谈述基因治疗超声微泡介导野生型P53联合RB94基因转染HXO-Rb44细胞实验
最后更新时间：2024-01-23
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论文导读：-13第一部分pVIVO1-p53-Rb94真核表达质粒的构建13-201材料与策略13-182讨论18-20第二部分超声微泡介导野生型P53联合RB94基因转染HXO-Rb44细胞的实验探讨20-301材料与策略20-262结果26-273讨论27-30第三部分转染RB94基因后对HXO-RB44细胞上NKG2D配体MICA、MICB表达的影响30-361材料与策略30-322结果
摘要：目的：通过细胞实验探讨超声微泡推动双基因联合转染（Rb94、P53基因）HXO-RB44细胞的探讨，以探讨两种抑癌基因联合对视网膜母细胞瘤细胞的效果。初步探讨单独转染RB94基因后HXO-RB44细胞株上MICA、MICB配体的表达情况。策略：1.构建重组质粒载体pVIVO1-p53， pVIVO1-Rb94，pVIVO1-p53-Rb94表达载体。2.利用UTMD策略分别转染P53组、Rb94组、以及二者联合组处理HXO-Rb44细胞后，对视网膜母细胞瘤细胞生长活性的影响。3.单独转染Rb94基因对HXO-Rb44细胞上NKG2D配体表达的影响。结果：1.重新构建的载体内的目标基因序列与Rb94基因和P53基因序列完全一致。RT-PCR检测结果表明Rb94基因及P53基因分别得到了有效表达。2.以连续波超声（参数：0.5W/cm2声强，辐照时间30s），对HXO-Rb44细胞进行P53、Rb94、以及P53联合Rb94基因转染。pVIVO1-p53与pVIVO1-p53-Rb94转染组细胞418bp的wtp53基因强表达，显著高于空白组，pVIVO1组及pVIVO1-Rb94组（P0.05），说明携带有wtp53基因的pVIVO1-p53与pVIVO1-p53-Rb94组质粒已成功转染入细胞内，且目标基因mRNA得到有效表达。RT-PCR检测到pVIVO1-Rb94和pVIVO1-p53-Rb94转染组细胞581bp的RB94基因表达，其余3组则无该基因表达，说明携带有Rb94基因的pVIVO1-Rb94和pVIVO1-p53-Rb94质粒成功转染入细胞，且目标基因在mRNA水平稳定表达。检测HXO-Rb44细胞经外源基因转染后对其生长活性的影响。双质粒联合组经过超声爆破微泡处理后的MTT值显著小于其余各组。流式细胞仪检测细胞凋亡率结果显示pVIVO1-p53-Rb94组经超声+微泡处理后细胞早期凋亡率（35.3%±1.51%），显著高于其他各组。凋亡蛋白BAX的表达量联合转染组（0.322±0.028）较单独转染组显著较高。3.单独转染组（只转RB94基因），WESTERNBLOT显示NKG2D配体：MICA、MICB蛋白表达均高于空白对照组及空质粒组，差别具有统计学作用（P值均＜0.01）。MICA、MICB蛋白在空白对照组和pEGFP-C1质粒组表达差别无统计学作用（P＞0.05）。结论:本实验采取超声爆破微泡作为推动基因转染的手段，以视网膜母细胞瘤细胞为对象分别进行抑癌基因P53、RB94以及P53联合RB94进行转染，检测了各组基因的表达，以及对视网膜母细胞瘤细胞生长活性的影响，并检测了单独转染Rb94基因对视网膜母细胞瘤细胞上两种NKG2D配体：MICA、MICB影响。实验结果提示P53联合RB94基因转染组对视网膜母细胞瘤细胞的抑制高于分别转染P53及分别转染RB94组。HXO-RB44细胞上MICA、MICB在单转RB94基因后有上调的作用。然而视网膜母细胞瘤的基因治疗尚处于起步阶段，且视网膜母细胞瘤细胞株上NKG2D配体上调的因素尚处需进一步探讨，本探讨仅在体外实验为视网膜母细胞瘤基因治疗的初步探讨做了一定的探讨，为进一步进行动物实验积累一定论述依据，最终用于临床尚需更加深入探讨。关键词：视网膜母细胞瘤论文联合基因治疗论文超声微泡论文NKG2D配体论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。英汉缩略语名词对照5-6
摘要6-9
ABSTRACT9-11
前言11-13
第一部分 pVIVO1-p53-Rb94 真核表达质粒的构建13-20
1 材料与策略13-18
2 讨论18-20
第二部分超声微泡介导野生型 P53 联合 RB94 基因转染 HXO-Rb44 细胞的实验探讨20-30
1 材料与策略20-26
2 结果26-27
3 讨论27-30
第三部分 转染 RB94 基因后对 HXO-RB44 细胞上 NKG2D 配体 MICA、MICB 表达的影响30-36
1 材料与策略30-32
2 结果32-33
3 讨论33-36
全文结论36-37
