 体外实验探讨HC-NPs对TAMs的“再教化”作用16-33
1 材料与策略16-25
2 结果25-31

3.讨论31-33

第论文导读：二部分体内实验探讨HC-NPs对小鼠肿瘤的抑制作用33-421材料与策略33-372结果37-403讨论40-42全文总结42-43参考文献43-47附图47-50文献综述50-60参考文献57-60致谢60-61攻读硕士期间发表的学术论文61-62上一页123
二部分 体内实验探讨HC-NPs对小鼠肿瘤的抑制作用33-42
1 材料与策略33-37
2 结果37-40
3 讨论40-42
全文总结42-43
参考文献43-47
附图47-50
文献综述50-60
参考文献57-60
致谢60-61
攻读硕士期间发表的学术论文61-62