简述基因超声微泡介导野生型p53基因联合Rb94基因转染裸鼠视网膜母细胞瘤实验

论文导读：测可见，单基因组及联合基因组对其VEGF、MVD及凋亡均有影响，但联合组的效应更为显著，同单基因组的差别有统计学作用（P0.05）。探讨结论：超声微泡作为一种新型的转染介质，可达到转染单个基因及联合基因的目的,通过观察wtp53联合Rb94基因转染肿瘤组织后，对其的抑制作用优于单独转染其中任一基因，为RB的治疗提供更多、更有效的选择
摘要：探讨背景及目的视网膜母细胞瘤（RB）是学龄前儿童最常见的眼部恶性肿瘤，恶性度高，就诊时患儿较多已进入严重危害视力及生命的时期。目前我国对其治疗仍以患眼眼球摘除为主，辅以放射治疗、化学治疗、冷凝治疗等其他手段。而在对RB治疗的探讨方面，基因治疗已成为其主要方向，其中又以对基因载体的探讨，是其整个领域的关键和瓶颈不足。近年来超声微泡造影剂成为基因载体探讨的热点之一。Rb基因是公认的与RB形成联系最为密切的抑癌基因，而p53基因被认为目前的与人类恶性肿瘤相关性最高的一种抑癌基因。本探讨以RB为探讨对象，运用超声微泡造影剂这一新型载体，将wtp53基因及Rb94基因转染至裸鼠RB模型内，分别观察单个基因、联合基因对裸鼠视网膜母细胞瘤的治疗作用。探讨策略：1. HXO-Rb44细胞培养于含10%FBS的RPMI1640培养基，待至对数期，收集并调整细胞密度为(5.5～6.5)×106/mL备用。40只裸鼠行双眼视网膜射Rb细胞悬液1ul，术后每3天观察肿瘤生长情况。2．将造模成功的裸鼠随机分为五组：①空白对照组；②空质粒组；③p53质粒组；④Rb94质粒组；⑤p53+Rb94质粒。除组①外，其余四组每天以0.5W/cm2超声波辐照眼球60s（辐照4s，间隔24s，连续两次，共用60s），7天后取出肿瘤组织行RT-PCR及Western-blot证实转染是否成功。3.取转染后裸鼠肿瘤组织，用免疫组化染色及Western-blot法检测各组肿瘤组织VEGF表达，检测各组肿瘤组织的肿瘤微血管密度及组织细胞的凋亡情况。探讨结果：1.40只裸鼠双眼视网膜下种植瘤细胞，有32只裸鼠（48只眼）造模成功。2.RT-PCR及WB可见单基因组及联合基因组均有外源基因导入肿瘤组织，并在蛋白水平得到表达。3.对各组瘤组织的检测可见，单基因组及联合基因组对其VEGF、MVD及凋亡均有影响，但联合组的效应更为显著，同单基因组的差别有统计学作用（P0.05）。探讨结论：超声微泡作为一种新型的转染介质，可达到转染单个基因及联合基因的目的,通过观察wtp53联合Rb94基因转染肿瘤组织后，对其的抑制作用优于单独转染其中任一基因，为RB的治疗提供更多、更有效的选择，也对RB发生进展的机制探讨拓展了新思路。关键词：超声微泡造影剂论文wtp53基因论文Rb94基因论文视网膜母细胞瘤论文
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摘要6-8
ABSTRACT8-11
前言11-13
第一部分 裸鼠视网膜母细胞瘤动物模型的建立13-17
1 材料与策略13-15
2 结果15-16
3 讨论16-17
第二部分 超声微泡介导 p53 联合 Rb94 基因转染裸鼠视网膜母细胞瘤17-26
1 材料与策略17-23
2 结果23-24
3 讨论24-26
第三部分 联合基因转染后对裸鼠视网膜母细胞瘤的影响26-34
1 材料与策略26-29
2 结果29-31
3 讨论31-34
全文结论34-35
参考文献35-39
附图39-44
综述44-50
参考文献47-50
致谢50-51
探讨生在读期间发表论文及待发表的论文51-52