简析霉素雷帕霉素联合环孢素A对免疫介导再生障碍性贫血小鼠造血功能影响要求

论文导读：各实验组小鼠脾脏淋巴细胞流式细胞仪检测28-38第4章讨论38-424.1建立免疫介导性再生障碍性贫血小鼠模型384.2雷帕霉素对免疫系统的作用38-404.3雷帕霉素对调节性T细胞的影响404.4雷帕霉素在再生障碍性贫血中的运用40-42第5章结论42-43致谢43-44参考文献44-47攻读学位期间的探讨成果47-48综述48-53References52-53
摘要：目的：探讨雷帕霉素（RAPA）联合环孢菌素A(CsA)对免疫介导性再生障碍性贫血模型小鼠骨髓造血功能的影响，为再生障碍性贫血寻求新的免疫抑制治疗对策。策略：X射线亚致死量（6Gy）全身均匀照射昆明小鼠，在照射后的4小时内，给已照射的昆明小鼠尾静脉注射来自于Balb/c小鼠的胸腺淋巴结悬液，每只昆明小鼠输入的淋巴细胞为106个，以而成功建立了再生障碍性贫血小鼠模型。把成功建立的再生障碍性贫血小鼠模型分为下列几组：（1）RAPA联合CsA：A组：同时给予RAPA (0.1mg/kg/d)和CsA(5mg/kg/d)，腹腔注射×5天；B组：同时给予RAPA (0.5mg/kg/d)和CsA(5mg/kg/d)，腹腔注射×5天；C组：同时给予RAPA (1mg/kg/d)和CsA(5mg/kg/d)，腹腔注射×5天；（2）RAPA组：单独给予RAPA(1mg/kg/d)，腹腔注射×5天；（3）AA组:免疫介导再生障碍性贫血小鼠模型，不给予任何处理；（4）CsA组：单独给予CsA(5mg/kg/d)，腹腔注射×5天；（5）对照组：为正常昆明小鼠不给予任何处理。在造模后的不同时间点观察各组小鼠的一般情况，外周血白细胞、血小板等计数，小鼠股骨骨髓粒巨噬细胞集落单位数、有核细胞数及濒死时取股骨行病理切片，做HE染色，观察骨髓增生情况。用来源于各组小鼠脾脏的淋巴细胞行流式细胞检测，测定其CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+、CD4~+CD25~+细胞的表达。结果：1．AA组小鼠外周血白细胞、血小板数量在造模后开始降低，第8-14天降至最低(WBC0.42×109/L,PLT3.50×109/L)，14天存活率为0%。骨髓增生极度低下，有核细胞显著减少，脂肪细胞增加，脾淋巴细胞流式细胞检测CD3~+、CD3~+CD8~+、CD3~+CD4~+显著升高(CD3~+86.85%, CD3~+CD8~+53.48%, CD3~+CD4~+63.14%)，CD4~+CD25~+细胞降低（CD4~+CD25~+24.30%）。2.与AA组相比较，给药组中RAPA联合CsA组中的B组和C组在小鼠模型建立成功后14天，外周血细胞数开始持续上升。双侧股骨骨髓粒巨噬细胞集落单位数和有核细胞数显著增加（分别为A组：8.42×106/个股骨，50.20个集落数；C组：7.79×106/个股骨，48.20个集落数）。骨髓病理HE染色切片发现，有核细胞数剧增，造血功能显著改善。用流式细胞仪对脾脏淋巴细胞进行检测发现，CD3~+CD4~+和CD3~+CD8~+细胞的表达显著低于AA组，且与对照组无统计学差别（B组：p=1.00,C组：p=0.672,＞0.05）。3.各组小鼠脾脏CD4~+CD25~+T细胞表达中，RAPA联合CsA（C组）、单纯RAPA组较AA组显著升高，且与对照组无显著差别（C组: p=0.29,RAPA组：p=0.995,＞0.05）。CD4~+CD25~+的表达与RAPA给药剂量呈剂量依赖性。结论：1. X射线亚致死量（6Gy）全身均匀照射雌性昆明小鼠（受体）。在照射后4小时内，将雌性Balb/c小鼠（供体）胸腺淋巴结悬液经尾静脉注射入受体体内（1×106淋巴细胞/只），成功建立了再生障碍性贫血小鼠模型。2.RAPA具较强的免疫抑制疗效，与CsA联合运用两者能协同作用于免疫介导再生障碍性贫血小鼠T细胞活性的抑制，且对免疫介导AA小鼠免疫调节紊乱有纠正作用，改善其造血功能，可作为一种AA治疗的新对策。3. RAPA可刺激免疫介导AA小鼠体内CD4~+CD25~+细胞增殖。关键词：雷帕霉素论文动物模型论文再生障碍性贫血论文免疫抑制治疗论文造血功能论文
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ABSTRACT5-8
英文缩略词表8-11
第1章 引言11-13
第2章 材料与策略13-18

2.1 主要材料与仪器13-14

2.

1.1 实验动物13

2.

1.2 主要试剂13

2.

1.3 主要仪器及材料13-14

2.2 实验策略14-18

2.1 建立免疫介导再生障碍性贫血小鼠模型14

2.2 实验分组14-15

2.3 造模后各组小鼠外周血细胞计数15

2.2.4 造模后各组小鼠双侧股骨骨髓有核细胞的计数和粒巨噬细胞集落培养及计数15-16

2.5 造模后小鼠双侧股骨骨髓病理切片16

2.6 造模后各实验组小鼠脾脏淋巴细胞免疫分型检查16-17

2.7 数据统计学处理17-18

第3章 结果18-38

3.1 免疫介导AA小鼠模型的建立18

3.2 RAPA联合CSA对免疫介导AA小鼠模型造血功能的影响18-38

3.

2.1 给药时间的确定18-19

3.

2.2 不同浓度给药组小鼠一般情况及存活率19-21

3.

2.3 造模后小鼠外周血白细胞计数21-22

3.

2.4 造模后小鼠外周血血小板计数22-23

3.

2.5 小鼠股骨骨髓有核细胞集落数23-26

3.

2.6 小鼠股骨骨髓 HE 染色切片26-28

3.

2.7 各实验组小鼠脾脏淋巴细胞流式细胞仪检测28-38

第4章 讨论38-42

4.1 建立免疫介导性再生障碍性贫血小鼠模型38

4.2 雷帕霉素对免疫系统的作用38-40

4.3 雷帕霉素对调节性 T 细胞的影响40

4.4 雷帕霉素在再生障碍性贫血中的运用40-42

第5章 结论42-43
致谢43-44
参考文献44-47
攻读学位期间的探讨成果47-48
综述48-53
References52-53