附图37-4论文导读：0参考文献40-43文献综述43-48参考文献46-48致谢48-49硕士探讨生在读期间发表论文49上一页12
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参考文献40-43
文献综述43-48
参考文献46-48
致谢48-49
硕士探讨生在读期间发表论文49
摘要：目的：通过细胞实验探讨超声微泡推动双基因联合转染（Rb94、P53基因）HXO-RB44细胞的探讨，以探讨两种抑癌基因联合对视网膜母细胞瘤细胞的效果。初步探讨单独转染RB94基因后HXO-RB44细胞株上MICA、MICB配体的表达情况。策略：1.构建重组质粒载体pVIVO1-p53， pVIVO1-Rb94，pVIVO1-p53-Rb94表达载体。2.利用UTMD策略分别转染P53组、Rb94组、以及二者联合组处理HXO-Rb44细胞后，对视网膜母细胞瘤细胞生长活性的影响。3.单独转染Rb94基因对HXO-Rb44细胞上NKG2D配体表达的影响。结果：1.重新构建的载体内的目标基因序列与Rb94基因和P53基因序列完全一致。RT-PCR检测结果表明Rb94基因及P53基因分别得到了有效表达。2.以连续波超声（参数：0.5W/cm2声强，辐照时间30s），对HXO-Rb44细胞进行P53、Rb94、以及P53联合Rb94基因转染。pVIVO1-p53与pVIVO1-p53-Rb94转染组细胞418bp的wtp53基因强表达，显著高于空白组，pVIVO1组及pVIVO1-Rb94组（P0.05），说明携带有wtp53基因的pVIVO1-p53与pVIVO1-p53-Rb94组质粒已成功转染入细胞内，且目标基因mRNA得到有效表达。RT-PCR检测到pVIVO1-Rb94和pVIVO1-p53-Rb94转染组细胞581bp的RB94基因表达，其余3组则无该基因表达，说明携带有Rb94基因的pVIVO1-Rb94和pVIVO1-p53-Rb94质粒成功转染入细胞，且目标基因在mRNA水平稳定表达。检测HXO-Rb44细胞经外源基因转染后对其生长活性的影响。双质粒联合组经过超声爆破微泡处理后的MTT值显著小于其余各组。流式细胞仪检测细胞凋亡率结果显示pVIVO1-p53-Rb94组经超声+微泡处理后细胞早期凋亡率（35.3%±1.51%），显著高于其他各组。凋亡蛋白BAX的表达量联合转染组（0.322±0.028）较单独转染组显著较高。3.单独转染组（只转RB94基因），WESTERNBLOT显示NKG2D配体：MICA、MICB蛋白表达均高于空白对照组及空质粒组，差别具有统计学作用（P值均＜0.01）。MICA、MICB蛋白在空白对照组和pEGFP-C1质粒组表达差别无统计学作用（P＞0.05）。结论:本实验采取超声爆破微泡作为推动基因转染的手段，以视网膜母细胞瘤细胞为对象分别进行抑癌基因P53、RB94以及P53联合RB94进行转染，检测了各组基因的表达，以及对视网膜母细胞瘤细胞生长活性的影响，并检测了单独转染Rb94基因对视网膜母细胞瘤细胞上两种NKG2D配体：MICA、MICB影响。实验结果提示P53联合RB94基因转染组对视网膜母细胞瘤细胞的抑制高于分别转染P53及分别转染RB94组。HXO-RB44细胞上MICA、MICB在单转RB94基因后有上调的作用。然而视网膜母细胞瘤的基因治疗尚处于起步阶段，且视网膜母细胞瘤细胞株上NKG2D配体上调的因素尚处需进一步探讨，本探讨仅在体外实验为视网膜母细胞瘤基因治疗的初步探讨做了一定的探讨，为进一步进行动物实验积累一定论述依据，最终用于临床尚需更加深入探讨。关键词：视网膜母细胞瘤论文联合基因治疗论文超声微泡论文NKG2D配体论文
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摘要6-9
ABSTRACT9-11
前言11-13
第一部分 pVIVO1-p53-Rb94 真核表达质粒的构建13-20
1 材料与策略13-18
2 讨论18-20
第二部分超声微泡介导野生型 P53 联合 RB94 基因转染 HXO-Rb44 细胞的实验探讨20-30
1 材料与策略20-26
2 结果26-27
3 讨论27-30
第三部分 转染 RB94 基因后对 HXO-RB44 细胞上 NKG2D 配体 MICA、MICB 表达的影响30-36
1 材料与策略30-32
2 结果32-33
3 讨论33-36
全文结论36-37
附图37-4论文导读：0参考文献40-43文献综述43-48参考文献46-48致谢48-49硕士探讨生在读期间发表论文49上一页12
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参考文献40-43
文献综述43-48
参考文献46-48
致谢48-49
硕士探讨生在读期间发表论文49