试谈蛋白褶纹冠蚌HMGB1和组蛋白抗菌肽表达及HMGB1致炎功能

最后更新时间：2024-01-20 作者：用户投稿原创标记

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论文导读：达条件的优化和SDS-PAGE检测473.2.2可溶性重组HMGB1蛋白的表达纯化及含量测定47-483.2.3蛋白质浓度的测定48-503.2.4CpHMBG1的致炎活性探讨503.3结果50-533.4讨论53-55第四章结论与展望55-57参考文献57-62致谢62-63
摘要：褶纹冠蚌(Cristaria ppcata)分布广泛,是我国重要的淡水育珠蚌之一,具有一定的经济价值。高迁移率族蛋白B1(high mobipty group box1,HMGB1)是一种细胞核的蛋白,在细胞内有多种作用。本论文利用RT-PCR,克隆出褶纹冠蚌HMGB1cDNA全长。褶纹冠蚌HMGB1cDNA全长621bp,编码207个氨基酸,预测编码的蛋白分子量大小为24KDa,预测等电点PI=5.7。本论文还将基因扩增产物和表达载体pET-30a经Kpn I、EcoRI双酶切之后,连接并构建重组表达质粒,将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)中,OD600=0.65时加入IPTG至终浓度为1mmol/L,37℃诱导12h,得到大量可溶性蛋白,用Ni2+亲和层析镍柱纯化,最终得到较纯的目的蛋白。通过向SD小鼠注射rCpHMGB1,使SD小鼠血清中的TNF-α含量出现显著上升,在4h处出现峰值,并随着rCpHMGB1浓度的上升,TNF-α的浓度上升。说明了重组的褶纹冠蚌rHMGB1具有使小鼠致炎的能力。组蛋白H2A (Histone H2A)是一种富含赖氨酸的组蛋白。本论文利用RT-PCR等分子生物学技术,克隆出褶纹冠蚌组蛋白H2AN末端多肽cDNA。其全长120bp,编码39个氨基酸,预测编码的蛋白分子量大小为4.0KDa,预测等电点PI=12.3。本论文将基因扩增产物和表达载体pET-30a和pET-32a经Kpn I、EcoRI双酶切之后,连接并构建重组表达质粒,将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)中,加入IPTG至终浓度为1mmol/L,37℃诱导8h,得到大量目的蛋白。关键词：褶纹冠蚌论文高迁移率族蛋白B1论文组蛋白抗菌肽论文表达论文纯化论文致炎功能论文
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Abstract4-5
缩略语表5-7
目录7-10
第一章文献综述10-21
1. 高迁移率族蛋白B1(high mobipty group box1,HMGB1)探讨近况10-18
1.1 高迁移率族蛋白(high mobipty group protein,HMG蛋白)10-11
1.2 高迁移率族蛋白B1(high mobipty group box1,HMGB1)11

1.2.1 HMGB1的基因与结构11-12

1.2.2 HMGB1的产生和释放12-13

1.2.3 HMGB1的受体及信号转导13-14

1.2.4 HMGB1的细胞核内作用14-15

1.2.5 HMGB1的细胞核外作用15-17

1.2.6 HMGB1的抑制剂17-18

2. 组蛋白抗菌肽(Histone H2A)探讨近况18-20

2.1 组蛋白(Histone)18-19

2.2 抗菌肽19

2.3 组蛋白H2A N末端多肽的抗菌活性探讨19-20

3. 本探讨的作用20-21

第二章褶纹冠蚌高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和组蛋白抗菌肽的原核表达21-45

2.1 材料与策略22-23

1.1 实验材料22

1.2 酶、引物22

1.3 试剂22-23

1.4 仪器设备23

2.2 实验策略23-32

2.1 序列浅析23-24

2.2 褶纹冠蚌血清中RNA的提取24-25

2.3 褶纹冠蚌ART cDNA的合成25-26

2.4 褶纹冠蚌高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和组蛋白抗菌肽的扩增26-27

2.5 HMGB1和组蛋白抗菌肽亚克隆载体的构建及测序27

2.6 重组表达载体的构建与鉴定27-32

2.7 重组HMGB1蛋白与重组组蛋白抗菌肽的诱导表达和SDS-PAGE浅析32

2.3 结果32-42

2.3.1 序列浅析32-37

2.3.2 总RNA的提取37-38

2.3.3 重组HMGB1和重组组蛋白抗菌肽表达载体的构建38-40

2.3.4 重组HMGB1蛋白和重组组蛋白抗菌肽的诱导表达和SDS-PAGE浅析40-42